Author response:

The following is the authors’ response to the original reviews

Public Reviews:

Reviewer #1 (Public review):

Summary:

This manuscript assesses the utility of spatial image correlation spectroscopy (ICS) for measuring physiological responses to DNA damage. ICS is a long-established (~1993) method similar to fluorescence correlation spectroscopy, for deriving information about the fluorophore density that underlies the intensity distributions of images. The authors first provide a technical but fairly accessible background to the theory of ICS, then compare it with traditional spot-counting methods for its ability to analyze the characteristics of γH2AX staining. Based on the degree of aggregation (DA) value, the authors then survey other markers of DNA damage and uncover some novel findings, such as that RPA aggregation inversely tracks the sensitivity to PARP inhibitors of different cell lines.

The need for a more objective and standardized tool for analyzing DNA damage has long been felt in the field and the authors argue convincingly for this. The data in the manuscript are in general well-supported and of high quality, and show promise of being a robust alternative to traditional focus counting. However, there are a number of areas where I would suggest further controls and explanations to strengthen the authors' case for the robustness of their ICS method.

Strengths:

The spatial ICS method the authors describe and demonstrate is easy to perform and applicable to a wide variety of images. The DDR was well-chosen as an arena to showcase its utility due to its well-characterized dose-responsiveness and known variability between cell types. Their method should be readily useable by any cell biologist wanting to assess the degree of aggregation of fluorescent tags of interest.

Weaknesses:

The spatial ICS method, though of longstanding history, is not as intuitive or well-known as spot-based quantitation. While the Theory section gives a standard mathematical introduction, it is not as accessible as it could be. Additionally, the values of TNoP and DA shown in the Results are not discussed sufficiently with regard to their physical and physiological interpretation.

We agree that a major limitation in adaption of this approach is a deeper understanding of the theory and results. We have updated the theory section to include further discussion (Page 4 line 132)

The correlation of TNoP with γH2AX foci is high (Figure 2) and suggestive that the ICS method is suitable for measuring the strength of the DDR. The authors correctly mention that the number of spots found using traditional means can vary based on the parameters used for spot detection. They contrast this with their ICS detection method; however, the actual robustness of spatial ICS is not given equal consideration.

We found it difficult to give equal consideration of robustness to ICS. The major limitation of traditional approaches is proper selection of an intensity threshold that is necessary to define and separate foci from background intensity. However, ICS does not employ a threshold, therefore we could not test different thresholding applications in ICS as we did with traditional methods. In our view the absence of the need for a threshold is profoundly advantageous. The only inputs we employ in the ICS analysis are used to segment cell nuclei, yet these have no impact on the ICS calculation and are necessary for any analysis of the DDR.

Reviewer #2 (Public review):

Summary:

Immunostaining of chromatin-associated proteins and visualization of these factors through fluorescence microscopy is a powerful technique to study molecular processes such as DNA damage and repair, their timing, and their genetic dependencies. Nonetheless, it is well-established that this methodology (sometimes called "foci-ology") is subject to biases introduced during sample preparation, immunostaining, foci visualization, and scoring. This manuscript addresses several of the shortcomings associated with immunostaining by using image correlation spectroscopy (ICS) to quantify the recruitment of several DNA damage response-associated proteins following various types of DNA damage.

The study compares automated foci counting and fluorescence intensity to image correlation spectroscopy degree of aggregation study the recruitment of DNA repair proteins to chromatin following DNA damage. After validating image correlation spectroscopy as a reliable method to visualize the recruitment of γH2AX to chromatin following DNA damage in two separate cell lines, the study demonstrates that this new method can also be used to quantify RPA1 and Rad51 recruitment to chromatin following DNA damage. The study further shows that RPA1 signal as measured by this method correlates with cell sensitivity to Olaparib, a widely-used PARP inhibitor.

Strengths:

Multiple proof-of-concept experiments demonstrate that using image correlation spectroscopy degree of aggregation is typically more sensitive than foci counting or foci intensity as a measure of recruitment of a protein of interest to a site of DNA damage. The sensitivity of the SKOV3 and OVCA429 cell lines to MMS and the PARP inhibitors Olaparib and Veliparib as measured by cell viability in response to increasing amounts of each compound is a valuable correlate to the image correlation spectroscopy degree of aggregation measurements.

Weaknesses:

The subjectivity of foci counting has been well-recognized in the DNA repair field, and thus foci counts are usually interpreted relative to a set of technical and biological controls and across a meaningful time period. As such:

(1) A more detailed description of the numerous prior studies examining the immunostaining of proteins such as γH2AX, RAD51, and RPA is needed to give context to the findings presented herein.

We apologize for not providing enough detail. We have added further references and discussion. γH2AX foci counting, in particular, has been used in thousands of previous studies. (Pages 18 line 513 and 517)

(2) The benefits of adopting image correlation spectroscopy should be discussed in comparison to other methods, such as super-resolution microscopy, which may also offer enhanced sensitivity over traditional microscopy.

Thank you for raising this point. We have added this discussion (page 19 line 553). The limiting factor that ICS addresses is the partition coefficient of signal in a foci or cluster versus outside the cluster. Super-resolution will not necessarily improve this unless it is resolved down to single molecule counting. However, one would still need to evaluate how to define a cluster or foci in the background of non-cluster distribution.

(3) Additional controls demonstrating the specificity of their antibodies to detection of the proteins of interest should be added, or the appropriate citations validating these antibodies included.

We have added text stating that we only use validated antibodies (page 6 line 193). One thing to note is that we are measuring differences between treatment conditions, thus, if an antibody has non-specific labeling of proteins of cellular structures that do not change upon treatment, our approach would overcome this limitation.

Reviewer #3 (Public review):

Summary:

This paper described a new tool called "Image Correlation Spectroscopy; ICS) to detect clustering fluorescence signals such as foci in the nucleus (or any other cellular structures). The authors compared ICS DA (degree of aggregation) data with Imaris Spots data (and ImageJ Find Maxima data) and found a comparable result between the two analyses and that the ICS sometimes produced a better quantification than the Imaris. Moreover, the authors extended the application of ICS to detect cell-cycle stages by analyzing the DAPI image of cells. This is a useful tool without the subjective bias of researchers and provides novel quantitative values in cell biology.

Strengths:

The authors developed a new tool to detect and quantify the aggregates of immunofluorescent signals, which is a center of modern cell biology, such as the fields of DNA damage responses (DDR), including DNA repair. This new method could detect the "invisible" signal in cells without pre-extraction, which could prevent the effect of extracted materials on the pre-assembled ensembles, a target for the detection. This would be an alternative method for the quantification of fluorescent signals relative to conventional methods.

Recommendations for the authors:

Reviewer #1 (Recommendations for the authors):

Major comments:

(1) The ICS theory section is essential and based on an excellent review from one of the authors. It would benefit greatly from a diagram showing where the quantities 𝒈(𝟎, 𝟎), 𝝎𝟎, and 𝒈inf come from in the 2D Gaussian fit, ideally for two cases where these quantities differ (i.e., how they correspond to different DA or TNoP values). In my opinion, this addition would greatly increase the manuscript's accessibility for DDR researchers. The citation of the review at the beginning would also be a plus.

We have added the review citation at the front of the theory section (page 3 line 87).We have highlighted where g(0,0), the most critical measurement for determination of TNoP and DA, derives from in Figure 2D. However, it is difficult to describe all the curve fit parameters in an image as they have some interdependency on each other and thus labeling one in a single image would not independently capture how they might be observed in a different curve fit.

(2) The TNoP measured in Figure 2 is a quantity about 2000-3000 times greater than the number of "traditionally detected" foci by both methods and the linear relations have very low Y intercepts. Can the authors comment explicitly on the physical interpretation of this number - are 2 to 3 thousand independent particles present within each "focus" detected by traditional means? If so, then what might one "particle" correspond to? (a single secondary antibody or fluorophore? a nucleosome?). In a similar vein, the X intercepts lie at around 25 foci, meaning that in images with fewer than that number of foci detected by ImageJ or Imaris, the ICS method should detect zero TNoP - is this in line with the authors' predictions? Is it possible that a first-order line fit is not the most appropriate relation between the two methods?

We apologize for our brevity here. Since DA proved to be a more useful metric we did not spend much effort discussing TNoP. TNoP correlates to the number of clustered particles, or non-diffuse fluorophores. TNoP is the inverse of the number of individual particles per nucleus, but the value is not a direct measure of foci. If a sample had no clustering at all, the number of individual particles would be at a maximum and the TNoP would be at a minimum. However, as fluorophores cluster, the number of individual particles (i.e. non-clustered fluorophores) decreases, which increases the TNoP value. Therefore, TNoP has a correlation to the number of foci detected through traditional measurements, as we found here. Yet, TNoP is a relative measurement and cannot be compared across different conditions. Similar to foci counting, TNoP is unable to factor the size or intensity of each cluster, thus DA is a more appropriate quantification of the DNA damage response.

The value of TNoP is dependent on the fitted point spread function and the area of the nucleus. The y=0 intercept of TNoP is defined by the optical setup and is not expected to necessarily go through x=0. Intriguingly, other groups have found that some foci identified through traditional measurements are actually clusters of multiple smaller foci, thus the concept of what a foci represents is difficult to interpret. Thus, here we aimed to show a general correlation of TNoP with foci count through traditional methods to reflect how ICS is similar to foci counting, then employed DA to overcome the limitations of defining a foci.

We have tried to clarify this in the text (page 8, line 266)

(3) Some suggestions to address the robustness of ICS:

For a given sample (i.e. one segmented nucleus), the calculation of DA and TNoP should be similar between different images of that same nucleus taken at different times, similar to how the number of traditionally detected foci would be fairly invariant. In particular, it should be shown that these values are not just scaling with the higher normalized intensity seen in stronger DDR responses. In the same vein, the linear relationship between TNoP and "foci" should not change even if the confocal settings are slightly different (i.e., higher/lower illumination intensity) as long as the condition stipulated by the authors in the Discussion holds ("ICS can be implemented on any fluorescence image as long as the square relative fluorescence intensity fluctuations are detectable above noise fluctuations."). To show, as the title states, that spatial ICS is a robust tool, it would be desirable to demonstrate this with a series of images of the same cell at the same or varying excitation intensities.

Thank you for your suggestions. Indeed, the calculation will be the same over sequential images of the same cell. Observations of dose dependent DA that does not correlate with intensity for RPA1 and RAD51 results (Fig. S5) directly demonstrates that DA does not just scale with intensity.

We would not expect the TNoP to change with confocal setting, however we show in Figure 1 that the number of foci does indeed change with intensity settings as captured by thresholds. Therefore, any interpretation of TNoP vs. foci count would be very difficult to make at different microscope settings. To ensure we are fairly comparing ICS to existing analysis we keep the settings the same and measure changes between conditions.

(4) More information is needed on how intensity normalization was performed. The Methods states "Measurements across experiments were normalized by the control in each dataset." The DMSO (0mM drug) plots all appear to have a mean of 1.0, so it appears the values for each set of control nuclei were divided by their own mean, and then the values for each set of experimental nuclei were divided by the mean value of all 3 controls as an aggregate; is this correct?

We apologize for not being more clear. Thank you for raising this point. We normalized data to a control from each experimental group. Thus, in figures 3,4 and 5 data were collected over multiple experiments with one control per experiment and each treatment condition included in each experiment. Therefore, we normalized each result to the corresponding control from that imaging session. However, in Figure 8 we ran experiments at much higher throughput with multiple controls per experiment, thus the data were normalized to the overall average of the controls, which is why the control averages are not all at a value of 1. We have clarified this in the text. (Page 7 line 218).

(5) Some more information about the ICS analysis should be given if the full code is not provided - in particular, how the nucleus mask was implemented on the "signal" channel (were the edges abruptly set to zero or was a window function introduced to avoid edge effects in the discrete FFT?

Thank you for raising this point. We have added the code to GitHub - github.com/ dubachLab/ics. The signal region was established by simply applying the nuclear mask from the DAPI channel to the IF channel. Each region is padded with average intensity value at the edges for 2x the dimensions of the ROI to remove edge effects in the FFT.

Minor comments:

(1) Figure 3, 4, 5: I think it would aid figure readability if channels were labeled in the images themselves, not just in the legend.

Thank you for the suggestion, we tried doing this and struggle to fit a label with the layout of the images. We were also concerned about interpretation of data in each column and the potential to assign data to each figure if they were so prominently labeled.

(2) Supplemental Figures are mislabeled; the order given in the legends is S1, S2, S3, S2, S3. S4 is called out in the main text where it should be S5.

Thank you for catching this error. We have made the necessary corrections. S4 contains data on cellular response to the drugs, while S5 contains intensity data in response to MMS.

(3) It should be stated for each Figure what kind of microscopy was performed - I assume that it is confocal for everything except when widefield is explicitly stated, but for clarity please add this information.

Indeed, this is correct, we have indicated which microscopy was used for each figure.

(4) The MATLAB code and full (uncropped) Western blots should be provided as supplemental data if possible.

We have included a GitHub link for the code and un-cropped western blots.

(5) The p values from significance tests should indicate whether multiple comparisons correction was necessary (if suggested by Prism) and performed.

Apologies for a lack of clarity but this was not necessary, significance was calculated vs. the next lower dose (e.g. 10 micromolar vs. 1 micromolar). We have clarified this in the methods (page 7 line 221).

Reviewer #2 (Recommendations for the authors):

Major points:

In addition to the weaknesses noted above, to encourage widespread adoption of this method, the authors should make the tools that they used for their analysis publicly available. In a few instances (e.g., compare Figures 3J and 3L), other methods outperform DA. It would be meaningful to discuss when especially DA may be a better measure than others (such as intensity or number of foci).

We have made code available on Github. We expect results, such as those in Figures 3J and 3L where intensity is significantly higher at the highest concentration but DA is not are reflective of the underlying biology and this may be interpreted differently under different experimental conditions. Imaris spots (Fig. 3K) also does not capture a significant increase at the highest dose of olaparib, suggesting that intensity may raise but it doesn’t not generate more foci. These results are likely highly dependent on the mechanism of olaparib at such a high concentration and the DDR response. We are hesitant to draw biological conclusions from these results and instead would like to highlight the capacity of ICS to evaluate the DDR, therefore we don’t want to make any broad comments about different applications.

Minor points:

(1) Pg. 12: "We used MMS to induce DNA damage in SKOV3 and OVCA429 cells. As expected, normalized intensity for RPA1 and RAD51 values (Figure S5) did not display a dose dependence on MMS concentration."

Please provide a citation for the claim that RPA1 and RAD51 normalized intensities do not display a dose dependence on MMS concentration.

These were data that we generated. We were not expecting an intensity change as that would presumably require increased protein generation in response to MMS, compared to gH2AX where the phospho-specific H2AX is generated in the DDR.

(2) Pg. 12: "Similar to RPA1, RAD51 does not form distinguishable foci in the nuclei in cells without preextraction (Fig. 5)." Please provide a citation for this claim.

We did not do pre-extraction and our results don’t produce changes in distinguishable foci. We provided citations discussing how, without pre extraction, foci formation for these proteins is not obvious (REF 38 and 39).

(3) I noted that the authors cite one paper [38] apparently showing that RPA and Rad51 do not always form foci, however, this is in the C. elegans germline in response to micro irradiation, therefore I am not sure that it is applicable to human cells.

We apologize for referencing a paper on C elegans. Most papers looking at RPA and RAD51 in the DDR use pre-extraction as it seems necessary to observe foci. Therefore, there are not as many papers, that we could find, that do not use pre-extraction. Reference 39 is in Hela cells.

Reviewer #3 (Recommendations for the authors):

Major points:

(1) Page 8, the second paragraph: In the Result section, it is better to describe how the authors carried out immuno-staining (without pre-extract subtraction) and ICS briefly, although the method is described in detail in the Method section.

Thank you for the suggestion, we have added this description (page 8, line 259)

(2) In Figure 5K-P: The authors analyzed "invisible" RAD51 foci on the image (Fig. 5L, M, O, and P) without pre-extraction. As a control experiment, it is useful to check whether pre-extraction would provide "visible" RAD51 foci and to examine the similar MMS concentration dependency shown in Figure 5R (or 5T). This would strengthen the power of the ICS analysis.

Thank you for the suggestion. In our hands, pre-extraction is extremely subjective. We have tried performing pre-extraction but find highly variable results depending on conditions. Therefore, we did not include any pre-extraction here. We expect that performing these experiments may or may not agree with results in Figure 5 largely because we are unable to achieve repeatable pre-extraction foci counting.

(3) Figure 6D (and 6C) looks very interesting. It would be important to show the interpretation of this correlation shown in the graph. Although the authors argued that ICS analysis results shown in the graph could provide new insight into the DDR (page 14, last line 5), as shown in another part, it is important to carry out the same analysis by using Imaris Spots. Moreover, it is interesting to apply the analysis to RAD51 foci (shown in Figure 5), given that the PARPi effect is enhanced in the absence of RAD51mediated recombination.

We completely agree that this analysis may generate interesting results to help interpret the DDR response to PARP inhibition. These experiments are part of an ongoing follow up study where we extend the use of ICS to other parts of the DDR and investigate protein clustering across several proteins with impact on PARPi response. Therefore, since the focus of this manuscript is introducing ICS as a tool to study the DDR, we believe that omitting those data here does not deter from the central points of the manuscript. We including results in Figure 6 because we wanted to show how ICS could impact DDR research. Furthermore, combined with our advances shown in Figures 7 and 8, we are currently working on adapting ICS to be high-throughput and much simpler than Imaris spots for handling large datasets needed to generate results like those in Figure 6.

Minor points:

(1) Figure 1I, blue arrows: These showed an area with a higher background. Because of a low magnification, it is very hard to see the difference from the other areas of the background. It is better to show a magnified image of the representative region with a higher background.

We hope that readers can see the higher intensity in the diffuse area. We attempted to construct a zoomed in area, but that either blocked a significant portion of the nonzoomed image or added complexity to the figure. We have noted that images in Figure S1 are larger and more obviously capture an increase in background intensity.

(2) Figure 2 legend, line 5, the same as "A)": This should be "B".

Here, the number of independent particle clusters is intended to be the same as A, the difference is that the independent particles are clusters in C and individual fluorophores in A.

(3) Page 9, the first paragraph, last line, foci formation, and foci composition: These should be "focus formation and focus composition".

We have changed this.

(4) Page 15, the first paragraph, line 5, palbociclib, camptothecin, or etoposide: please explain what kinds of the drugs are.

We have added that these drugs cause cells to stall at different cell cycle stages. Explaining the drugs would take considerable room in the text.

(5) Page 16, the first paragraph, line 1, bleomycin: Please explain what this drug is.

Similar to above, we have stated that this drug causes DNA damage, going into detail would take several sentences.

Author response:

The following is the authors’ response to the original reviews

Public Reviews:

Reviewer #1 (Public review):

Summary:

Triple-negative breast cancer (TNBC) accounts for approximately 15-20% of all breast cancers. Compared to other types of breast cancer, TNBC exhibits highly aggressive clinical characteristics, a greater likelihood of metastasis, poorer clinical outcomes, and lower survival rates. Immunotherapy is an important treatment option for TNBC, but there is significant heterogeneity in treatment response. Therefore, it is crucial to accurately identify immunosuppressive patients before treatment and actively seek more effective therapeutic approaches for TNBC patients.

Strengths:

In this work, the authors collected and integrated data from single cells and large volumes of RNA sequencing and RNA-SEQ to analyze the TME landscape mediated by genes associated with iron death. On this basis, the prediction model of prognosis and treatment response of 131 patients was constructed using a machine learning algorithm, which is beneficial to provide individualized and precise treatment guidance for breast cancer patients.

Thank you for your appreciation of our work. We are encouraged by your positive feedback and will continue to explore new avenues in personalized medicine for breast cancer.

Weaknesses:

However, there are still some issues that need to be clarified:

(1) The description of the research background is too brief and concise, and it is necessary to add some information about the limitations of existing methods and the differences and advantages of this study compared with other published relevant studies, so as to better highlight the necessity and research value of this study.

Thank you for your suggestions. We have supplemented the research background and compared the differences between this study and other studies, further highlighting the research value of our study.

(2) This study is a retrospective analysis of a public data set and lacks experimental validation and prospective experiments to support the results of bioinformatics analysis. This should be added to the acknowledgment of limitations in the study.

Thank you for the constructive feedback. We also acknowledge that the lack of experimental evidence is one of the limitations of this study. Therefore, we plan to conduct in vivo and in vitro experiments in our future research to support the findings of our bioinformatics analysis, and have already supplemented the relevant content in the limitations of Discussion.

Reviewer #2 (Public review):

Summary:

This study aims to explore the ferroptosis-related immune landscape of TNBC through the integration of single-cell and bulk RNA sequencing data, followed by the development of a risk prediction model for prognosis and drug response. The authors identified key subpopulations of immune cells within the TME, particularly focusing on T cells and macrophages. Using machine learning algorithms, the authors constructed a ferroptosis-related gene risk score that accurately predicts survival and the potential response to specific drugs in TNBC patients.

Strengths:

The study identifies distinct subpopulations of T cells and macrophages with differential expression of ferroptosis-related genes. The clustering of these subpopulations and their correlation with patient prognosis is highly insightful, especially the identification of the TREM2+ and FOLR2+ macrophage subtypes, which are linked to either favorable or poor prognoses. The risk model thus holds potential not only for prognosis but also for guiding treatment selection in personalized oncology.

Thank you for your thorough review and insightful comments.

Weaknesses:

The study has a relatively small sample size, with only 9 samples analyzed by scRNA-seq. Given the typically high heterogeneity of the tumor microenvironment (TME) in cancer patients, this may affect the accuracy of the conclusions. The scRNA-seq analysis focuses on the expression of ferroptosis-related genes in various cells within the TME. In contrast, bulk RNA sequencing uses data from tumor samples, and the results between the two analyses are not consistent. The bulk RNA sequencing results may not accurately capture the changes happening in the microenvironment.

Thank you for your constructive feedback. Although this study only included 9 samples, given the limited availability of scRNA-seq datasets for untreated TNBC in public databases, we chose to utilize a dataset that contains a relatively larger number of untreated TNBC samples. We are fully aware of the complexity and high heterogeneity of the TME. Despite the limited sample size, we first conducted rigorous quality control on the data and, based on this, preliminarily revealed the landscape of the TME mediated by ferroptosis-related genes. These findings provide a new perspective for understanding the biological mechanisms underlying the onset and progression of breast cancer. To enhance the reliability and generalizability of our research results, we plan to strive to expand the sample size in future work and consider integrating other omics technologies, such as proteomics and metabolomics, with scRNA-seq data for a more in-depth exploration of the complex interactions within the TME.

We also agree with your viewpoint that scRNA-seq data reveals gene expression within individual cells, while bulk RNA-seq data reveals the average gene expression in tumor tissues, and there are differences in data acquisition and processing methods between the two. However, we believe that there are also some close connections between them in terms of gene expression levels. By comparing the expression specificity of marker genes for specific cell types in breast cancer tissues, we found that they are correlated with patient prognosis, and the results have been validated in both internal and external validation sets. Thank you once again for your valuable suggestions, which will play an important guiding role in our subsequent research.

Reviewer #1 (Recommendations for the authors):

(1) The breast cancer scRNA-seq dataset files of GSE176078 include 10 TNBC primary tumors (DOI:10.1016/j.compbiomed.2023.107066). However, in this study, only 9 cases were listed, please explain the reason for the data exclusion.

Thank you for your questions. Although it was clearly stated in the original paper that "To elucidate the cellular architecture of breast cancers, we analyzed 26 primary pre-treatment tumors, including 11 ER+, 5 HER2+ and 10 TNBCs, by scRNA-Seq (Supplementary Table 1)," upon downloading and carefully examining the patient information in Supplementary Table 1, we only included 9 patients explicitly labeled as TNBC in our study (https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9044823/#SD1).

(2) The description of the technique in the methods section should be more detailed, such as parameter settings, quality control standards, etc.

Thank you for your valuable suggestions. We have already supplemented the relevant content in the methods section.

(3) Please check and correct formatting errors to improve readability, such as lines 176 and 177.

We were really sorry for our careless mistakes. Thank you for your reminder. We have corrected the “Pseudotime analysis with scRNA-seq data helps to obtain an approximate landscape of gene expression dynamics” into “Pseudotime analysis of scRNA-seq snapshot data helps to provide an approximate landscape of gene expression dynamics”. And we have further checked and revised the formatting errors of the manuscript.

Reviewer #2 (Recommendations for the authors):

(1) In multiple sections of the paper, abbreviations are used without being defined when first mentioned.

We were really sorry for our careless mistakes. Thank you for your reminder. We have already added definitions for the abbreviations in both the abstract and the main text.

(2) The authors should analyze whether the transcription factors in Figure 2 are correlated with the expression of ferroptosis-related genes.

Thank you for your valuable feedback. Some transcription factors in Figure 2 correlate with the expression of ferroptosis-related genes, which we have supplemented in the Discussion.

(3) Figures 3d and 4e lack explanations for the axis values, and for Figure 4e, is the unit of the y-axis labeled "survival" in days?

Thank you for your valuable feedback. We apologize for the lack of explanations for the axis values in Figures 3d and 4e and we have made revisions to both figures accordingly. We have noted that the unit "survival" on the y-axis of Figure 4e is in years, and we have already made the necessary supplement to clarify this. Thank you very much for your reminder.

(4) The authors conducted their analysis using public databases but did not cite the original literature, nor did they discuss the similarities and differences between their findings and those in the original studies.

Thank you for your valuable suggestions, and we deeply apologize for our carelessness. We have supplemented the original literature in the references and discussed the differences between this study and the original literature in the Discussion.

(5) Some figures, particularly those involving heatmaps and t-SNE plots (e.g., Figures 1 and 3), present dense and complex data that may be challenging for readers to interpret. The heatmaps (Figure 1e-f and 3d) include many genes, but it is unclear how these genes were selected, and the scale of gene expression differences is difficult to interpret. Simplifying these figures by focusing on the most differentially expressed and clinically relevant genes (e.g., those with prognostic value) would improve readability.

Thank you for your valuable suggestions. The t-SNE plots in Figures 1 and 3 primarily serve as a dimensionality reduction technique to visually present the clustering of multiple cells or samples based on gene expression, aiding readers in quickly identifying cell subpopulations. The heatmaps, on the other hand, are mainly used to showcase the differential expression of ferroptosis-related genes across different clinicopathological classifications and cell subpopulations, with varying shades of color helping readers quickly recognize gene expression differences among different cell subpopulations. The genes included in the heatmaps (Figures 1e-f and 3d) are sourced from the FerrDb website. We have uploaded the list of ferroptosis-related genes used in this study as Supplementary Table 1 and added the relevant steps in Method 2.3.

(6) The study analyzes the expression of ferroptosis-related genes in different immune cells within the TME. The authors should discuss how these changes in gene expression may impact the function and behavior of immune cells.

Thank you for your valuable feedback. We have supplemented the discussion with detailed effects of the main differential genes (FOLR2 and TREM2) on the tumor immune response.

(7) The authors analyzed the expression of ferroptosis-related genes in immune cells using single-cell sequencing data. However, they subsequently applied the selected genes to perform a risk factor analysis in tumor cells. Is the expression and function of these genes the same in immune cells and tumor cells? This seems questionable.

Thank you very much for your suggestion. We also believe that there may be differences in the expression and function of genes between immune cells and tumor cells. However, some genes may exhibit similarities in their expression and function in immune cells and tumor cells, especially within the tumor immune microenvironment, due to the complex and tight interactions between immune cells and tumor cells (as shown in Figures 1d and 2h), and their expression levels can be related to the onset, progression, and prognosis of tumors.

(8) While the risk score model based on ferroptosis-related genes is promising, it lacks experimental validation, which weakens the strength of the conclusions. The authors should consider conducting in vitro or in vivo experiments. These functional studies would provide essential evidence to support the model's predictive capability.

Thank you for the constructive feedback. We fully recognize the importance of conducting functional studies to substantiate the predictive capability of the model. Therefore, we plan to conduct in vitro and in vivo experiments in our future research to provide the necessary evidence and further validate the model's effectiveness.

(9) The manuscript predicts sensitivity to 27 drugs based on the risk score, but it lacks mechanistic insight into why patients in the high-risk group might be more responsive to certain drugs. Including a more detailed discussion of the molecular mechanisms underlying this drug sensitivity, particularly linking ferroptosis-related genes to drug metabolism or efficacy, would provide a stronger rationale for the clinical application of these findings.

Thank you very much for your valuable suggestions. In the discussion, we thoroughly analyzed the mechanism of action of the drugs (ABT-263 and erlotinib) with the greatest difference in sensitivity between high-risk and low-risk groups, as well as their correlation with ferroptosis.

Author response:

The following is the authors’ response to the previous reviews

Public Reviews:

Reviewer #1 (Public review):

Summary:

In this revised report, Yamanaka and colleagues investigate a proposed mechanism by which testosterone modulates seminal plasma metabolites in mice. The authors identify oleic acid as a particularly important metabolite, derived from seminal vesicle epithelium, that stimulates linear progressive motility in isolated cauda epidydimal sperm in vitro. The authors provide additional experimental evidence of a testosterone dependent mechanism of oleic acid production by the seminal vesicle epithelium.

Strengths:

Often, reported epidydimal sperm from mice have lower percent progressive motility compared with sperm retrieved from the uterus or by comparison with human ejaculated sperm. The findings in this report may improve in vitro conditions to overcome this problem, as well as add important physiological context to the role of reproductive tract glandular secretions in modulating sperm behaviors. The strongest observations are related to the sensitivity of seminal vesicle epithelial cells to testosterone. The revisions include addition of methodological detail, modified language to reflect the nuance of some of the measurements, as well as re-performed experiments with more appropriate control groups. The findings are likely to be of general interest to the field by providing context for follow-on studies regarding the relationship between fatty acid beta oxidation and sperm motility pattern.

Thank you for summarizing and your positive evaluation of our study.

Weaknesses:

Support for the proposed mechanism is stronger in this revised report than in the previous report, but there are many challenges in measuring sperm metabolism and its direct relationship with motility patterns. This study is no exception and largely relies on correlations between various experiments in lieu of direct testing. Additionally, the discussion is framed from a human pre-clinical perspective, and it should be noted that the reproductive physiology between mice and humans is very different.

Thank you for pointing out the challenges in our paper. We appreciate your comment on the limited evidence supporting the direct relationship between sperm metabolism and motility patterns under current experimental conditions. Based on your and reviewer2’s suggestions, we have decided to remove the experiments and discussion on the “effects of OA on sperm metabolism, motility and fertility (Fig. 7, Supplemental Figure 5A and C-F.)” and the corresponding parts in the Discussion section from the paper. (See also Reviewer 2's main comment) These data mainly show correlations, and did not show direct evidence of causality. Instead, we added a new experiment to the manuscript, in which a lipid mixture that mimics the fatty acid profile secreted testosterone-dependently from seminal vesicle epithelial cells was added to the sperm culture medium (New Supplemental Figure 5, Lines 259-268). In this experiment, motility parameters were measured using CASA. This experiment evaluates the direct effects of lipid exposure on sperm motility. With these revisions, we are able to focus on the metabolic changes caused by testosterone in seminal vesicle epithelial cells, which are the central focus of our research. We have added a short statement agreeing the potential importance of OA and our intention to more rigorously investigate the role of OA in sperm function in subsequent studies (Lines 402-407).

Furthermore, we have revised text, clearly state the limitations of the species difference and clarify that the translational aspects to humans are speculative (Lines 383-384, 395-397, 408-410).

We appreciate your guidance. We believe that these changes will strengthen our research.

Reviewer #2 (Public review):

Using a combination of in vivo studies with testosterone-inhibited and aged mice with lower testosterone levels as well as isolated mouse and human seminal vesicle epithelial cells the authors show that testosterone induces an increase in glucose uptake. They find that testosterone induces a difference in gene expression with a focus on metabolic enzymes. Specifically, they identify increased expression of enzymes regulating cholesterol and fatty acid synthesis, leading to increased production of 18:1 oleic acid. The revised version strengthens the role of ACLY as the main regulator of seminal vesicle epithelial cell metabolic programming. 18:1 oleic acid is secreted by seminal vesicle epithelial cells and taken up by sperm, inducing an increase in mitochondrial respiration. The difference in sperm motility and in vivo fertilization in the presence of 18:1 oleic acid and the absence of testosterone, however, is small. Additional experiments should be included to further support that oleic acid positively affects sperm function.

Thank you very much for carefully reading the manuscript and for your comments. We appreciate your understanding that the role of ACLY in metabolic programming of seminal vesicle epithelial cells has been strengthened in the revised version. On the other hand, we agree with your view that the increase in sperm motility and fertilization rate by oleic acid is minimal under the current experimental conditions. We agree that further evidence is needed to support our conclusion regarding the positive effects of oleic acid on sperm function. Based on your comments and our re-evaluation of the data, we have decided to remove the experiments and discussion on “OA and sperm motility” from the current paper (Fig. 7, Supplemental Figure 5A and C-F). In the revised paper, we have significantly toned down the claims on the previous role of oleic acid and instead focused on the metabolic regulatory mechanisms of seminal vesicle epithelial cells.

We hope that these revisions address your concerns and improve the overall clarity of the manuscript.

Recommendations for the authors:

Note from the reviewing editor: The reviewers agree that the revised manuscript is significantly improved and view the work as important. Both reviewers agree that the evidence for testosterone effects on seminal vesicle epithelial cells to support fatty acid synthesis is strong and suggest that the authors tone down their conclusion of oleic acid effect on sperm motility as the effect is very small. With this minor changes, the evidence to support the conclusion of the study is viewed as solid.

Thank you for recognizing the improvements that we have made to our manuscript and for appreciating the importance of our research. We also appreciate your assessment that the evidence for the effect of testosterone on seminal vesicle epithelial cells that support fatty acid synthesis is solid.

On the other hand, we agree with the two reviewers that the effect of oleic acid on sperm motility is limited and that the relevant data do not measure a direct relationship. Therefore, we have decided to withdraw the data set on the effect of oleic acid on sperm (Fig. 7, Supplemental Figure 5A and C-F) and focus this paper on seminal vesicle epithelial cells (in response to reviewer 2's suggestion). Given that testosterone-induced lipid (Fatty acid) synthesis in seminal vesicle epithelial cells is a key aspect of our study, we have included additional experiments in the revised manuscript to show how lipids affect sperm (New Supplemental Figure5, Lines 259-263).

With these revisions, the manuscript emphasizes the importance of testosterone-dependent fatty acid synthesis in seminal vesicle epithelial cells and the fact that this includes oleic acid. The title has also been partially revised in line with these revisions.

Reviewer #1 (Recommendations for the authors):

Minor Comments:

(1) The authors indicate in the methods that extracellular flux analysis was normalized to cell count. However, the y-axis units in Figs 4, 8, 9 and SFig 9 are not normalized.

(2) The OA label appears to be missing from Fig 7A. Additionally, the scale bar is offset in one of the images and the length of the scale bar does not appear to be mentioned in the figure legend.

Thank you for raising these points. We have corrected.

Fig. 7 has been withdrawn in response to Reviewer 2's suggestion.

Reviewer #2 (Recommendations for the authors):

With the experiments included in their revised version the authors strengthen their conclusions about testosterone-induced metabolic reprogramming in seminal vesicle cells resulting in reduced proliferation. The experiments surrounding ACLY are well-designed and give insights into the underlying molecular mechanisms. For other parts, the manuscript became less clear and it is often hard to follow the author's line of thoughts for their conclusions.

Based on the experiments shown in the manuscript this reviewer is still not convinced that OA positively affects sperm function. The changes in linear motility are minor, blastocyst levels are lower and the authors do not show that OA alone positively affects cleavage rate during AI. Without additional experiments that show a stronger effect on sperm function, the authors should consider focusing the manuscript exclusively on seminal vesicle epithelial cells.

Thank you for your constructive comments on our paper. We thank the reviewer for pointing out that the effect of oleic acid (OA) on sperm function is limited in our current experiments. As reviewer 1 also pointed out, we agree that further experiments and improved methodology are needed to reliably demonstrate the functional effects of OA on sperm. Because the strength of the data on the direct relationship between fatty acids in seminal fluid and improved sperm function is currently insufficient, we have removed the data set for oleic acid and sperm motility (Fig. 7, Supplemental Figure 5A and C-F) and focused on the “the mechanism of metabolic regulation of testosterone in seminal vesicle epithelial cells”. We have consistently narrowed the focus of the paper to the theme of “how testosterone changes energy metabolism in seminal vesicle epithelial cells”. In accordance with this change, the structure of the paper has also been partially revised (red text in the manuscript). With these revisions, the main point of the paper focuses on the mechanism by which testosterone regulates metabolic pathways in the seminal vesicle epithelial cells.

For more detailed revisions, please see the responses to your comments below.

(1) 45-55 still need major revision. It will not become clear to the reader what the authors mean by epididymal maturation. 'Ability to fertilize in in vitro?' Epididymal sperm are moving linearly in the absence of seminal vesicle fluid. Increased progressive motility, hyperactivation, and the ability to undergo the acrosome reaction are induced upon exposure to seminal vesicle fluid. The authors should introduce the concept of capacitation and that capacitation can be induced in vitro by exposure to bicarbonate and a cholesterol acceptor.

Thank you for pointing out the ambiguity of epididymal maturation, the need to clarify the concept of capacitation, and the role of seminal plasma in this context. The revised text explains that epididymal maturation only gives sperm their potential ability to fertilize. It also explains that it is the subsequent capacitation process—inducible in vitro by incubation with bicarbonate and cholesterol acceptors—that gives full fertilization potential. On the other hands, we emphasize that in vivo, seminal plasma, which contains both capacitation-promoting and decapacitation factors, plays a key role in fine-tuning the timing of capacitation, ensuring that sperm acquire fertilization competence at the appropriate moment. We hope that these revisions clarify our intended meaning and strengthen the overall message of the paragraph. (lines 42-54)

“Sperm that have completed spermatogenesis in the testis acquire their potential to fertilize while maturing in the epididymis (5–7). The physiological change of sperm during fertilization process are collectively referred to as “capacitation”. This change includes a large amplitude of flagella (called hyperactivation) and developing the capacity to undergo the acrosome reaction, and can be induced by culturing sperm collected from the epididymis in a medium containing bicarbonate and cholesterol acceptors (8, 9). However, once capacitation is complete, sperm cannot maintain that state for a long time. Therefore, even if epididymal sperm that have not been exposed to seminal plasma are artificially inseminated into the cervix or uterus, the fertilization rate remains low (10–12). That is because, in vivo, during ejaculation, exposure of epididymal sperm to seminal plasma masks the unintended capacitation as they pass through the female reproductive tract and ensures fertilization of sperm that reach the oviduct (13). In other words, seminal plasma plays an important role in fine-tuning the timing of sperm capacitation and in maintaining the sustained sperm motility needed to reach the oviduct.”

(2) 81: Similar as in their rebuttal the authors should further elute on the connection between fructose, citrate, and testosterone. That still does not become clear. Based on the author's explanation in the rebuttal, why are citrate and fructose levels higher when the animals are castrated?

We thank you for the opportunity to clarify our statement regarding the relationship between fructose, citrate, and testosterone. Our original explanation was intended to reflect the fact that testosterone from the testes has a stimulating effect on the accessory reproductive glands, and to report that the concentrations of fructose and citric acid were higher in the non-castrated (control) animals than in the castrated animals. In castrated animals, the absence of testosterone leads to decreased activity of these glands and, consequently, lower levels of these metabolites. To make this clear, we have revised the manuscript as follows. (lines 76-82)

“Several specific factors produced by the male accessory glands that contribute to seminal plasma and impact male fertility have been elucidated. For example, surgical removal of seminal vesicles in male mice and rats was associated with infertility (17, 22, 23). The observations that fructose (24) and citric acid (25) concentrations in seminal plasma of control mice and rats are higher than in castrated animals suggest that the specific metabolism of the accessory glands might be affected by testosterone derived from the testes, which activate intracellular androgen receptors (AR; NR3C4) required for gene regulation of transcription.”

(3) 111: This reviewer does not understand the author's obsession with reporting linear motility. Sperm are moving linearly when isolated from the epididymis. Again, increase of progressive motility is a well-defined hallmark of capacitation and primarily used in the field when discussing changes in sperm motility during capacitation. This reviewer is assuming that the changes in progressive vs linear motility in Fig. 7 are not significant because the data is more scattered. The % increase seems to be approximately the same. The same is true for Fig. 8. The increase in LIN is so small and not dose-dependent that this reviewer is not comfortable making that one of the main conclusions of the manuscript.

Our claim is based on the observation that seminal vesicle secretions significantly improve the linear motility (VSL and LIN) of sperm even in an environment that does not contain capacitation-inducing factors such as BSA. We interpret this as a survival strategy for sperm to pass through the female reproductive tract efficiently. Therefore, we believe that this does not mean that the meaning of “progressive motility” in the context of conventional capacitation is the same as that of progressive motility observed in seminal plasma.

However, the reviewer's point that the current data set does not sufficiently support what the minor increase in linear motility caused by oleic acid means is agreed with. Therefore, we have decided to withdraw the dataset on the effect of oleic acid on sperm motility (Fig. 7, Supplemental Figure 5A and C-F) and have revised the conclusion. (Lines 406-410)

(4) 128: For the mitochondrial membrane potential measurements the authors should mention that they included antimycin as a control. The manuscript would benefit from including scatter plots with unloaded controls to support their gating strategy. In its current stage, the gating between low and high membrane potential seems arbitrary.

Thank you for pointing this out. We have included an explanation of antimycin as a control in the main text (Lines 920-921). In addition, we have added some reference scatter plots and also added an explanation of the gating strategy between low and high membrane potentials (Supplemental Figure 1C and D, Lines 1101-1104). We hope this change will make the manuscript clearer.

(5) 190: What do the authors mean by: 'However, there was no difference in the Oligomycin-sensitive ECAR, indicating that testosterone may increase glucose metabolism but does not enhance the expression of a group of enzymes involved in the glycolytic pathway.'

Our original intention was to state that testosterone probably increases basal glycolytic flux via increased glucose uptake (as supported by the GLUT4 translocation data), but does not increase maximal glycolytic capacity, as indicated by the lack of difference in oligomycin-sensitive ECAR.

However, as Reviewer 1 previously pointed out, we agree that the assay conditions themselves, such as the use of oligomycin to inhibit oxidative mitochondria, may create non-physiological conditions and not fully reflect the energy distribution in vivo. Under these conditions, there is a possibility that the flow of glycolysis will increase artificially as a compensatory reaction, and parameters such as “maximum glycolytic capacity” should have been interpreted with caution.

Therefore, we have revised the manuscript to clarify that our data are a single-time point under defined experimental conditions and do not necessarily provide direct insight into changes in expression or activity of individual glycolytic enzymes.

“These data indicate that testosterone enhances glucose utilization. This leads to the interpretation that testosterone increases the flow of glycolysis by increasing glucose uptake and alters metabolic flux distribution.” (Lines 186-188)

(6) 205: Could the authors elaborate further on how they came to this conclusion: 'These results suggest that testosterone does not reduce transient enzyme activity in mitochondria but rather weakens the metabolic pathway of the mitochondrial TCA cycle and/or the electron transport chain due to the changes in gene expression patterns in seminal vesicle epithelial cells.' Based on their results at this point the authors have no insights about changes in enzyme activity or gene expression that might explain the phenotype.

Our statement is based on the following observations. In testosterone-treated cells, the addition of glucose increased ECAR, suggesting an increase in glycolytic flux due to an increase in glucose uptake. On the other hand, mitochondrial respiratory parameters (basal respiration, oligomycin-sensitive respiration, FCCP-uncoupled respiration, and reserve respiratory capacity) were significantly decreased under testosterone treatment.

From these results, it was speculated that testosterone promotes the redistribution of metabolic flux, directing it away from mitochondrial oxidative phosphorylation and towards the glycolytic pathway and, possibly, lipid synthesis. However, as the reviewers correctly point out, at this point, we have not directly measured changes in the activity or expression of individual enzymes in the TCA cycle or ETC. Therefore, in the next experiment, we extracted mRNA from the cells and performed gene expression analysis using real-time PCR. To make this clear, we have revised the manuscript as follows.

“Overall, these data indicate that testosterone promotes the redistribution of metabolic flux. In other words, testosterone increased glycolysis in seminal vesicle epithelial cells while decreasing mitochondrial respiration. To determine whether these changes were accompanied by changes in gene expression of specific metabolic-related enzymes, we analyzed gene expression levels.” (Lines 201-205)

(7) 219: Characterizing ACLY as an enzyme of the ETC is misleading. ACLY is a cytosolic enzyme that connects the TCA cycle with fatty acid synthesis.

We would like to thank you for pointing out that the description of the function of ACLY could be misunderstood. We agree that characterizing ACLY as an enzyme of the ETC could be misleading. Therefore, we have revised the sentence to clearly indicate that ACLY is a cytosolic enzyme that links the TCA cycle with fatty acid synthesis. The revised text is as follows:

"Interestingly, testosterone significantly increased the expression of Acly, which encodes a cytoplasmic enzyme that converts citrate transported from the TCA cycle into acetyl-CoA, a substrate that is essential for fatty acid synthesis." (lines216-218)

(8) 228: Which results support that ETC proteins were upregulated by flutamide?

We appreciate the reviewer for this point. In preliminary experiments, we analyzed ETC protein expression using real-time qPCR. Our data show that treatment with flutamide significantly upregulates the expression of genes involved in mitochondrial ETC, such as mtND6, while decreasing the expression of the lipogenic genes Acly and Acc. These additional data are now presented in Supplementary Figure S3B. (lines 223-226)

(9) 245: Aren't the authors showing in Fig. 5 that glut4 expression is reduced in seminal vesicle epithelial cells upon testosterone treatment? How does that fit into the author's hypothesis?

Thank you for pointing this out. We have already responded to a similar comment from Reviewer 3 in a previous revision. Please refer to our response to Reviewer 3 in a previous version.

(10) 285: Based on the author's results OA increases the oocyte cleavage rate but then reduces the rate of blastocyst to cleaved oocyte. Doesn't that mean OA affects negatively early development?

We thank the reviewer for the insightful comment. The one-hour pre-treatment is designed to reflect the transient exposure of sperm to the seminal plasma during ejaculation. In this context, it is unlikely that such a short exposure would impair the overall developmental potential of the embryo. However, although pre-conditioning with oleic acid does not ultimately affect the development of the offspring, it may lead to a decrease in the blastocyst rate at a certain point (approximately 96-120 hours after fertilization). We agree that additional research is needed to demonstrate this.

Therefore, because the experiments related to the effects of oleic acid on sperm and fertilization are currently incomplete, we have decided to withdraw them for future research.

(11) 305: What happens to pyruvate and lactate levels when ACLY expression is reduced?

We appreciate the reviewer’s question regarding the fate of pyruvate and lactate when ACLY expression is reduced. In the absence of testosterone (Ctrl), the expression level of ACLY decreases. At this time, the concentration of pyruvate in the culture medium increased compared to that of testosterone (Testo; Fig. 4D,E). This is probably a reflection of the fact that when the expression of ACLY is suppressed, the rate at which the products of the glycolytic pathway are converted to the fat-producing pathway (i.e., the conversion of citrate to acetyl-CoA) decreases.

On the other hand, lactate levels did not change significantly. This suggests that the flow of lactate production via lactate dehydrogenase is relatively constant, independent of metabolic reprogramming by ACLY.

Therefore, our data suggest that a decrease in ACLY expression leads to a decrease in pyruvate demand, while lactate production is maintained. We interpret these findings as supporting the idea that ACLY is important for directing the carbon produced by the glycolytic pathway to lipid synthesis (by transporting citrate from the mitochondria).

We hope that this explanation clarifies the interpretation of the data.

Minor revision:

189: ECAR: extracellular acidification rate. Please correct.

We have corrected this. (Lines 184-185)

199: Pyruvate is not synthesized, it is metabolized from PEP. Please correct.

The following corrections have been made. “pyruvate is metabolized from phosphoenolpyruvic acid through glycolysis”. (Lines 194-195)

In addition, minor revisions were made to improve the clarity of the overall text.

Reviewer #2 (Public review):

Summary:

Chen et al. describe the mechanisms that separate the common pan-sensory progenitor region into individual sensory patches, which presage the formation of the sensory epithelium in each of the inner ear organs. By focusing on the separation of the anterior and then lateral cristae, they find that long supra-cellular cables form at the interface of the pan-sensory domain and the forming cristae. They find that at these interfaces, the cells have a larger apical surface area, due to basal constriction, and Sox2 is down-regulated. Through analysis of Lmx1 mutants, the authors suggest that while Lmx1 is necessary for the complete segregation of the sensory organs, it is likely not necessary for the initial boundary formation, and the down-regulation of Sox2.

Strengths:

The manuscript adds to our knowledge and provides valuable mechanistic insight into sensory organ segregation. Of particular interest are the cell biological mechanisms: The authors show that contractility directed by ROCK is important for the maintenance of the boundary and segregation of sensory organs.

Weaknesses:

The manuscript would benefit from a more in-depth look at contractility - the current images of PMLC are not too convincing. Can the authors look at p or ppMLC expression in an apical view? Are they expressed in the boundary along the actin cables? Does Y-27362 inhibit this expression?

The authors suggest that one role for ROCK is the basal constriction. I was a little confused about basal constriction. Are these the initial steps in the thinning of the intervening non-sensory regions between the sensory organs? What happens to the basally constricted cells as this process continues?

The steps the authors explore happen after boundaries are established. This correlates with a down-regulation of Sox2, and the formation of a boundary. What is known about the expression of molecules that may underlie the apparent interfacial tension at the boundaries? Is there any evidence for differential adhesion or for Eph-Ephrin signalling? Is there a role for Notch signalling or a role for Jag1 as detailed in the group's 2017 paper?

A comment on whether cellular intercalation/rearrangements may underlie some of the observed tissue changes.

The change in the long axis appears to correlate with the expression of Lmx1a (Fig 5d). The authors could discuss this more. Are these changes associated with altered PCP/Vangl2 expression?

je suis d'accord, j'en prends l'entière responsabilité

Document de Briefing : Examen des Enjeux de l'Éducation dans la Région Hauts-de-France

Source : Extraits de "🔴 Xavier Bertrand sur la réponse de l’État face aux violences dans les établissements scolaires"

Date :2025

Intervenant Principal : Xavier Bertrand, Président du Conseil Régional des Hauts-de-France

Contexte : Audition dans le cadre d'une commission d'enquête parlementaire sur la réponse de l'État face aux violences dans les établissements scolaires.

L'audition se concentre notamment sur le contrôle exercé par les autorités, le financement des établissements scolaires (publics, privés sous contrat et hors contrat), et spécifiquement sur le cas du lycée privé Averroès de Lille dont le contrat d'association avec l'État a été résilié.

Principaux Thèmes Abordés :

Financement des Établissements Scolaires par la Région Hauts-de-France :

• Montants : Xavier Bertrand détaille les subventions versées par la région pour l'année scolaire en cours.
• Dotation globale de fonctionnement (établissements publics et privés sous contrat) : 90,2 millions d'euros.
• Subventions pour les actions éducatives : 3,2 millions d'euros.
• Politiques volontaires (prêts à taux zéro, garanties d'emprunt, etc.) : 10 millions d'euros (suspendus ou en année blanche pour les établissements privés sous contrat à la prochaine rentrée).
• Dépenses assurées en maîtrise d'ouvrage région (maintenance) : un peu plus de 5 millions d'euros.
• Distinction Public/Privé :Établissements publics : Les 90,2 millions d'euros (dotation globale) s'appliquent également aux établissements publics.
• Établissements privés sous contrat : 50 millions d'euros font l'objet de dépenses obligatoires. 10 millions d'euros concernent des politiques non obligatoires (politiques volontaires/facultatives).
• Établissements Privés Hors Contrat : La région Hauts-de-France ne subventionne actuellement aucun établissement privé hors contrat. Xavier Bertrand n'interdit pas cette possibilité par principe si cela présente un intérêt avéré pour la région, nécessitant un débat en assemblée plénière. La position de la région sur le hors contrat est connue, et aucune demande de subvention de la part de ces établissements n'a été reçue. Xavier Bertrand a été sollicité pour visiter de tels établissements mais a refusé, expliquant ne pas avoir de relations établies avec eux.
• Subventions Facultatives (10 millions d'euros) : Ces subventions relèvent d'un projet et d'une volonté politique. Elles servent principalement à financer des travaux ou des achats d'équipement (numérique, rénovation énergétique, etc.).

L'attribution se fait souvent via des protocoles d'accord, notamment avec l'enseignement diocésain, et peut prendre la forme d'avances remboursables, de prêts à taux zéro ou d'annuités d'emprunt.

La loi Falloux limite ces subventions à 10% des dépenses annuelles pour certains types d'établissements (sauf pour l'enseignement technique, professionnel, agricole et les maisons familiales rurales - loi Acier de 1919). Un contrôle sur pièces et sur place est systématiquement effectué pour vérifier l'engagement des travaux avant le versement des fonds. Ces subventions facultatives ne concernent pas la vie scolaire ou l'animation éducative, mais du bâtiment et du technique.

Rôle et Compétences de la Région en matière de Contrôle et d'Inspection :

• Absence d'Association et d'Information : Le Conseil Régional n'est ni associé ni informé lorsque l'État effectue un contrôle ou une inspection dans les lycées (académique, administratif, audit des finances publiques). Xavier Bertrand souhaiterait que l'information soit systématique et que les services régionaux dédiés aux lycées y soient associés, surtout si cela touche aux compétences régionales (fonctionnement financier, gestion des agents).

• Personnel Non-Enseignant : La question de l'inspection du personnel non enseignant (relevant de la responsabilité de la région) est soulevée. Bien que ces agents fassent partie de la communauté éducative, Xavier Bertrand souligne qu'il n'a pas l'autorité fonctionnelle sur eux, ce qu'il considère "anormal" et méritant l'attention du législateur. Il estime qu'une inspection générale serait fondée à s'intéresser à ce personnel, mais insiste sur la nécessité d'une collaboration étroite avec les services régionaux.

• Contrôle d'Honorabilité du Personnel : La région procède systématiquement aux contrôles préalables autorisés par la loi pour le recrutement du personnel (casier judiciaire B2). Cependant, elle ne fait pas partie des employeurs qui peuvent demander une attestation d'honorabilité pour certaines fonctions réglementées. Xavier Bertrand est demandeur de cette possibilité, le B2 étant le document utilisé pour vérifier le passé judiciaire, un casier judiciaire rendant impossible de travailler auprès des jeunes.

• Le Cas du Lycée Privé Averroès de Lille : Ce cas est central dans l'audition et illustre les problématiques de contrôle et de relations entre l'État et la Région.

• Contexte : Averroès est le deuxième établissement sous contrat en France dont le contrat d'association a été rompu (en 2023). Cette rupture est possible selon l'article L442-10 du code de l'éducation, à l'initiative de l'État ou sur demande d'une collectivité.

• Rôle de Xavier Bertrand : Xavier Bertrand se considère comme un "lanceur d'alerte" dans ce dossier depuis novembre 2017, date à laquelle il a sollicité l'État (le rectorat puis le ministère de l'éducation nationale) pour savoir si les conditions du contrat d'association étaient toujours réunies. Il a suspendu le versement du forfait d'externat (dépense obligatoire) à partir de novembre 2019, dans l'attente des conclusions des inspections et audits diligentés par l'État, et ce malgré plusieurs condamnations par le tribunal administratif. Il assume pleinement cette décision politique, la considérant comme le seul moyen d'alerter.

• Demande de Résiliation du Contrat : Bien que le code de l'éducation l'autorise à demander la résiliation au préfet, Xavier Bertrand a choisi de ne pas le faire, arguant qu'il respecte les principes de responsabilité définis par la loi. Il souhaiterait cependant que la Région ait plus de responsabilités et de compétences sur de telles questions.

• Commission de Concertation : La résiliation intervient après avis de la commission de concertation (article R442-64 du code de l'éducation), composée notamment de trois conseillers régionaux. Xavier Bertrand a participé à la réunion de cette commission en novembre 2023, invité par le préfet pour être entendu et présenter la position de la Région. Il a quitté la salle avant le vote. Il ne pense pas avoir enfreint l'article du code, étant invité pour exposer sa position et non pour voter. Il a assumé dire que pour lui, Averroès n'était "pas le cas d'un lycée républicain", ce qui, selon le rapporteur, a fortement influencé le vote de la commission en faveur de la résiliation.

Motivations et Chronologie :

Xavier Bertrand détaille la chronologie de ses actions et motivations :

• 2015 : Visite de l'établissement après les attentats, témoignage de soutien aux victimes par l'établissement.
• 2017 : Saisine du recteur pour clarifier la place du religieux (rapport de 2015). Absence de réponse.
• 2019 : Révélations dans "Qatar Papers" sur des financements étrangers. Saisine du ministre de l'éducation nationale. Le ministre envisage une inspection et un audit financier. Suspension du forfait d'externat.
• 2020 : Réception du rapport d'inspection confirmant un prêt remboursé par un don de Qatar Charity. Saisine à nouveau du ministre pour obtenir des précisions sur les conditions du don et le rôle d'une mosquée ayant reçu des financements étrangers. Pas de réponse précise.
• 2023 : Rapport de la Chambre Régionale des Comptes (CRC) du 30 juin 2023. Le préfet convoque la commission de concertation, qui vote la résiliation. Le tribunal administratif annule la résiliation, et le gouvernement fait appel.

Décalage avec le Rapport de l'Inspection Générale :

Le rapporteur souligne que le rapport de l'Inspection Générale de 2020 concluait que l'établissement respectait "parfaitement les valeurs de la République". Xavier Bertrand conteste cette conclusion, se basant sur le rapport de la CRC qui, selon lui, met en évidence des contenus d'enseignement contraires aux valeurs républicaines (cours d'éthique musulmane basé sur les 40 hadiths de l'imam An-Nawawi). Il exprime son trouble que la CRC ait vu ce que l'IGESR n'aurait pas vu, estimant que l'attitude de l'Éducation Nationale revenait à dire "circulez, il n'y a rien à voir".

• Arguments de la CRC : Xavier Bertrand cite explicitement les points soulevés par la CRC dans son rapport : proximité de l'association Averroès avec Musulmans de France (lié aux Frères Musulmans), présence d'une personne liée à ce mouvement dans les organes décisionnels, financement étranger significatif (1,9 million d'euros) provenant de divers pays (Koweït, Arabie Saoudite, Bahreïn), et le contenu du cours d'éthique musulmane jugé en contradiction avec les valeurs de la République (interdiction pour une femme de se faire ausculter par un homme, évitement de la mixité, prohibition de l'apostasie, prééminence de la loi divine).

Autres Cas et Proactivité de la Région :

• La Région n'a pas été saisie d'autres cas de lycées sous sa responsabilité qui l'auraient amenée à se poser les mêmes questions.
• Concernant le cas de Riomont (qui ne concerne pas un lycée géré ou financé par la Région), Xavier Bertrand a saisi la procureure de la République de Lille en janvier 2024 pour attirer son attention et exprimer le soutien de la Région aux victimes. Il est disposé à rencontrer le collectif de victimes.
• Il a également mentionné l'établissement Notre Dame de Riyaumont - Saint-Jean de Bosco à Liin, précisant que la région ne l'a jamais financé.
• La Région a mené des actions contre le harcèlement scolaire (appels à projet, cellules d'intervention rapide), notamment une initiative avec le procureur d'Amiens pour une cellule d'intervention immédiate dans la Somme incluant un délégué du procureur. Il reconnaît cependant la difficulté à intégrer la dimension spécifique du handicap dans ces dispositifs.

Recommandations et Souhaits pour l'Avenir :

• Xavier Bertrand souhaite une coopération renforcée et une information systématique des collectivités locales (Régions pour les lycées, Départements pour les collèges) lors des inspections et contrôles de l'État dans les établissements scolaires qu'elles financent, particulièrement sur les aspects financiers et de gestion des personnels régionaux.
• Il est demandeur de la possibilité pour les Régions de solliciter une attestation d'honorabilité pour le personnel qu'elles recrutent.
• Il estime que les collectivités territoriales devraient être davantage associées aux commissions de concertation pour la résiliation des contrats d'association.
• Plus globalement, il plaide pour une place plus importante des Régions dans la gestion et la protection des lycées, estimant qu'elles pourraient intervenir plus efficacement sur l'environnement sécuritaire (à l'intérieur et autour du lycée), sur les dimensions psychologiques et physiques des violences, même si le contenu pédagogique et la direction relèvent de l'État.

Citations Clés :

• "Aujourd'hui, ça n'est pas le cas non plus et que les services régionaux y soient associés notamment ceux dédiés au lycée je trouve que ce serait effectivement une bonne chose à partir du moment où ça va toucher les compétences régionales que ce soit le fonctionnement financier la gestion des agents régionaux." (Xavier Bertrand sur l'association de la région aux inspections de l'État)
• "Je pense que d'ailleurs à un moment ou un autre il serait quand même utile que le législateur se penche sur cette question [l'autorité fonctionnelle sur les agents régionaux dans les lycées]. C'est effectivement bien souvent l'agent comptable qui donne des instructions Mais en tout état de cause moi président de région je n'ai absolument pas l'autorité fonctionnelle sur ces agents." (Xavier Bertrand sur son manque d'autorité sur le personnel régional)
• "Je pense que si la région pouvait parce qu'on est en contact avec des jeunes pouvoir établir une attestation enf pardon pouvoir solliciter une attestation d'honorabilité je suis pas preneur je suis demandeur." (Xavier Bertrand sur l'attestation d'honorabilité)
• "clairement je le dis et je l'assume ces subventions facultatives relèvent donc bel et bien d'un projet et d'une volonté politique." (Xavier Bertrand sur les subventions facultatives)
• "J'ai avant tout et surtout sollicité l'État depuis novembre 2017 pour savoir si oui ou non les conditions étaient réunies pour qu'un contrat d'association entre l'État et ce lycée soit toujours accordé (...) et je n'ai eu de cesse de me considérer comme un lanceur d'alerte et si c'était à refaire je referais tout depuis le départ." (Xavier Bertrand sur son rôle dans l'affaire Averroès)
• "Au fond ne pas verser le forfait externa au fond c'est rompre le contrat de l'association qui garantit le financement euh de la part de la région aussi de cet établissement Ma question est est très simple Pourquoi ne pas être allé peut-être au bout donc de cette démarche que vous avez engagé en suspendant le versement du forfait externa en demandant au préfet comme le code de l'éducation là encore le permettre de de rompre ce contrat" (Rapporteur questionnant la stratégie de Xavier Bertrand)
• "on peut financer je vous cite je le dis l'enseignement libre et je continuerai à vouloir le faire mais on peut le faire pour des lycées qui sont vraiment républicains et pour moi ce n'est pas le cas du lycée aouest" (Citation rapportée des propos de Xavier Bertrand lors de la commission de concertation)
• "Je pense avoir montré depuis effectivement des années quelle avait été la position de la région que j'ai assumé notamment devant les interpellations de monsieur le rapporteur Concernant le lycée Jean-Paul II il faut savoir une chose c'est qu'il y a une enquête préliminaire donc une instruction judiciaire qui est clairement ouverte Je crois que le proviseur a également démissionné et qu'encore une fois permettez-moi de le dire avec cet exemple vous apportez de l'eau à mon moulin comme le disait madame la présidente tout à l'heure elle me questionnait là-dessus Oui je souhaiterais qu'on soit avisé des enquêtes qui sont faites ou des inspections parce que c'est ça vos références Oui Oui Non non mais je je voulais pas vous interrompre mais vous pouvez lire médi pouvez connaître pas besoin d'être averti un article" (Xavier Bertrand sur d'autres cas potentiels et la nécessité d'être informé des inspections)
• "cette commission d'enquête j'ai pas besoin de le dire mais elle est particulièrement importante parce qu'elle touche à ce pour qui on est prêt à faire effectivement tous les efforts cette question des violences (...) Le vrai problème que nous avons nous les conseils régionaux c'est qu'au final on finance les établissements la structure le personnel d'entretien de restauration mais on a beau être paraît-il chez nous nous ne le sommes pas vraiment" (Xavier Bertrand en conclusion sur l'importance de la commission et les limites des compétences régionales)

Points de Discussion Potentiels pour les Auditions Futures :

• Approfondir le manque d'autorité fonctionnelle des Présidents de Région sur le personnel qu'ils financent dans les lycées.
• Explorer la faisabilité et l'opportunité d'étendre la possibilité de demander une attestation d'honorabilité aux Régions.
• Examiner les raisons du décalage entre les conclusions du rapport de l'IGESR et celles du rapport de la CRC dans l'affaire Averroès.
• Évaluer l'efficacité actuelle des inspections et audits de l'État et les moyens de les améliorer, y compris la question de l'information et de l'association des collectivités locales.
• Discuter des modalités d'intervention des collectivités locales dans la lutte contre le harcèlement, particulièrement pour les élèves en situation de handicap.
• Analyser les critères et le processus de subventionnement des établissements privés sous contrat et hors contrat par les Régions et l'opportunité d'une plus grande formalisation.
• Ce document de briefing résume les points clés de l'audition, mettant en lumière les préoccupations de Xavier Bertrand concernant le contrôle de l'État, le financement des établissements, et les limites actuelles des compétences régionales face aux enjeux de sécurité et de respect des valeurs républicaines dans le système éducatif. Le cas Averroès sert d'étude de cas détaillée pour illustrer ces défis.

Briefing sur l'identification et la lutte contre les dérives sectaires et les risques associés aux plateformes numériques, notamment TikTok

Source : Extraits de l'audition du chef de la Miviludes par une commission d'enquête parlementaire, et audition de psychologues cliniciennes et maître de conférence en psychologie cognitive et ergonomie.

Contexte : Cette audition fait suite à la publication d'un rapport d'activité de la Miviludes (Mission interministérielle de vigilance et de lutte contre les dérives sectaires) mettant l'accent sur les menaces que représente le numérique, en particulier pour les mineurs, ainsi qu'à une stratégie nationale de lutte contre les dérives sectaires annoncée en novembre 2023.

Les psychologues auditionnés apportent une expertise sur les aspects psychologiques de ces phénomènes, notamment les addictions comportementales.

Principaux Thèmes et Idées :

• Le Numérique comme Vecteur Majeur des Dérives Sectaires et Risques Associés : Le numérique est désormais une dimension quasi systématique des signalements reçus par la Miviludes, même si elle n'exclut pas toujours les rencontres physiques.

Les plateformes en ligne, dont TikTok, permettent d'atteindre les mineurs directement dans leur espace personnel, souvent à l'insu des parents.

• Citation : "...dans ces signalements il y a presque toujours une dimension numérique qui n'est souvent pas exclusive de rencontres physique mais la dimension numérique est est presque toujours présente..."

• Citation : "...ce phénomène des réseaux sociaux présente aussi cette nouveauté qu'ils peuvent atteindre des mineurs dans leur vie personnelle à la maison sans même que les parents comme vous le savez puissent en être informés sans avoir toujours les moyens de contrôle les connaissances techniques permettant de paramétrer l'outil pour sécuriser l'accès à un certain nombre de données..."

• Difficulté d'Identification et de Lutte face à de Nouveaux Phénomènes : Les dérives en ligne ne correspondent pas toujours à des infractions pénales clairement définies, rendant la lutte plus complexe. Des comportements peuvent être préoccupants pour la santé des mineurs sans relever immédiatement du droit pénal classique.

• Citation : "...il y a pas toujours d'infractions pénales qui sont commises et pour autant il peut y avoir des comportements qui peuvent prêter à réfléchir voire à à être préoccupé pour la santé des mineurs..."

• Citation : "...nous sommes face à des phénomènes sur lesquels nous devons certainement travailler davantage pour mieux savoir comment les prévenir parce que le droit pénal n'est pas forcément d'une grande utilité sur ce plan-là..."

• Prolifération d'Acteurs non Qualifiés et d'Influenceurs : De nombreuses personnes se présentent comme des professionnels (coachs de vie, coachs spirituels, coachs en développement personnel, experts en cryptomonnaies, etc.) sans diplômes reconnus ou compétences avérées.

Ces acteurs peuvent exercer une influence significative sur les mineurs, traitant de sujets intimes (blessures, chagrin, relations conflictuelles) et créant une forme de dépendance.

• Citation : "...beaucoup de nouveaux métiers et de en tout cas de personnes qui estiment exercer un nouveau métier et qui pour autant ne peuvent pas justifier d'un diplôme qui serait reconnu par l'État ou d'une compétence particulière dans des domaines dans lesquels ils exercent une influence importante dans la vie de ces mineurs alors je pourrais citer les influenceurs notamment spirituels mais pas seulement les coachs de vie les influenceurs pardon de développement personnel enfin toutes personnes qui euh dans certains cas peuvent présenter des compétences aléatoires..."

• Influence des Communautés en Ligne et Pression de Groupe : La formation de communautés en ligne est un phénomène nouveau qui rend difficile la prévention des abus. L'influence et la pression du groupe peuvent être particulièrement préoccupantes, surtout pour les mineurs.

• Citation : "...la formation de communauté en ligne et c'est un phénomène qui qui est quand même relativement nouveau et nous n'avons sans doute pas toutes les tous les éléments de réponse efficaces aujourd'hui pour prévenir les abus qui peuvent être commis dans ce type de de communauté en ligne..."

• Citation : "...lorsque vous avez un phénomène de foule ou un phénomène collectif de communauté en ligne il peut y avoir une influence du groupe une pression du groupe qui peut être préoccupante sur encore plus évidemment sur des mineurs..."

• Processus d'Emprise Mentale et Vulnérabilité des Mineurs : La Miviludes observe les différentes phases de l'emprise mentale, qui commence souvent par une phase de séduction/valorisation, suivie d'un endoctrinement, d'un isolement par rapport aux proches, puis d'une dépendance. Les mineurs sont particulièrement vulnérables à ce processus.

• Citation : "...de ce que nous avons observé en fait s'agissant de de l'emprise mentale puisque c'est de cela dont nous occupons principalement à la Mivilude... il y a d'abord une phase de séduction... et puis euh ensuite et bien il y a une phase d'endctrinement qui peut se manifester... et puis donc ensuite ça peut être une l'adoption d'une de nouvelles règles de vie qui crée un isolement... et puis donc à cette phase d'isolement peut succéder une phase de dépendance..."

• Citation : "...nous ce que nous pouvons observer c'est c'est quelque chose qui avait d'ailleurs été expliqué par des chercheurs c'est les différentes phases de l'emprise qui peut être et bien problématique par les liens de dépendance qu'il peut créer et la difficulté ensuite à s'en désengager pour les personnes qui sont concernées et encore plus de mineurs..."

• Risques Spécifiques Liés à TikTok : TikTok présente des particularités préoccupantes, notamment le système de micro-dons qui peut créer une "ambiance de show" incitant à donner toujours plus, et la facilité avec laquelle certains mineurs peuvent être touchés, combinée à un phénomène de "célébrité" qui peut générer une forte dépendance et un attente de l'influenceur. Des signalements spécifiques sur TikTok concernant des mineurs ont été reçus.

• Citation : "...s'agissant de de TikTok donc j'ai j'ai rappelé tout à l'heure la possibilité de pouvoir faire des micro don qui peut créer une ambiance très particulière surtout lorsqu'il s'agit de de mineurs qui sont en cause..."

• Citation : "...ce qui nous préoccupe s'agissant de TikTok c'est la manière dont certains mineurs peuvent être touchés... nous avions un signalement qui concernait donc des des mineurs donc de pour certains âgés de moins de 15 ans euh et qui pouvait lorsqu'on mêle l'aspect réseau social avec un phénomène de célébrité ou assimilé comme tel et bien il peut y avoir un enjeu de dépendance très fort avec des mineurs qui attendent la manifestation du leader du groupe d'une manière ou d'une autre..."

• Cas Spécifique de l'Influenceuse "Ophénia" : La Miviludes a effectué un signalement au procureur de Paris concernant cette influenceuse.

Les préoccupations portaient sur la composition de sa communauté (majoritairement des adolescentes, parfois très jeunes), les interactions directes et intenses, et les réactions passionnelles et mimétiques de ses abonnées (propos suicidaires, automutilation, grèves de la faim, menaces, harcèlement).

• Citation : "...nous avons été informés par le collectif maire donc mineur éthique et et réseau d'une masse d'information... j'ai signé donc un signalement à la procureur de Paris faisant état d'un certain nombre de faits préoccupants... j'ai rapporté ces ces faits là [tentative de suicide suite au comportement d'une influenceuse], j'ai rapporté aussi euh les éléments sur cette les idées de suicide que pouvait avoir euh de jeunes internautes... la communauté Bégénia puisque c'est le nom qu'elle elle a donné à sa communauté serait composé d'adolescentes parfois très jeunes..."

• Citation : "...les échanges en fait électroniques révélaient une forte adhésion au mouvement d'humeur d'OPIA... allant jusqu'à insulter tout détracteur voire à proférer des menaces de mort..."

• Citation : "...le comportement mimétique et parfois presque fanatique de membres de cette communauté qui nous paraissait euh préoccupant puisque lorsqueia faisait état d'une contrariété particulière des membres de sa communauté réagissaient de façon passionnelle et se montraient aussi affecté qu'elle avec des photos de jeunes filles portant des cicatrices de scarification ou des marques de blessures ou de jeunes filles qui annonçaient une grève de la fin ou des projets de tentative de suicide..."

• Dérives Financières (Cryptomonnaies, Coaching, Vente Pyramidale) : Le "culte de l'argent facile" et la promotion de la richesse rapide, notamment via les cryptomonnaies ou certains types de coaching, sont des sources d'attrait pour les jeunes et peuvent donner lieu à des systèmes de vente pyramidale et à une pression de groupe intense.

• Citation : "...le culte de l'argent facile est une source de très efficace d'attrait d'un grand nombre d'adolescents de jeunes adultes et donc il peut y avoir dans certaines organisations une forme de pression sur des objectifs commerciaux de ramener de nouveaux clients az vous avez évoqué les systèmes de de vente pyramidale et on a ces ces systèmes là que l'on retrouve de manière très claire..."

• Citation : "...ces valeurs de l'argent facile de des influenceurs à Dubaï cette vie voilà d'image de euh évidemment elle pèse dans l'ambiance générale..."

• Fake News et Complotisme : Le développement des fake news et du complotisme en ligne tend à relativiser les savoirs établis, contester la science, la médecine et les pouvoirs publics, constituant une "menace nouvelle".

• Citation : "...nous avons aussi le ce phénomène des fake news du complotisme qui s'est beaucoup développé et qui tend à relativiser pas mal toutes les formes de savoir et même à contester le monde de la science le monde de la médecine les pouvoirs publics toute menace nouvelle qui appelle certainement de nouvelles réponses..."

• Nouvelles Technologies (IA, Métavers) comme Risques Potentiels : L'intelligence artificielle et le métavers sont identifiés comme des technologies pouvant présenter des risques, notamment en termes de manipulation, accentués lorsqu'ils concernent les mineurs, bien que l'IA puisse aussi être une ressource pour l'identification des comportements problématiques.

• Citation : "...l'intelligence artificielle qui est une menace mais qui peut être aussi une ressource qui peut être utilisée pour mieux identifier un certain nombre de comportements problématiques..."

• Citation : "...une autre technologie dont on parle pas beaucoup ou plus beaucoup mais on va certainement en parler davantage à l'avenir c'est le c'est le métaverse qui qui reviendra avec la la possibilité de de vivre des expériences subjectives et donc avec des possibilités nouvelles de manipulation et qui sont évidemment très problématiques dès lors qu'on parle de mineurs..."

• Augmentation des Signalements et Demandes d'Information : La Miviludes constate une forte augmentation des sollicitations (signalements et demandes d'information), passant de 2160 en 2015 à 4570 en 2024. La gravité des signalements s'est également accrue.

• Citation : "...ces demandes d'information ces signalements sont en forte augmentation puisque nous avons plus d'un doublement depuis 2015 2160 en 2015 4570 en 2024..."

• Citation : "...ces signalements n'ont leur gravité n'a fait que s'amplifier d'après ce que me disent les membres de mon équipe..."

• Appréciation de la Réglementation Existant (DSA) et Besoin de Prévention : L'application du règlement sur les services numériques (DSA) est jugée nécessaire, mais elle requiert une meilleure formation pour l'identification et la documentation des "risques systémiques".

Cependant, au-delà de la réglementation, il est jugé essentiel de renforcer la prévention et l'information du public, notamment en matière de santé, en vulgarisant l'information scientifique et médicale sur les réseaux sociaux.

• Citation : "...s'agissant du règlement sur les services numériques qui est mis en œuvre qui est applicable en France... nous devons définir les risques systémiques et surtout les documenter et je dois dire que les agents de l'État ne sont peut-être pas tous complètement euh formés aujourd'hui pour appliquer cette réglementation..."

• Citation : "...avant même de savoir s'il faut la faire changer je pense qu'il faut déjà qu'on puisse l'appliquer de manière rigoureuse..."

• Citation : "...nous pouvons aussi certainement faire beaucoup mieux sans avoir besoin non plus de réglementation en terme de prévention et d'information donnée au public..."

• Citation : "...nous pourrions faire bien mieux en terme de vulgarisation scientifique médicale pour qu'il y ait une information de qualité immédiatement accessible pour les utilisateurs de ces réseaux sociaux y compris de TikTok..."

• Difficultés Liées aux Preuves et à l'Action en Justice : Les captures d'écran ne constituent pas une preuve suffisante en justice ; seuls les liens internet le sont, et leur enregistrement est essentiel (mention de la plateforme Faros).

La qualification des faits, notamment en ce qui concerne la corruption de mineurs ou les propos sexualisés, peut être difficile à établir. Le traitement de l'urgence est assuré, mais prouver les mécanismes de manipulation mentale peut prendre du temps.

• Citation : "...il me semble que les donc les captures d'écran ne sont pas une preuve il faut faire savoir ça au aux personnes qui nous sollicitent seul le lien internet peut-être une preuve et encore si on a pu démontrer qu'il était en ligne..."

• Citation : "...là on est sur quelque chose d'encore plus difficile à caractériser puisqueà partir de quand c'est problématique il y a une infraction de corruption de mineurs qui existe mais enfin il faut pour cela des éléments intentionnels et tout dépend la manière dont c'est reçu interprété reproduit et cetera..."

• Citation : "...l'urgence nous la traitons toujours en urgence mais les phénomènes de manipulation mentale nécessitent un travail qui peut être long pour prouver pour démontrer en tous les cas mécanisme donc c'est quelque chose qui peut prendre du temps..."

• Moyens Limités de la Miviludes : Malgré l'augmentation significative de la charge de travail et de la gravité des signalements, les effectifs de la Miviludes sont restés stables depuis 2015 (14-15 agents).

• Citation : "...nous sommes 14 il y a quatre contrats 10 mises à disposition d'agents donc de d'autres ministères donc nous sommes 14 avec un alternant ça fait 15..."

• Citation : "...nous avons le double de signalement depuis 2015 et ces signalements n'ont leur gravité n'a fait que s'amplifier... Et comment ont évolué les effectifs depuis 2015 de la Mivilude ? c'est resté à peu près stable..."

• Potentialités d'Utilisation des Plateformes par les Institutions : Certaines plateformes comme TikTok pourraient être utilisées par les institutions pour la prévention et l'information, comme le fait la police espagnole. Cela soulève cependant des questions sur la stratégie à adopter face à un outil posant par ailleurs problème.

• Citation : "...je pour avoir rencontré nos homologues espagnols la police espagnole a un compte TikTok qui est extrêmement populaire et qui fonctionne semble-t-il très bien... dans le domaine de l'information de la prévention nous pourrions nous emparer davantage de ces outils..."

Faits et Chiffres Clés :

• Augmentation des signalements à la Miviludes : 2160 en 2015, 4570 en 2024.

• Signalements adressés au parquet par la Miviludes : 80 sur 2023-2024 (contre 33 sur 2021-2022).

• Signalements spécifiques relatifs à TikTok reçus par la Miviludes : 135 au total, dont 17 concernaient spécifiquement des mineurs.

• Effectif de la Miviludes : 14-15 agents, stable depuis 2015.

• La stratégie nationale de lutte contre les dérives sectaires 2024-2027 inclut un volet numérique.

• Ce briefing résume les points essentiels abordés dans les sources, mettant en lumière les défis posés par le numérique et les réseaux sociaux dans la lutte contre les dérives sectaires, l'impact spécifique sur les mineurs, les difficultés d'action et les pistes de travail (prévention, information, application de la réglementation).

Titre : Briefing sur l'Influence des Réseaux Sociaux sur les Élections en France

Date : [Date de rédaction du briefing]

Source : Extraits de "🔴 Google, Meta, Snap, Tiktok et X sur l’influence des réseaux sociaux sur les élections en France"

Contexte : Cette audition parlementaire vise à examiner le rôle, les responsabilités et les risques associés aux plateformes numériques (Google, Meta, Snap, TikTok, X) concernant l'intégrité des élections en France, en particulier au regard des ingérences étrangères, de la qualité de l'information et de l'organisation du débat politique en ligne. Les représentants des plateformes ont prêté serment de dire la vérité.

Thèmes Principaux :

• Information des Électeurs et Engagement Civique : Les plateformes déploient des efforts pour fournir aux utilisateurs des informations fiables sur le processus électoral et encourager la participation.
• Lutte contre la Désinformation et les Fausses Informations : Chaque plateforme a des politiques et des mécanismes pour identifier et traiter les contenus trompeurs, bien que les approches varient.
• Ingérences Étrangères et Menaces Coordonnées : Les plateformes reconnaissent le risque d'ingérence étrangère et mettent en place des équipes et des procédures pour détecter et démanteler les opérations malveillantes.
• Rôle des Algorithmes : La question de l'impact des algorithmes sur la diffusion du contenu politique, la création de "bulles de filtre" et le pluralisme de l'information est centrale.
• Publicité Politique et Transparence : Les règles concernant la publicité politique varient selon les plateformes, avec un accent sur la transparence et la restriction des financements étrangers.
• Modération et Lignes Directrices : La manière dont les plateformes modèrent le contenu, l'évolution de leurs règles et leur neutralité politique sont des sujets de discussion importants.

Idées Clés et Faits Importants par Thème :

1. Information des Électeurs et Engagement Civique :

• Démarche Proactive : Les plateformes mettent en place des "boîtes d'information" et des bannières pour diriger les utilisateurs vers les sources officielles.
• Google : "On a mis en place l'an dernier des boîtes information euh le contenu il était pas produit par Google mais évidemment par les autorités publiques... on a mis en place avec le SIG avec les ressources du ministère de l'intérieur notamment bah pareil une une boîte info en haut des résultats de recherche." Ils font la promotion de ces informations via bannières et notifications mobiles.
• Meta : "Nous travaillons à trois niveaux une collaboration avec le service d'information du gouvernement pour aussi mettre en avant les sources officielles notamment sur le la question du rappel des dates limite d'inscription pour les listes électorales... et les dates de scrutin aussi." Ils envoient des notifications in-app et mènent des campagnes de sensibilisation (ex: avec l'AFP et Thomas Pesquet). Leurs notifications ont été cliquées plus d'un million de fois sur Facebook et Instagram lors des législatives.
• Snapchat : Mène des campagnes d'information, notamment via des Lenses, filtres et BitMoji, pour indiquer aux utilisateurs comment voter, trouver leur bureau de vote, et comprendre les candidats/partis (en collaboration avec des partenaires médias).
• X : Utilise des messages de rappel ("Community Notes") sur la tenue des élections envoyés environ une semaine avant le scrutin.
• TikTok : A lancé un centre dédié aux élections européennes en 2024, consulté 1,8 million de fois, et sensibilise aux risques de désinformation via des vidéos (ex: avec l'AFP).
• Faciliter l'Inscription : Certaines plateformes aident à la sensibilisation sur l'inscription sur les listes électorales.
• Meta : Intègre le rappel des dates limites d'inscription dans leurs notifications, comme fait en 2022.
• Snapchat : Indique aux utilisateurs qu'ils peuvent voter avec une carte d'identité et les aide à trouver leur bureau de vote.
• Pédagogie : Les données montrent un besoin de pédagogie sur le processus électoral.
• Google : Via Google Trends, ils ont constaté des questions fréquentes comme "y a combien de tours aux élections européennes" ou "quand a lieu le second tour".

2. Lutte contre la Désinformation et les Fausses Informations :

• Politiques Communautaires : Toutes les plateformes ont des règles strictes contre la désinformation.
• Snapchat : Applique des règles strictes contre la désinformation, avec un temps médian de traitement des signalements de fausses informations de 2 minutes au second semestre 2024 (selon leur rapport de transparence DSA).
• TikTok : Interdit la désinformation, notamment celle entraînant un préjudice important ou concernant les processus civiques et électoraux.
• Partenariats avec des Vérificateurs de Faits (Fact-Checkers) : Certaines plateformes collaborent avec des organisations tierces indépendantes.
• Meta : Travaille avec plusieurs fact-checkers indépendants pour vérifier les contenus. Ils notent que les vérificateurs de faits "ne peuvent pas tout faire" et doivent respecter leur indépendance. Le débat aux États-Unis sur l'évolution de cette approche est mentionné, mais pour l'instant, le dispositif reste en place en Europe.
• Snapchat : Travaille avec des vérificateurs de faits indépendants comme Pointer.
• X : Utilise un système communautaire appelé "Community Notes" pour apporter du contexte sous les publications potentiellement trompeuses. Ces notes doivent être jugées utiles et mises d'accord par des contributeurs ayant des points de vue divergents.
• Approches Différentes : La manière de gérer la désinformation varie.
• Google : N'utilise pas la logique de fact-checking pour le moteur de recherche ou YouTube (qui n'est pas un réseau social). Leur approche est d'organiser l'accès à une diversité d'informations de qualité en mettant en avant les sources faisant autorité (gouvernementales, médias). Ils utilisent des "classifiers" pour mettre en avant ces sources.
• X : Distingue "désinformation" (manipulation, inauthenticité) et "information trompeuse" (misinformation). Pour la désinformation, ils luttent contre la manipulation de la plateforme et les identités trompeuses. Pour l'information trompeuse, ils misent sur les "Community Notes" pour apporter du contexte.
• Modération et Moyens : La question des moyens alloués à la modération et de l'évolution des politiques est soulevée.
• Meta : Affirme ne pas avoir réduit ses moyens de modération malgré des évolutions dans les règles de modération globales (qui concernent certains sujets sociétaux ou de politique d'immigration). Ils soulignent que "la loi prime sur les politiques de modération" et qu'un contenu illégal est retiré.

3. Ingérences Étrangères et Menaces Coordonnées :

• Reconnaissance du Risque : Les plateformes identifient les ingérences étrangères comme une menace sérieuse.
• Président de la commission : "L'attention particulière à la question des ingérences qui me semble être une menace fondamentale sur notre démocratie".
• Équipes Dédiées : Des équipes sont spécifiquement chargées de détecter et de contrer ces menaces.
• Google : Mobilise deux équipes principales : le "SRE analysis group" (analyse les pratiques malveillantes) et Mandiant (sécurise les infrastructures). Ils surveillent ce qui se passe sur d'autres réseaux et plateformes pour identifier les menaces.
• Meta : Lutte contre les "actions coordonnées inauthentiques" (réseaux de faux comptes créés par des puissances étrangères). Ils en ont démantelé 200 en quelques années et publient des rapports trimestriels. Ils sont en relation avec les autorités françaises. Ils mentionnent la Russie, l'Iran et la Chine comme origines fréquentes de ces opérations.
• Snapchat : A une équipe dédiée au renseignement sur les menaces et travaille de manière continue.
• X : A une équipe appelée "Swap Disruption" qui enquête de manière proactive sur la manipulation de la plateforme et les ingérences étrangères. Entre avril et octobre 2024, ils ont supprimé 16 millions de comptes en France liés à ces phénomènes. Ils connaissent bien le réseau "Dop Ganger".
• TikTok : Interdit les ingérences étrangères selon ses règles communautaires. A intensifié ses réunions avec Viginum depuis janvier pour anticiper les élections de 2027.
• Collaboration avec les Autorités : Le dialogue et le partage d'informations avec des entités comme Viginum sont jugés essentiels.
• Google : Souligne l'importance de "structurer des échanges entre nous Viginum les autorités françaises".
• X : Met en avant l'importance de la collaboration avec Viginum, qu'ils considèrent comme un "cas un peu particulier au niveau de l'Union européenne" et "tout à fait salutaire".
• TikTok : Coopère pleinement avec la Commission européenne sur l'enquête concernant les événements en Roumanie et échange avec Viginum.
• Snapchat : A établi un lien avec l'ARCOM et s'est mis à disposition de Viginum pendant les élections.
• Adaptation : Les acteurs malveillants sont sophistiqués et s'adaptent, nécessitant une vigilance constante.
• X : "Très honnêtement pour vous répondre c'est aussi un peu un jeu de che de la souris parce qu'en fait forcément nous plus on sait lutter contre eux et plus eux ils deviennent plus créatifs et ils s'améliorent et donc on a forcément toujours un petit temps de retard par rapport à eux".
• Lien avec la Vie Réelle : Certaines opérations combinent actions en ligne et dans le monde réel (ex: pochoirs à Paris amplifiés sur les réseaux).
• Le Cas de la Roumanie (TikTok) : L'annulation d'une élection suite à une possible manipulation sur TikTok en Roumanie est un sujet de vive préoccupation.
• Président de la commission : Souligne que "c'est quand même en raison d'une opération d'envergure qui a été menée sur votre réseau que le premier tour de l'élection avait été annulé". La question est posée de savoir si un tel événement peut advenir en France et comment l'éviter, étant donné que le cadre réglementaire européen est le même. TikTok ne peut donner de précisions sur l'enquête en cours mais assure coopérer avec la Commission et travailler avec Viginum pour éviter que cela ne se reproduise en France.
• Les Médias comme Point de Résilience : La diversité et la force des médias traditionnels en France sont considérées comme un rempart face à la désinformation organisée.
• Google : "On a une chance en France... on a un point de résilience en fait en France par rapport à ces campagnes notamment de de désinformation et de organisé par les États étrangers ce sont nos médias et notamment la diversité des médias". Ils soulignent l'importance de soutenir l'information diverse et le financement des médias.

4. Rôle des Algorithmes :

• Influence Potentielle : Les algorithmes peuvent influencer la diffusion des contenus et potentiellement les choix électoraux.
• Rapporteur : Évoque "une forme de survalorisation de certains contenus", "des failles algorithmiques qui sont utilisées" et les "bulles de filtre".
• Transparence : Les plateformes s'engagent à être transparentes sur le fonctionnement de leurs algorithmes.
• Meta : Souligne la transparence vis-à-vis du régulateur et publie des informations en ligne expliquant comment fonctionnent leurs algorithmes.
• Snapchat : A une approche transparente avec un lien public expliquant en détail le fonctionnement de leur algorithme.
• X : Explique comment fonctionnent ses systèmes de recommandation sur son site et a publié un article de blog technique. L'algorithme est en open source pour les "Community Notes".
• TikTok : A une page d'aide expliquant le fonctionnement de son algorithme "Pour toi".
• Contrôle Utilisateur : Des outils sont disponibles pour permettre aux utilisateurs d'influencer leur expérience algorithmique.
• Meta : Les utilisateurs peuvent dire s'ils préfèrent voir "plus ou moins" d'un certain type de contenu. Sur Instagram, il est possible d'opter pour un fil purement chronologique.
• Snapchat : Les utilisateurs peuvent désactiver la personnalisation des recommandations dans leurs paramètres.
• X : Propose une timeline anti-chronologique, permet de marquer du contenu comme "non intéressé", de filtrer/bloquer des comptes.
• TikTok : Permet de réinitialiser le fil "Pour toi" ou de désactiver la personnalisation pour ne voir que des vidéos populaires de la région.
• Diversité de Contenu : Les plateformes affirment viser à présenter une diversité de contenu.
• Google : Affirme ne plus être basé sur la seule notoriété et utiliser de nombreux signaux pour augmenter la diversité. Ils soulignent que la diversité des idées en ligne dépend aussi du contenu disponible.
• Snapchat : Vise à "garder des recommandations qui sont assez larges" et à "ouvrir la communauté à des sujets variés" pour éviter l'enfermement algorithmique. Ils insèrent des contenus qui n'ont rien à voir avec les intérêts habituels de l'utilisateur.
• TikTok : Utilise des signaux basés sur l'interaction mais aussi sur la nature du contenu pour offrir une expérience variée.
• "Bulles de Filtre" : La notion de "bulles de filtre" est discutée.
• Meta : Mentionne les travaux d'un sociologue (Dominique Cardon) qui considère qu'il n'y a pas de "bulles de filtre" et que les réseaux sociaux reflètent plutôt l'homophilie sociale déjà existante dans la société. Ils estiment que l'exposition à des opinions diverses sur les réseaux sociaux n'est pas inférieure à celle dans d'autres sphères sociales.
• Snapchat : Souligne que son architecture (communication privée) ne se prête pas naturellement aux débats publics et à la diffusion massive.
• Neutralité Politique : Les plateformes affirment ne pas avoir d'agenda politique et ne pas privilégier certaines idées politiques.
• Google : "Nous en ce qui nous concerne c'est non on fait pas de choix politique c'est clair et affiché".
• Meta : "Il y a pas d'algorithme qui va préférer des idées de gauche ou de droite". Ils expliquent que l'algorithme se base sur l'interaction et l'intérêt de l'utilisateur, pas sur le fond politique du contenu.
• Snapchat : Affirme adopter une approche objective en matière de partenariat médias, sans porter de jugement sur les orientations politiques.
• TikTok : Affirme que la plateforme "ne fait pas de choix politique partisan dans la présentation des contenus dès lors que ces contenus respectent nos règles communautaires et le droit local applicable".
• Évolution Récemment Observée (Meta) : Il y a eu un changement dans la diffusion du contenu politique sur Meta.
• Rapporteur : Constat empirique d'une "baisse de la diffusion des contenus" politiques puis un "gros changement" récent où la diffusion est "extrêmement large".
• Meta : Confirme que "il y a quelques mois les contenus politiques étaient moins diffusés" et que "depuis le début d'année... le contenu politique est traité comme tout autre contenu". Ce n'est pas un changement de modération mais de "diffusion de ces contenus là".

5. Publicité Politique et Transparence :

• Restrictions : Des règles limitent qui peut diffuser de la publicité politique.
• Meta : Pour diffuser de la publicité politique ou sur des enjeux sociaux en France, la personne doit vérifier son identité et être basée en France. Cela vise à limiter les tentatives d'ingérence.
• Snapchat : La publicité politique est vérifiée manuellement et en amont par des modérateurs et experts indépendants. Interdit toute publicité politique financée par des entités basées en dehors de l'UE pour être diffusée en France.
• TikTok : La publicité politique est interdite en tout temps. Les comptes politiques labellisés n'ont pas accès aux fonctions de monétisation.
• X : Démonétise la désinformation, c'est-à-dire que si une publicité reçoit une "Community Note", elle perd son statut de publicité et n'est plus promue.
• Bibliothèques de Publicités : Des outils permettent de consulter les publicités politiques.
• Meta : Dispose d'une bibliothèque publicitaire où sont archivées pendant 7 ans les publicités labellisées.
• Conformité Réglementaire : Les plateformes s'adaptent aux régulations européennes (ex: sur la publicité politique).
• Snapchat : A élargi le scope de résidence de l'émetteur à l'ensemble de l'UE suite au règlement européen de 2024.

6. Modération et Lignes Directrices :

• Évolution des Règles : Les règles communautaires peuvent évoluer.
• TikTok : A fait évoluer ses règles en 2023 pour inclure la lutte contre la désinformation sur le consensus scientifique concernant le changement climatique.
• Snapchat : A fait évoluer ses règles pour inclure l'IA générative. L'évolution se base sur les événements en France/autres pays et les évolutions technologiques.
• Meta : Mentionne des "évolutions des règles de modération" qui concernent notamment certains sujets sociétaux (genre, immigration), en écho aux débats politiques américains. Ils affirment que cela ne change pas les moyens de modération et que la loi locale prime toujours. La question de savoir si cette évolution est "orientée politiquement" et son impact sur le débat national est posée. Meta insiste sur la liberté d'expression dans les limites de la loi et des règles de protection des personnes.
• Transparence sur les Règles : Les plateformes rendent publiques leurs politiques.
• Meta : Affirme que l'évolution des règles est "en ligne elle est claire elle est transparente".
• Application Uniforme : Les règles s'appliquent à tous les utilisateurs, qu'ils soient célèbres ou non.
• Snapchat : "Ces règles de modération vont s'appliquer à l'ensemble des utilisateurs qui soient certifiés ou non qui soi de d'une notoriété exceptionnelle ou non".
• X : "Les règles elles s'appliquent de toute façon de façon horizontale" y compris au propriétaire du réseau.

Citations Clés :

• "La question des réseaux sociaux et des plateformes est apparue au fur et à mesure... au titre... de notre vigilance collective sur les les risques d'ingérence étrangère au moment des des élections dans notre pays." (Président de la commission)
• "La mission la mission en fait hein principale de Google c'est celle d'organiser l'accès à l'information et effectivement euh lorsqu'on parle des élections c'est quelque chose qui euh qui reste qui reste critique." (Google)
• "De part notre architecture déjà Snapchat ne se prête pas naturellement euh aux discussions aux débats euh et au contenu politique puisque nous ne permettons pas euh de fil public ouvert de diffusion en direct." (Snapchat)
• "Nous n'avons pas réduit nos moyens de modération sur notre plateforme ce n'est pas ce que j'ai dit ce n'est pas ce que je dirais nous avons fait évoluer des règles de modération pas les moyens de modération." (Meta)
• "Toute utilisation par un acteur étranger organisation ou individu de technique numérique majoritairement inauthentique pour s'ingérer dans un débat public numérique nié à une élection... caractérise une ingérence numérique étrangère." (Citation de Viginum par le rapporteur)
• "La question qu'on doit se poser c'est que un événement comparable [à la Roumanie] euh peut-il advenir en France ?" (Président de la commission)
• "Ces pratiques aujourd'hui d'ingérence étrangère de structuration véritablement de campagne hybride... ce sont des choses qu'on observe et nous notre objectif c'est que ça n'arrive pas sur nos plateformes." (Google)
• "Nous luttons contre des ce qu'on appelle des actions coordonnées inauthentiques en fait ce sont des réseaux qui sont créés par des puissances étrangères de faux comptes visant à amener de la désinformation." (Meta)
• "Par l'architecture de notre plateforme on se prête pas euh directement à favoriser les fils d'actualité ouvert... ni de diffusion virale de contenu ni de direct." (Snapchat)
• "Ce type d'acteur maveillant est très bon en fait à jouer en fait sur les vulné des sociétés et à jouer sur les divisions qu'on peut avoir." (X)
• "Comment nous garantir que vos propres algorithmes ne sont pas biaisés politiquement que votre politique de modération n'est pas biaisée politiquement ? Sont pas des instruments au service je dirais d'objectifs politiques qui viennent pour le coup directement impacter la bonne tenue des élections." (Président de la commission)
• "Je pense qu'en réalité on pourra avoir le débat aussi avec avec d'autres plateformes et d'ailleurs on va on va continuer le tour de de table mais c'est intéressant parce que ça permet de rentrer dans la technique et en particulier ça vient sur des questions qu'on a déjà eu notamment avec l'ARCOM l'arcom nous a dit 'Ah bah il y a un sujet qui est posé sur les réseaux sociaux sur notre capacité de contrôle parce que nous on est là pour euh contrôler ceux qui font du contenu éditorial et précisément tout l'enjeu qui est posé sur les plateformes de réseaux sociaux c'est que vous êtes à la fois des plateformes qui permettent une expression que si vous intervenez sur le contenu bah d'une certaine manière vous éditorialisez'." (Rapporteur)
• "L'utilisateur effectivement il y a l'algorithme qui le place en fait dans des contenus qui l'intéressent mais en fait ce qu'on essaie nous de mettre en place en fait c'est un choix pour cet utilisateur." (X)
• "On adopte une approche qui est assez objective on va jamais porter justement de jugement liés à des prispositions politiques spécifiques... ce qui nous concerne sincèrement c'est enfin que ces derniers aient une éthique journalistique qui ne présente pas de désinformation." (Snapchat)
• "L'idée c'est que tout le monde puisse s'exprimer sur la plateforme... il y a pas d'algorithme qui va préférer des idées de gauche ou de droite." (Meta)
• "Les contenus politiques sont autorisés sur la plateforme sans usage on le mentionnait précédemment de nos de nos outils publicitaires et de et de monétisation." (TikTok)

Points d'Attention pour la Commission d'Enquête :

• Transposition de la Roumanie : Le cas de l'élection annulée en Roumanie sur fond de manipulation sur TikTok est une préoccupation majeure. La commission souhaite comprendre les mécanismes précis utilisés pour évaluer le risque pour les élections françaises et d'éventuels besoins législatifs.
• Lien entre Règles de Modération et Débat Politique : Clarifier comment les évolutions des politiques de modération, notamment chez Meta sur des sujets sociétaux, peuvent impacter le débat politique en France et si elles reflètent ou non une "ligne éditoriale" ou une "orientation politique" de la plateforme.
• Impact des Algorithmes sur le Pluralisme : Examiner les méthodes concrètes utilisées par les plateformes pour lutter contre les "bulles de filtre" et assurer une exposition minimale à des opinions diverses, au-delà des options de contrôle utilisateur.
• Rôle des Médias : La discussion a souligné l'importance des médias traditionnels comme rempart, mais aussi la dépendance des médias aux plateformes numériques pour la diffusion et la question de leur financement (droit voisin).
• Désinformation via les Influenceurs : La question de savoir comment les plateformes s'assurent que les influenceurs ne sont pas payés pour diffuser du contenu politique, contournant ainsi la loi électorale sur la publicité, a été soulevée.

Document de Briefing : Analyse des Auditions sur l'Organisation du Système de Santé

Date :2025

Objet : Synthèse des points clés des auditions de l'Ordre et des syndicats de médecins sur l'organisation du système de santé, axée sur l'accès aux soins et la démographie médicale.

Source : Extraits de la table ronde avec l'Ordre et les syndicats des médecins sur l’organisation du système de santé.

Résumé Exécutif :

• Les auditions révèlent une convergence de vues entre l'Ordre et les syndicats de médecins concernant le constat critique de la situation actuelle du système de santé français, en particulier l'accès aux soins et les difficultés démographiques.

Tous les intervenants soulignent l'urgence de trouver des solutions, tout en mettant en garde contre la précipitation et les mesures coercitives.

Les thèmes centraux incluent le manque cruel de données démographiques précises, la transformation de la pratique médicale due au vieillissement de la population et à la multimorbidité, l'iniquité territoriale, la nécessité de collaborateurs médicaux (assistants et infirmières), et l'importance d'une approche territoriale coordonnée et incitative plutôt que coercitive.

La formation des jeunes médecins, l'intégration des retraités et la régulation de certaines activités (comme la médecine esthétique) sont également identifiées comme des leviers essentiels.

Points Clés et Analyses :

Constat Démographique et Accès aux Soins :

• Un accord général sur l'énorme préoccupation concernant l'accès aux soins.
• Le problème démographique a été alerté dès 2010, mais sans réaction suffisante des élus et tutelles.
• Malgré l'augmentation du nombre d'étudiants (4000 par an prévus), les effets positifs sur la démographie médicale ne se feront sentir que dans 5 ans minimum, voire une douzaine d'années pour un impact significatif.
• Le numérus clausus (années 1980-2000) est largement identifié comme la cause principale de la pénurie actuelle. "nous sommes en grande difficulté c'est une réalité", "ça fait 40 ans que ça dure avec un numérus clausus qui a été extrêmement dur".
• Il y a un manque crucial de données démographiques précises et fiables sur le nombre de médecins par spécialité, par type d'exercice (traitant, urgences, soins non programmés, etc.) et par territoire. Impossible de construire une politique de santé efficace sans savoir de quoi on parle. "comment construire une politique de santé quand on ne sait pas de quoi on parle".
• Seulement environ 40 000 médecins généralistes sur près de 100 000 sont considérés comme des "médecins généralistes traitants" ayant en charge un nombre significatif de patients (plus de 200 contrats, moyenne 1000-1100). Cela signifie que 60 % de la profession générale fait autre chose.

Transformation de l'Exercice Médical et Temps Médical Disponible :

• Le temps médical disponible par médecin a diminué : une consultation moyenne prenait plus de temps qu'auparavant (passant de 35 à 25 consultations par jour pour un même temps de travail dans l'exemple donné).
• Cela est dû à deux facteurs principaux :
• Augmentation du temps administratif (+30% en 10 ans). "le temps administratif qui a augmenté de 30 % en 10 ans".
• Multimorbidité et complexité des patients : vieillissement, maladies chroniques multiples, problèmes psychosociaux. "les patients sont plus compliqués ils ont un voire deux voire plus maladies chroniques et ils ont des problèmes psychosociaux".
• La nécessité de collaborateurs médicaux (assistants médicaux, infirmières en pratique avancée - IPA) est cruciale pour aider les médecins dans la gestion administrative et la prise en charge des patients complexes/chroniques. L'assistant médical permettrait de prendre près de 300 patients supplémentaires en médecin traitant et d'augmenter la file active de 120 patients en moyenne.

Iniquité Territoriale et "Effet Dominos" :

• L'iniquité territoriale est une réalité, avec 87% des territoires sous-dotés.
• Les zones rurales sont particulièrement touchées par le départ à la retraite de médecins plus âgés, créant un "effet dominos" : le départ d'un médecin submerge les autres, qui finissent par partir également.
• L'attractivité des territoires est un facteur majeur : les jeunes médecins s'installent avec leur conjoint, et la disponibilité d'emploi et d'infrastructures (crèche, école, etc.) pour la famille est primordiale. Le modèle du "patriarcat médical est mort".

Rejet des Mesures Coercitives :

• Un consensus fort s'exprime contre les mesures coercitives, comme la régulation forcée de l'installation ou le retour des gardes obligatoires.
• Ces mesures sont considérées comme "une mauvaise solution et une solution de facilité" en période de pénurie et pourraient avoir des effets inverses, comme le départ des médecins à l'étranger, vers le salariat ou d'autres secteurs d'activité moins contraignants. "Je crois que c'est un remède qui soit pire que le mal".
• L'expérience de pays ayant mis en place de telles mesures (Canada, Québec) est citée comme exemple de leurs limites.
• Importance de l'Approche Territoriale et Incitative :
• La solution réside dans une organisation territoriale des soins, définie collectivement et adaptée aux besoins locaux. "le mot qui a été prononcé le plus c'est le mot territoire".
• Il faut développer une politique de "aller vers" : faciliter le transport des patients vers les zones de soins et permettre aux médecins d'aller consulter dans les zones sous-dotées (consultations avancées, médicobus). Les consultations avancées sont vues comme un dispositif fonctionnel basé sur le volontariat et la responsabilité collective.
• La permanence des soins (PDSA) est citée comme un exemple de responsabilité collective qui fonctionne (97% du territoire couvert le weekend, 93% en soirée, avec 40% des médecins généralistes participants). L'idée de la rendre obligatoire est vue comme risquant de "casser quelque chose qui est en train petit à petit de s'améliorer".
• Il faut une meilleure coordination entre les différents acteurs de santé sur un territoire (hôpitaux publics/privés, cliniques, médecins libéraux, agences de santé). Le travail "en silo" est délétère.

Formation et Attractivité de la Profession :

• Il est crucial d'augmenter le nombre de terrains de stage en libéral et en établissements privés pour les étudiants en médecine (externes et internes). Cela permettrait de mieux les former aux réalités de l'exercice libéral et de l'ensemble du système de santé. "les stages de nos étudiants en libéral sont indispensables".
• La réforme de la première année de médecine (Numérus Apertus couplée à la réforme) est jugée "extrêmement délétaire", ayant conduit à des abandons importants (15-20% après la 2ème année) et potentiellement une sélection de profils moins adaptés.
• Les internes sont dans un état psychologique "extrêmement altéré".
• Il faut simplifier l'exercice médical pour le rendre plus attractif (auto-déclarations d'arrêt de travail, simplification des prescriptions de transport, etc.).
• La "financiarisation du système de santé" qui oriente l'activité vers ce qui est le plus facile et lucratif, au détriment des besoins de la population, est un problème identifié.

Mobilisation de Ressources Additionnelles :

• Réactiver la réserve médicale en proposant des stages cliniques annuels et un accès à la formation continue pour les médecins retraités volontaires.
• Créer un statut de "médecin retraité remplaçant" pour permettre une activité à temps très partiel sans pénalités financières liées aux charges de retraite active. L'actuel système incite à travailler à plein temps ou pas du tout en retraite active.

Coopération avec les Autres Professions de Santé :

• La coopération avec les autres professions de santé est une "évidence".
• Elle doit se faire dans le cadre d'un exercice protocolisé et coordonné par le médecin, pour garantir la sécurité des patients et éviter une "perte de chance". "il faut unir tout le monde autour des malades la seule chose qui nous importe c'est l'accès aux soins l'absence de perte de chance".

Pertinence des Soins et Prévention :

• La "pertinence des soins" est la "mère des batailles". Elle permet de libérer du temps médical et de générer des économies (environ 30% d'examens seraient non pertinents).
• La prévention est insuffisante et doit être développée, même si ses effets sont à plus long terme. L'exemple du faible taux de vaccination contre la grippe chez les professionnels de santé est cité.
• Régulation de la Médecine Esthétique et Autres Activités Non Essentielles :
• La fuite de médecins (généralistes et spécialistes comme les dermatologues) vers des "niches" comme la médecine esthétique est un problème majeur qui contribue aux difficultés d'accès aux soins. "c'est une plie pour la profession".
• Il est nécessaire d'encadrer la médecine esthétique (et potentiellement d'autres activités où le niveau de preuve scientifique est faible) pour garantir un équilibre entre l'activité "esthétique" et l'activité de "mission de soins".
• Une proposition évoquée est d'encadrer la "double activité" en exigeant que la deuxième activité soit minoritaire par rapport à la spécialité principale.
• L'argument est également avancé que l'interdiction totale de la médecine esthétique par des médecins entraînerait l'essor de praticiens non qualifiés ("fake injectors"), avec des complications sanitaires à la charge de la sécurité sociale. Il faut donc trouver un équilibre.
• La certification des médecins dans leurs différentes activités est une piste pour aborder cette régulation.

Gestion des Médecins Étrangers :

• Les médecins étrangers sont une ressource précieuse, mais il est crucial de maintenir des évaluations sérieuses de leurs compétences ("supprimer les EVC supprimer les PCC supprimer toutes les critères qui permettent de les évaluer est une mauvaise idée").

Propositions Concrètes Évoquées (parmi d'autres) :

• Création d'un observatoire de la démographie en médecine générale.
• Élargissement dans le temps de la mesure protégeant les patients du départ à la retraite de leur médecin traitant.
• Développement massif des assistants médicaux et infirmières en pratique avancée dans les cabinets médicaux.
• Développement des consultations avancées et médicobus dans les zones sous-dotées.
• Mise en place d'un statut de médecin retraité remplaçant et réactivation de la réserve médicale.
• Définition claire des territoires de santé pour l'organisation des soins.
• Intégration de la formation à la régulation et aux gardes dans le cursus universitaire.
• Augmentation des lieux de stage en libéral et privé pour les étudiants.
• Assouplissement des carrières et valorisation des acquis de l'expérience pour les secondes activités minoritaires.
• Encadrement de la médecine esthétique et potentiellement d'autres activités.
• Développement des équipes de soins spécialisés sur les territoires.
• Amélioration de la pertinence des soins.
• Renforcement de la prévention.
• Réflexion sur la carte hospitalière et la permanence des soins en établissement de santé.

Conclusion :

• Les auditions confirment la gravité de la crise d'accès aux soins, largement imputée aux politiques démographiques passées.

L'Ordre et les syndicats plaident pour une approche globale, incitative et basée sur la coopération territoriale pour y remédier. Ils soulignent l'importance cruciale d'investir dans les ressources humaines (médecins et collaborateurs) et de simplifier l'exercice pour le rendre plus attractif.

Le rejet des mesures coercitives est net, au profit de solutions basées sur la responsabilité collective et les incitations.

La nécessaire régulation de certaines activités médicales non essentielles est également un point de convergence fort.

Recommandations Potentielles pour la Commission :

• Appuyer la création d'un observatoire national précis de la démographie médicale par spécialité et mode d'exercice.
• Soutenir les mesures incitatives pour l'installation dans les zones sous-dotées (aides à l'installation, aides aux conjoints, consultations avancées, etc.).
• Promouvoir le développement des assistants médicaux et IPA, et la coopération entre professionnels de santé, en veillant à la coordination médicale.
• Explorer les propositions relatives à la mobilisation des médecins retraités et à la simplification de l'exercice.
• Soutenir l'encadrement de la double activité médicale (notamment la médecine esthétique) pour préserver l'activité de soins essentielle.
• Veiller à l'amélioration de la formation initiale et continue des médecins, y compris l'accès aux stages en libéral et privé.
• Intégrer la réflexion sur la pertinence des soins et la prévention dans les politiques de santé.
• Considérer l'approche territoriale comme le socle de l'organisation future du système de santé, en définissant clairement les besoins et les ressources à l'échelle locale.
• Ce document est une synthèse basée sur les extraits fournis et ne prétend pas couvrir l'intégralité des débats ou des positions des intervenants.

Synthèse de la réunion : Élisabeth Guigou et représentants de Départements de France sur les violences en milieu scolaire

Date de la réunion: 2025

Objectif: Examiner la prise en compte par l'institution judiciaire (Mme Guigou, ancienne Ministre de la Justice) et le rôle des départements (Départements de France) des violences en milieu scolaire, avec un focus particulier sur les cas de violences sexuelles commises par des adultes.

Participants:

• Élisabeth Guigou: Ancienne Ministre de la Justice (1997-2000)
• Représentants de Départements de France: François Sauvadet (Président), Florence d'Abin (Vice-présidente), Anne-Sophie Abgral (Directrice générale adjointe), Yves Lebreton (Directeur général), Paul-Étienne Koffman (Conseiller éducation), Bris Lacourieux (Conseiller relation avec le Parlement), Steven Brunetta (membre du cabinet de Mme Davin).

Principaux thèmes abordés:

• Évolution de la prise en compte des violences sexuelles en milieu scolaire par la justice: Témoignage de Mme Guigou sur son action en tant que Ministre de la Justice, notamment l'élaboration et le vote de la loi du 17 juin 1998.
• Le cas de l'affaire Caricar (Bétarram): Analyse des flux d'information au sein du Ministère de la Justice à l'époque des faits et la question de la transmission des informations entre la justice et le Ministère de l'Éducation Nationale.
• Rôle des départements en matière de protection de l'enfance: Clarification des compétences et des pratiques des départements, en particulier concernant les violences en milieu scolaire.
• Gestion des informations préoccupantes (IP) et des signalements: Examen des procédures, des difficultés rencontrées et des axes d'amélioration dans la transmission des informations entre les différents acteurs (enseignants, CRIP, éducation nationale, justice).

Idées et faits les plus importants:

• Action de Mme Guigou (1997-2000): Mme Guigou a souligné l'importance qu'elle a accordée à la lutte contre les violences sexuelles sur les enfants dès son arrivée au Ministère de la Justice. Elle a trouvé un projet de loi existant mais a décidé de le réorienter pour inclure la protection des victimes et revoir l'approche centrée uniquement sur les auteurs. Cette démarche a abouti à la loi du 17 juin 1998.
• Citation: "J'ai trouvé en juin 97 j'étais loin d'imaginer ce que nous savons maintenant 28 ans après et ce que nous avons découvert petit à petit mais j'ai trouvé un projet de loi qui avait été préparé par mon prédécesseur et qui traitait de la lutte contre les les auteurs de crimes sexuel de de délit ou de crime sexuel je me suis dit que c'était un sujet dont il fallait s'emparer sans tarder c'est en juin 97..."
• Citation: "...nous avons élaboré un projet de loi qui a été voté vous pourrez comprendre à quel point c'est quand même enfin j'en étais contente en 1 an ça a donné lieu à la loi du 17 juin 1998 sur euh la prévention la répression des infractions sexuelles ainsi qu'à la protection des mineurs victimes."
• Cette loi visait notamment à prévenir et réprimer les infractions sexuelles et à mieux protéger les mineurs victimes. Une circulaire a suivi pour préconiser l'enregistrement des premières déclarations des enfants afin d'éviter qu'ils n'aient à répéter leur traumatisme.
• Citation: "...une circulaire dans laquelle je préconisais je demandais qu'on procède à l'enregistrement des premières déclarations des enfants victimes d'abus sexuel pour qu'il n'ait pas à répéter le récit de leur traumatisme évidemment c'était encore plus douloureux donc voilà alors je pourrais revenir sur le contelé de la loi si vous voulez ce qui me semble intéressant de remarquer parce que c'était c'est assez révélateur de l'état d'esprit de l'époque c'est que cette loi elle est passée inaperçu elle est passée sous les radars médiatiques..."
• Indépendance de la justice et flux d'information sous Mme Guigou: Mme Guigou a mis en place une rupture avec les pratiques antérieures en instaurant une règle stricte de non-interférence politique dans les affaires individuelles. Elle a indiqué que les procureurs généraux étaient encouragés à communiquer les affaires sensibles à la Direction des affaires criminelles et des grâces (DACG), et c'était au directeur de la DACG de décider de la transmission au cabinet du Ministre.
• Citation: "quand je suis arrivée au ministère j'ai dit tout de suite ce ministère ne sera plus le ministère des affaires il sera le ministère du droit et donc j'ai fait savoir publiquement à l'Assemblée au Sénat au conseil des ministres et naturellement au au membres du corps judiciaire et parajudiciaire que désormais nous opérer une rupture nette avec les pratiques qui étaient séculaires quand même de absolument tous les gouvernements précédents..."
• Citation: "j'avais demandé à ce que les rapports arrivent directement à la direction des affaires criminelles et des grâces c'était le directeur qui était chargé d'apprécier si oui ou non ces rapports méritait d'être porté à mon attention c'est-à-dire d'être envoyé ou communiqué ou bien dont la teneur était communiquée aux membres de mon cabinet voilà c'est comme ça que ça se passait..."
• Le cas Caricar et la non-information de Mme Guigou: Mme Guigou a affirmé n'avoir aucun souvenir d'avoir été informée de l'affaire Bétarram (Caricar) à l'époque, malgré la transmission de courriers par le procureur général de Pau à la DACG. Elle a appris l'existence de ces documents récemment, dans le cadre de cette audition et de sollicitations médiatiques.
• Citation: "Je dois vous dire tout de suite que je n'ai aucun souvenir d'avoir été informé de l'affaire de l'institution BRAM Bouquin..."

• Citation: "...dans mon souvenir parce que j'ai certainement eu communication euh on m'a certainement on a dû m'informer en tout cas on a informé la direction des affaires criminales des grasses des enquêtes préliminaires ou des ouvertures d'instruction lorsqu'il y avait les plaintes et lorsqu'on pouvait soupçonner de de teles enfin des infractions à la loi tout simplement notamment lorsqu'il s'agissait de crime mais ne m'était communiqué que les affaires qui pouvaient d'effrayer si vous voulez sur lesquelles j'étais susceptible d'être interrogé en réalité voilà c'est-à-dire soit que il y a un écho médiatique important soit qu' ell elles aient été estimées de nature systémique..."

• Absence d'obligation légale de transmission justice-Éducation Nationale avant 2016: Mme Guigou a expliqué que, selon la loi en vigueur à son époque, il n'était pas possible pour le Ministre de la Justice ou les magistrats de transmettre des informations couvertes par le secret professionnel et le secret de l'instruction au Ministère de l'Éducation Nationale, même en cas de suspicion de violences graves en milieu scolaire. Cette possibilité n'a été introduite qu'avec la loi de 2016 (article 11-2 du Code de procédure pénale), avec des précautions importantes.

• Citation: "je vais malheureusement vous répondre non et ça a été le cas jusque en 2016 jusqu'à une loi de 2016 pourquoi ? parce que en tout cas il ne pouvait pas être question ni pour l'administration du ministère de la justice ni pour mon cabinet ni pour moi de déroger à l'application de la loi et la loi nous imposait à la fois de respecter le secret professionnel s'agissant de moi le secret de l'instruction s'agissant des magistrats et la présomption d'innocence..."

• Citation: "C'est vrai que cette ceci a été assoupli en 2016 donc j'ai j'ai pris connaissance de ça à l'occasion de de cette invitation que vous que vous me faites j'ai recherché comment ça avait évolué et j'ai vu que dans cette loi de 2016 madame Tobira à l'époque et madame Valkassem avait ensemble annoncé que dorén avant il pouvait y avoir dans certaines conditions madame Tobéin insistait sur le respect de la préstation d'innocence il pouvait y avoir communication du ministère de la justice au ministère de l'éducation nationale d'information concernant des enquêtes préliminaires..."

• Rôle et limites des départements en matière de protection de l'enfance: Les représentants de Départements de France ont rappelé que la compétence principale des départements en matière de protection de l'enfance concerne l'intrafamilial. Ils sont responsables des collèges sur les aspects fonctionnels (bâtiments, personnel technique, restauration) et financent les établissements privés sous contrat dans certaines limites.

La protection de l'enfant en danger relève de l'autorité parentale en premier lieu, puis des services départementaux en cas de défaillance.

• Citation: "nous avons la charge des collèges mais mais on est une charge des collèges des départements sur le plan strictement fonctionnel c'est-à-dire c'est le bâtis scolaire ce sont nos personnels techniques et puis la la restauration l'exception des établissements privés sauf exception pour lequel la restauration relève de l'établissement..."
• Citation: "le premier responsable lorsque il n'est pas défaillant et que en l'occurrence c'est le l'autorité parentale est assumée par les départements le premier protecteur de l'enfant c'est le parent et je veux le redire tout simplement donc si un enfant subit des violences au sein d'un établissement scolaire c'est le c'est le détenteur de l'autorité parentale qui doit le protéger en prémilieux parce que c'est lui qui l'exerce..."
• Flux d'information entre l'Éducation Nationale et les départements: Les violences commises par des adultes ayant autorité en milieu scolaire relèvent de la responsabilité de l'Éducation Nationale, qui est censée saisir directement l'autorité judiciaire (signalement Article 40) et en adresser une copie au président du département pour information.
• Citation: "et donc les violences qui font l'objet de cette commission d'enquête ne relèvent pas de la de la compétence des départements puisque nous n'exerçons pas d'autorité sur les personnels d'abord sur les enfants évidemment parce qu'ils ont des parents et en plus sur les personnels de ces établissements quels que soient d'ailleurs les établissements en dehors pour les établissements publics hein..."
• Citation: "en cas de violence l'éducation nationale et les fondé à nous adresser en direct un signalement ou en tout cas un direct en signal à l'autorité judiciaire elle peut saisir elle-même l'autorité judiciaire lorsqu'il y a des faits qui ont été commis par l'enseignant une personne qui est autorité dans l'établissement elle fondé adresser en direct un signalement à l'autorité judiciaire elle doit en adresser une copie au président du département concerné pour son pour son information en tant que chef de fil de la protection de l'enfance..."
• Difficultés et pistes d'amélioration dans la gestion des informations préoccupantes (IP): Les départements constatent une hausse des IP. Il existe une sensibilisation croissante de l'Éducation Nationale aux signalements. Cependant, des difficultés persistent, notamment des délais dans la transmission des informations (parfois transmises juste avant les vacances scolaires) et un manque de clarté pour certains enseignants sur les procédures de signalement (distinction entre Article 40 et IP).
• Citation: "on note une hausse significative en ce moment des informations préoccupantes reçues par les cripes je vous l'ai dit nous avons aussi de plus en plus d'enfants à protéger sans doute qu'il y a une prise de conscience qui est salvatrice mais qui voilà qui qui nécessite une réponse c'est beaucoup plus adapté..."
• Citation: "...est-ce que c'est parce que les enseignants se sentent bien seuls parfois ? est-ce qu'il craent la réaction des parents ou les représaillent lorsqu'il y a un signalement ? donc le signal avant les vacances voilà donc on a signalé cela aussi à l'éducation nationale..."
• Rôle des CRIP en cas d'IP atypique: En cas d'IP reçue par la CRIP concernant une violence en milieu scolaire qui devrait normalement relever de l'Éducation Nationale et de l'Article 40, le département procède en principe à un signalement Article 40 auprès du parquet et informe le DSDEN (ou l'inspection académique). Il y a un dialogue pour vérifier les faits et la connaissance par l'Éducation Nationale. Le rôle du département est aussi de voir si les parents sont informés et en capacité d'agir, et de les accompagner si nécessaire.
• Citation (Florence d'Abin): "...si nous sommes réceptacle d'une information quelle qu'elle soit via la cryppe évidemment ça peut être via la cryppe mais quel qu'elle soit puisque au titre de l'article 40 en tant que fonctionnaire et à forcerie en tant que fonctionnaire départementaux chargé de la protection de l'enfance Nous sommes chargés de signaler au parquet toute information et donc si le cas que vous citez par exemple ce qui se passerait... c'est que le collègue qui reçoit l'information donc à la cri tous les jours toutes les informations qui arrivent sont lues... si c'est urgent on traite en priorité dans dans un délai de 24 heures on va saisir le parquet et donc le professionnel qui verrait ça il appellerait immédiatement l'éducation nationale et il dirait voilà est-ce que vous avez besoin d'un soutien pour formaliser euh le signalement puisque normalement effectivement le signalement doit être formalisé par eux..."
• Besoin de formation et de clarification des procédures: Un besoin de formation des enseignants, particulièrement ceux du premier degré, sur les procédures de signalement et le rôle des différents acteurs a été souligné pour sécuriser les professionnels et améliorer la circulation de l'information.
• Citation (Florence d'Abin): "je vais vous rejoindre madame la rapporteur sur euh l'information ou le besoin de sécuriser aussi les enseignants les professeurs et peut-être différentes lectures à la fois les professeurs du premier degré et les professeurs du second degré... on voit bien qu'il y a une faille... sur le besoin spécifique des enseignants du premer degré à être formé acculturé sur le sujet des informations préoccupantes comment ça doit fonctionner ? Vers qui je me tourne ma chef d'établissement mon chef d'établissement et qu'est-ce qui en découle pour justement éviter ce que pointait le président Sauvadet à savoir l'influx des informations préoccupantes souvent fin juin début juillet..."
• Fragilité de la médecine scolaire: La faiblesse de la médecine scolaire en France a été soulignée comme un enjeu majeur pour le suivi de la santé des enfants et la prévention.

Points de divergence / Nuances:

• Mme Guigou a exprimé sa surprise et son regret de ne pas avoir été informée de l'affaire Caricar à l'époque, tout en réaffirmant que cela ne l'aurait pas conduite à donner d'instructions individuelles mais potentiellement à émettre une circulaire de politique pénale générale sur le sujet.

• Les représentants de Départements de France ont insisté sur le fait que la responsabilité première des violences en milieu scolaire incombe à l'Éducation Nationale, même s'ils agissent en cas d'IP pour ne pas laisser une situation de danger sans réponse.

Questions en suspens / Recommandations implicites:

• Comment assurer une transmission fluide et systématique des informations entre tous les acteurs concernés (Éducation Nationale, justice, départements, familles) en cas de violences en milieu scolaire ?
• Comment mieux former et sécuriser les enseignants dans les procédures de signalement ?
• Comment renforcer la médecine scolaire et la prise en charge de la santé mentale des jeunes ?
• Faut-il revoir ou préciser les textes réglementaires pour clarifier les rôles et obligations de chacun, notamment concernant la transmission d'informations sensibles ? (La loi de 2016 a été un pas, mais son application et ses limites doivent être évaluées).
• Faut-il harmoniser les systèmes d'alerte et de protection en cas de danger dans les établissements scolaires ?

Conclusion:

• Ces auditions ont mis en lumière la complexité des circuits d'information et des responsabilités en matière de violences en milieu scolaire.

Si des progrès ont été réalisés dans la prise de conscience et la réponse judiciaire (loi de 1998, loi de 2016), des dysfonctionnements persistent dans la transmission des informations et la coordination entre les différents acteurs.

Les départements, bien que leur compétence principale soit l'intrafamilial, jouent un rôle essentiel dans la protection de l'enfance et sont souvent en première ligne face aux informations préoccupantes.

Des efforts de formation, de clarification des procédures et de renforcement des liens entre les institutions semblent nécessaires pour mieux protéger les enfants victimes de violences.

Prochaines étapes:

• La commission d'enquête continuera ses travaux en auditionnant d'autres acteurs pour approfondir ces questions et formuler des propositions concrètes.

key word

oh my god please stop with the roman numerals

Existe un problema de reconocimiento.

El Gobierno Regional de Huánuco estaría involucrada.

Problema donde el gobierno local y regional parecen no intervenir.

Note de Briefing : "Bernard Lahire. Les structures fondamentales des sociétés humaines"

Source: Extraits de la rencontre Kern.info avec Bernard Lahire, auteur de "Les structures fondamentales des sociétés humaines".

Date: 2025

Objet: Revue des thèmes principaux et des idées clés présentées par Bernard Lahire concernant son ouvrage "Les structures fondamentales des sociétés humaines".

Résumé:

• Bernard Lahire, sociologue et professeur, présente son dernier ouvrage qui se propose de revisiter les questions fondamentales de la sociologie et des sciences sociales en adoptant une approche comparative large.

L'originalité de son travail réside dans la comparaison non seulement entre différentes sociétés humaines à travers l'histoire et la géographie, mais aussi avec les sociétés animales, en puisant dans des disciplines telles que l'éthologie et la biologie évolutionniste.

Lahire critique l'atomisation et le constructivisme excessif des recherches contemporaines, plaidant pour une synthèse des acquis et la formulation de "lois" ou principes généraux du social.

Il identifie des invariants structurels, comme la domination et l'opposition "nous/eux", en soulignant leurs corrélats biologiques et culturels, tout en rejetant une biologisation du social au profit d'une "sociologisation" étendue.

L'ouvrage se veut un hommage aux sciences sociales et un appel à une collaboration interdisciplinaire renouvelée pour mieux comprendre la spécificité humaine et les défis sociaux contemporains.

Thèmes Principaux et Idées Clés:

• Reposer les Questions Fondamentales des Sciences Sociales: Lahire constate que les sciences sociales se sont habituées à éviter les questions trop générales, jugées trop philosophiques ou métaphysiques. Son livre vise à redonner aux sciences sociales la capacité de répondre à ces interrogations profondes sur ce que nous sommes, pourquoi nous vivons en société, et la spécificité humaine.
• Citation: "...dire des choses qu'on s'était habitué à ne plus dire en fait dans les sciences sociales poser des questions qu'on s'était habitué à ne plus poser en les trouvant trop général trop trop philosophique ou trop métaphysique comme on dit parfois..."
• Citation: "...les sciences sociales ont maintenant la possibilité de répondre à des questions qu'on jugeait auparavant métaphysique ou spéculative..."
• Méthode Comparative Large et Interdisciplinarité: L'approche de Lahire est explicitement comparative, étendant la comparaison non seulement entre sociétés humaines variées (historiquement et géographiquement) mais aussi aux sociétés animales. Il intègre les apports de diverses disciplines : sciences sociales (histoire, anthropologie, sociologie), préhistoire, paléoanthropologie, éthologie, et biologie évolutionniste.
• Citation: "...vous utilisez une méthode comparative vous comparez différentes sociétés humaines à différentes époques et en plus d'inclure les résultats de différentes sciences sociales vous allez aussi chercher du côté des sciences de la nature et on trouve des références bah notamment en éthologie en biologie évolutionniste..."
• Citation: "...pour arriver à dire des choses assez fondamentales sur ce que nous sommes nous humains il fallait forcément comparer euh comparer à l'intérieur des sociétés humaines effectivement comme vous l'avez dit mais aussi comparer par rapport à d'autres formes de vie sociales que des des des sociétés euh spécifiquement humaines..."
• Synthèse et Cumulativité Scientifique: L'ouvrage est une synthèse des travaux menés en sciences sociales depuis un siècle et demi. Lahire déplore le manque de cumulativité scientifique dans les sciences humaines et sociales, qui tendent à repartir de zéro au lieu de capitaliser sur les acquis et de formuler des lois ou principes généraux, à l'instar des sciences de la nature.
• Citation: "...mon travail relève un peu de ça alors je sais pas s'il sera internationalisé mais j'espère bien qu'il sera traduit dans différentes langues mais en tout cas je je fais de la synthèse pour aider en fait les gens qui qui me liront à ne pas partir de zéro en fait c'est ça un des gros problèmes je crois des sciences humaines et sociales à l'heure actuelle c'est qu'elles ont tendance à ne pas s'organiser pour constituer des des de la cumulativité scientifique comme on dit c'est-à-dire de dire on a des acquis on les formule et puis comme ça on peut s'appuyer sur eux pour aller un peu plus loin..."
• Citation: "...il y a des invariants il y a des régularités il y a des des constantes et il y a des lois très très générales de fonctionnement..."
• Critique de l'Atomisation et du Constructivisme Radical: Lahire s'inscrit en faux contre l'éclatement des recherches en sociologie, souvent fascinées par les variations et les singularités, au détriment de la mise en évidence des invariants. Il critique également une forme de constructivisme épistémologique qui douterait de l'existence d'une réalité extérieure à l'observateur.
• Citation: "...vous vous commencez l'ouvrage en parlant d'une certaine insatisfaction face à une atomisation des recherches en sociologie qui serait comme fasciné par les variations et qui tendent à oublier ces ces invariants que que vous mettez en en lumière..."
• Citation: "...il y a aussi un constructivisme épistémologique qui consiste à dire que nous n'avons que des points de vue que des regards sur une réalité dont certains doutent..."
• Plaidoyer pour un Réalisme Constructiviste: Lahire propose de concilier la prise en compte du regard construit de l'observateur avec l'affirmation de l'existence d'un réel à découvrir qui résiste à nos regards.
• Citation: "...le réalisme constructiviste ça veut dire il faut pas être naïf on a bien un regard particulier un point de vue particulier et des méthodes particulières d'accès au réel mais il y a il y a un réel qui euh ben résiste parfois à nos regards..."
• Distinction entre Social, Culturel et Historique: Lahire insiste sur la nécessité de démêler ces notions. La vie sociale existe chez de très nombreuses espèces (même peu culturelles). La culture est une forme de transmission, plus développée chez l'homme et surtout cumulative. L'histoire est une conséquence de l'accumulation culturelle. Cette distinction permet de mieux comprendre ce qui est spécifiquement humain.
• Citation: "...vous dénoncez notamment une confusion entre le social le culturel et l'historique et confusion qui a qui est lourde aussi de conséquence pour la définition des des disciplines..."
• Citation: "...la vie sociale on la on la trouve chez de très nombreuses espèces même les les moins culturels..."
• Citation: "...nous nous avons comme particularité d'avoir une culture qui se cumule qui s'accumule au cours de l'histoire..."
• Citation: "...l'histoire est une conséquence de l'accumulation culturelle..."
• Extension du "Social" aux Espèces Non-Humaines: En s'appuyant sur l'éthologie, Lahire montre que le social ne se limite pas aux humains. Il existe des formes de structuration sociale, de hiérarchie, de relations parents-enfants, d'évitement de l'inceste, etc., chez diverses espèces animales (primates, fourmis, oiseaux). Il propose une "sociologisation" de ces phénomènes, souvent considérés comme purement biologiques.
• Citation: "...le lieu du social est en un sens plus large que que que ne l'a pensé la sociologie pendant longtemps puisque vous comparer les sociétés animales aux sociétés humaines..."
• Citation: "...il y a des lois sociales qui structure aussi la vie des groupes d'espèces non humain non humaine et ça il faut s'habituer en fait à reconsidérer n nos catégories nature culture ça fonctionne pas..."
• La Dominance comme Invariant Structuel: Lahire identifie l'universalité de la domination dans les sociétés humaines, qu'il relie au phénomène biologique de l'altricialité secondaire (la longue dépendance du petit humain vis-à-vis des adultes). Cette expérience précoce de dépendance et de domination parentale sert de matrice à d'autres formes de domination (politique, économique, culturelle).
• Citation: "...l'un des faits que vous que vous observez dans toutes les sociétés humaines c'est le l'universalité du du fait de la domination..."
• Citation: "...cette altricialité a des effets sociaux immédiats c'est-à-dire que il y a des corrélats sociaux à cette à ce fait biologique ou des conséquences sociales de ce fait biologique puisque ça suppose que la première expérience humaine universelle quelle que soit la culture c'est le fait d'être sous domination parentale..."
• L'Opposition "Nous/Eux" comme Invariant Trans-Espèces: Le phénomène de distinction et d'opposition entre le groupe d'appartenance ("nous") et les groupes extérieurs ("eux") est un autre invariant, observable chez les animaux (fourmis, chimpanzés) et prenant des formes culturelles multiples et variées chez les humains (conflits entre quartiers, villes, nations, etc.).
• Citation: "...un autre invariant que vous soullignez et qu'on trouve même chez les chimpanzés c'est l'opposition entre nous et eux qui est une sorte d'invariant..."
• Citation: "...on se rend compte de plus en plus qu'il y a des logiques sociales il y a des lois sociales générales qui sont transespèces et qui prennent des formes particulières chez nous parce que nous avons des formes culturelles qui s'ajoutent à ces grandes lois sociales..."
• Conséquences Sociales des Propriétés Biologiques: Lahire insiste sur l'étude des effets sociaux ou corrélats sociaux des propriétés biologiques spécifiques à l'espèce humaine (comme l'altricialité ou la longévité), plutôt que de réduire le social au biologique. La longue longévité humaine, par exemple, permet la cohabitation de plusieurs générations, favorisant la transmission et l'accumulation culturelle.
• Citation: "...ce qui m'intéresse c'est les effets sociaux de ces propriétés biologiques alors souvent les les sociologues ou les chercheurs en sciences sociales plus généralement pensent que comme nous avons tous les mêmes propriétés biologiques c'est quelque chose qu'on peut négliger..."
• Citation: "...ces différences ces spécificités biologiques ces propriétés biologiques ont des conséquences tout à fait sociales et parfois même culturelles..."
• Interdiction/Évitement de l'Inceste: Lahire souligne que l'évitement de l'inceste n'est pas propre à l'homme mais existe chez de nombreuses espèces animales non humaines. La spécificité humaine réside dans la formulation de cet évitement sous forme de tabou ou d'interdit culturel et langagier. Il invite à étudier les exceptions à cette règle dans les sociétés humaines pour mieux comprendre les mécanismes en jeu.
• Coopération et Entraide: Si l'ouvrage met en évidence la domination et l'opposition, Lahire rappelle l'importance de l'entraide et de la coopération, particulièrement liées à l'expérience du soin parental (le "care") et à la division du travail dans les sociétés humaines. L'entraide, observable chez les animaux, a pris une dimension élargie chez l'homme.
• Implications pour la Formation et la Recherche en Sciences Sociales: Lahire plaide pour une réorganisation de la formation, incluant par exemple des cours d'éthologie pour les étudiants en sociologie. L'objectif est d'élargir "l'imagination scientifique" et de favoriser les comparaisons interdisciplinaires et trans-espèces. Il ne s'agit pas d'une dispersion mais d'un enrichissement et d'une clarification du regard.
• Citation: "...tout étudiant en sociologie devrait avoir un cours d'éthologie ça me paraît évident..."
• Citation: "...je pense que toutes ces toutes ces disciplines en fait ont des choses à dire sur des formes de structuration social et et donc euh c'est très simple d'enseigner ces chosesl euh à des étudiants qui d'un coup auront pas du tout les mêmes imaginations scientifiques..."
• Dialogue avec d'Autres Disciplines et Réception de l'Ouvrage: Lahire indique avoir cherché à dialoguer avec des experts d'autres domaines pour valider ses analyses. Il constate des retours positifs de collègues en anthropologie, préhistoire et même biologie, suggérant que son travail ouvre des perspectives pour une meilleure compréhension mutuelle et de nouvelles collaborations.

Enjeux et Perspectives:

L'ouvrage de Bernard Lahire propose un cadre ambitieux pour les sciences sociales, en les invitant à sortir de l'émiettement et à embrasser une perspective plus large, intégrant les acquis des sciences du vivant pour mieux comprendre la spécificité humaine et les invariants sociaux. En formulant des lois générales et en identifiant des structures fondamentales, il espère contribuer à la cumulativité scientifique et à un dialogue renouvelé entre disciplines. Son approche réaliste constructiviste cherche à fonder la connaissance sociale sur la reconnaissance d'un réel objectif, tout en tenant compte de la subjectivité du regard scientifique.

Le succès de cet appel dépendra de la capacité des chercheurs en sciences sociales à accepter cette ouverture et à intégrer ces perspectives nouvelles dans leurs travaux, potentiellement en redéfinissant les objets d'étude et les méthodes de comparaison. La réception positive observée jusqu'à présent, notamment au sein de la collection qu'il dirige, laisse entrevoir la possibilité d'un changement de regard et d'un renforcement des liens interdisciplinaires.

Conclusion:

"Les structures fondamentales des sociétés humaines" est un ouvrage stimulant qui invite à repenser les fondements de la sociologie et des sciences sociales. En puisant dans une variété de disciplines et en comparant l'humain aux autres espèces, Lahire propose une vision intégrative du social, mettant en évidence des invariants et des lois générales. Ce faisant, il offre des outils pour mieux comprendre les mécanismes sociaux profonds et, potentiellement, pour aborder les défis sociaux contemporains avec un regard renouvelé et enrichi.

Cette note de briefing cherche à capturer l'essentiel de l'entretien et des idées clés de l'ouvrage, en s'appuyant sur les propres termes de Bernard Lahire. N'hésitez pas si vous souhaitez des précisions ou un développement sur un point particulier.

Note: This response was posted by the corresponding author to Review Commons. The content has not been altered except for formatting.

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Reply to the reviewers

Reviewer #1 (Evidence, reproducibility and clarity (Required)):*

Summary: Chitin is a critical component of the extracellular matrix of arthropods and plays an essential role in the development and protection of insects. There are two chitin synthases in insects: Type A (exoskeletons) and Type B (for the peritrophic matrix in the gut). The study aims to investigate the specificity and mechanisms of the two chitin synthases in D. melanogaster and to clarify whether they are functionally interchangeable. Various genetic manipulations and fluorescence-based labeling were used to analyze the expression, localization, and function of Kkv and Chs2 in different tissues. Chs2 is expressed in the PR cells of the proventriculus and is required for chitin deposition in the peritrophic matrix. Kkv can deposit chitin in ectodermal tissues but not in the peritrophic matrix, whereas Chs2 can deposit chitin in the peritrophic matrix but not in ectodermal tissues. The subcellular localization of chitin synthases is specific to the tissues in which they are expressed. Kkv localizes apically in ectodermal tissues, whereas Chs2 localizes apically in the PR cells of the proventriculus. Altogether, Kkv and Chs2 cannot replace each other. The specificity of chitin synthases in D. melanogaster relies on distinct cellular and molecular mechanisms, including intracellular transport pathways and the specific molecular machinery for chitin deposition.*

• *

Congratulations on this incredible story and manuscript, which is straightforward and well-written. However, I have some comments that may help to improve it.

We thank the reviewer for this very positive comment. We have addressed all comments to clarify and improve our manuscript.

Major comments: 1.) Funny thing: the Chs2 mutant larva shows a magenta staining below the chitin accumulation of the esophagus, which looks like a question mark in 1H but cannot be found in control. Is that trachea reaching the pv?

We assume that the reviewer refers to Fig 1N. As the reviewer suspects, this corresponds to a piece of trachea. Figure 1N shows a single section, making it difficult to identify what this staining corresponds to. We are providing below a projection of several sections where it is easier to identify the staining as tracheal tissue (arrow).

We are now marking this pattern as trachea (tr) in the manuscript Figure 1N

2.) Also, though it is evident that the PM chitin is lost in Ch2 mutants, could it be that the region is disturbed and cells express somewhere else chitin? There are papers by Fuß and Hoch (e.g., Mech of Dev, 79, 1998; Josten, Fuß et al., Dev. Biol.267, 2004) using markers such as Dve, Fkh, Wg, Delta, and Notch, etc. for precisely marking the endodermal/ectodermal region in the embryonic foregut/proventriculus. It would be beneficial to show, along with chitin and Chs expression patterns, the ectoderm/endoderm cells. This is particularly important as the authors report endodermal expression of Chs2 in embryos but don't use co-markers of the endodermal cells.

We agree with the reviewer that this is an important issue and we note that Reviewer 2 also raised the same point. Therefore, we have addressed this issue.

We obtained an antibody against Dve, kindly provided by Dr. Hideki Nakagoshi. Dve marks the endodermal region in the proventriculus (Fuss and Hoch, 1998, Fuss et al., 2004, Nakagoshi et al., 1998).This antibody worked nicely in our dissected L3 digestive tracts and allowed us to mark the endodermal region. We also obtained an antibody against Fkh, kindly provided by Dr. Pilar Carrera. Fkh marks the ectodermal foregut cells (Fuss and Hoch, 1998, Fuss et al., 2004). While, in our hands, this antibody performed well in embryonic tissues, we observed no staining in our dissected L3 digestive tracts. The reason for this is unclear, but we suspect technical limitations may be responsible (the ectodermal region of the proventriculus is very internal, potentially hindering antibody penetration). To circumvent this inconvenience, we tested a FkhGFP tagged allele available in Bloomington Stock Center. Fortunately, we were able to detect GFP in ectodermal cells of L3 carrying this allele. Using this approach, we conducted experiments to detect Fkh and Dve in the wild type or in Df(Chs2) conditions (Fig S1). In addition, we used these markers to map the expression of Kkv and Chs2 in the proventriculus (Fig 4).

Altogether the results using these endodermal/ectodermal markers confirmed the presence of a cuticle adjacent to the FkhGFP-positive cells and a PM adjacent to the PR cells, marked by Dve. This PM is absent in Df(Chs2) L3 escapers, however, the general pattern of Fkh/Dve expression is not affected. Finally, we show that Chs2-expressing cells are positive for Dve while Kkv-expressing cells are not. We were unable to conduct an experiment demonstrating Kkv and Fkh co-expression due to technical incompatibilities, as both genes require the use of GFP-tagged alleles to visualise their expression. However, we believe that our imaging of Dve/Kkv clearly shows that Kkv expressing cells lack Dve expression and are localised in the internal (ectodermal) region of the proventriculus (Fig 4E).

3.) The origin of midgut chitin accumulation is unclear. Chitin can come from yeast paster. Can the authors check kkv and chs2 mutants for food passage and test starving L1 larvae to detect chitin accumulation in the midgut without feeding them?

This is a very interesting point that has also intrigued us.

We observed that, in addition to the PM layer lining the midgut epithelium, CBP staining also revealed a distinct luminal pattern. Our initial hypothesis was that this pattern corresponded to the PM. However, its presence in Df(Chs2) larval escapers clearly indicates that this is not the case. Unfortunately, we cannot assess this pattern in kkv mutants, as these die at eclosion and do not proceed to larva stages.

As the reviewer suggests, a likely possibility is that the luminal pattern originates from components in the food. These could correspond to yeast, as suggested by the reviewer, or possibly remnants of dead larvae present in the media (although Drosophila is considered herbivore in absence of nutritional stress).

To assess whether the luminal pattern originates from the food we conducted two independent experiments. In experiment 1, we collected larvae reared under normal food conditions. Newly emerged L3 larvae were transferred in small numbers to minimise cannibalism (Ahmad et al., 2015) to new Petri plates containing moist paper. Larvae were starved for 3,4 or 5 days. Larvae starved for more than 5 days did not survive. We then dissected the guts and analysed CBP staining. We observed the presence of luminal CBP staining in these larvae, along with the typical PM signal in the proventriculus and along the midgut. In experiment 2, we collected larvae directly on agar plates containing only agar (without yeast or any other nutrients). We allowed the larvae to develop. These larvae showed minimal growth. We dissected the guts of these small larvae (which were challenging to dissect) and analysed CBP staining. Again, we detected presence of luminal CBP staining.

These experiments indicate that, despite starvation, a luminal chitin pattern is still detected, suggesting that it is unlikely to originate from food. However, we cannot unequivocally rule out the possibility that the cannibalistic, detrivorous or carnivorous behavior of the nutrionally stressed larvae (Ahmad et al., 2015) in our experiments may influence the results. Therefore, more experiments would be required to address this point.

In summary, while we cannot provide a definitive answer to the reviewer's question, nor fully satisfy our own curiosity, we would like to note that this specific observation is unrelated to the main focus of our study, as we have confirmed that the luminal pattern is not dependent on Chs2 function.

Portions of midgut of starved larvae under the regimes indicated, stained for chitin (CBP, magenta). Note the presence of the luminal chitin pattern in the midgut

4.) Subcellular localization assays require improved analysis, such as a co-marker for the apical membrane and statistical analysis with co-localization tools, showing the overlap at the membrane and intracellularly with membrane co-markers and KDEL.

We have addressed the point raised by the reviewer. To analyse and quantify Chs2 subcellular localisation, particularly considering the observed pattern, we decided to use both a membrane and an ER marker. As a membrane marker we used srcGFP expressed in tracheal cells (see answer to point 7 of Reviewer 1) and as an ER marker we used KDEL. In this analysis, tracheal cells also expressed Chs2, which was visualised using the Chs2 antibody generated in the lab.

To assess the colocalisation of Chs2 with each marker we used the JaCop pluggin in Fiji. We analysed individual cells from different embryos stained for membrane/ER/Chs2 using single confocal sections (to avoid artificial colocalisation). Images were processed as described in Materials and Methods. We obtained the Pearson's correlation coefficient (r), which measures the degree of colocalisation, for Chs2/srcGFP and Chs2/KDEL, n=36 cells from 9 different embryos. The average r value for Chs2/srcGFP was 0,064, while the average for Chs2/KDEL was around 0,7. r ranges between -1 and 1, where 1 indicates perfect correlation, 0 no correlation, and -1 perfect anti-correlation. Typically, an r value of 0.7 and above is considered a strong positive correlation, whereas a value below 0,1 is regarded as very weak or no correlation. Thus, our colocalisation analysis supports the hypothesis that Chs2 is primarily retained in the ER when expressed in non-endogenous tissues, likely unable to reach the membrane.

We have reorganised the figures and now present an example of Chs2/srcGFP/KDEL subcellular localisation in tracheal cells and the colocalisation analysis in Fig 5H. The colocalisation analysis is described in the Materials and Methods section.

Minor comments:

5.) The authors used "L3 larval escapers." It would be interesting to know if the lack of Chs2 and the peritrophic matrix cause any physiological defects or lethality.

The point raised by the reviewer is very interesting and relevant. The peritrophic matrix is proposed to play several important physiological roles, including the spatial organisation of the digestive process, increasing digestive efficiency, protection against toxins and pathogens, and serving as a mechanical barrier. Therefore, it is expected that the absence of chitin in the PM of the Df(Chs2) larval escapers may cause various physiological effects.

Analysing these effects is a complex task, and it constitutes an entire research project on its own. In addressing the physiological requirements of the PM, we aim to analyse adult flies and assess various parameters, including viability, digestive transit dynamics, gut integrity, resistance to infections, fitness and fertility.

A critical initial challenge in conducting a comprehensive analysis of the physiological requirements of the PM is identifying a suitable condition to evaluate the absence of Chs2. In this work we are using a combination of two overlapping deficiencies that uncover Chs2, along with a few additional genes (as indicated in Fig S1F). This deficiency condition presents two major inconveniences: first, the observed defects could be caused or influenced by the absence of genes other than Chs2, preventing us from conclusively attributing the defects to Chs2 loss (unless we rescued the defects by adding Chs2 back as we did in the manuscript). Second, the larva escapers, which are rare, do not survive to adulthood (indicating lethality but preventing us from analysing specific physiological aspects).

To overcome these limitations, we are currently working to identify a genetic condition in which we can specifically analyse the absence of Chs2. We have identified several available RNAi lines and we are testing their efficiency in preventing chitin deposition in the PM. Additionally, we are characterising a putative null Chs2 allele, Chs2CR60212-TG4.0. This stock contains a Trojan-GAL4 gene trap sequence in the third intron, inserted via CRISPR/Cas9. As described in Flybase (https://flybase.org/), the inserted cassette contains a 'Trojan GAL4' gene trap element composed of a splice acceptor site followed by the T2A peptide, the GAL4 coding sequence and an SV40 polyadenylation signal. When inserted in a coding intron in the correct orientation, the cassette should result in truncation of the trapped gene product and expression of GAL4 under the control of the regulatory sequences of the trapped gene. We already know that, when crossed to a reporter line (e.g. UAS-GFP or UAS-nlsCherry) this line reproduces the Chs2 expression pattern, suggesting that the insertion may generate a truncated Chs2 protein. This line would represent an ideal tool to assess the absence of Chs2, and we are currently characterising it for further analysis

In summary, we fully agree with the reviewer that investigating the physiological requirements of the PM is a compelling area of research, and we are actively addressing this question. However, this investigation constitutes a substantial and independent research effort that we believe is beyond the scope of the current manuscript at this stage.

6.) The order identifiers are missing for materials and antibodies, e.g., anti-GFP (Abcam), but Abcam provides several ant-GFP; which was used? Please provide order numbers that guarantee the repeatability for others.

We have now added all identifiers for materials and reagents used, in the materials and methods section.

7.) Figure S5C, C', what marks GFP (blue) in the trachea? Maybe I have overlooked the description. What is UASsrcGFP? What is the origin of this line?

We apologise for not providing a more detailed description of the UASsrcGFP line. This line corresponds to RRID BDSC#5432, as now indicated in Materials and Methods section.

In this transgene, the UAS regulatory sequences drive the expression of GFP fused to Tag:Myr(v-src). As described in Flybase (https://flybase.org/), the P(UAS-srcEGFP) construct contains the 14 aa myristylation domain of v-src fused to EGFP. This tag is commonly used to target proteins of interest to the plasma membrane. The construct was generated by Eric Spana and is available in Drosophila stock centers.

We typically use this transgene as a plasma membrane marker to outline cell membrane contours. In our experiments, srcGFP, under the control of the btlGal4 promoter, was used to visualise the membrane of tracheal cells in relation to Chs2 accumulation. As indicated in point 4, we have now transferred the images of srcGFP/Chs2/KDEL to the main Figures and used it for colocalisation analyses.

8.) The authors claim that they validated the anti-Chs2 antibody. However, they show only that it recognizes a Cht2 epitope via ectopic expression. For more profound validation, immune staining is required in deletion mutants, upon knockdown, or upon expression of recombinant proteins, which is not shown.

We generated an antibody against Chs2. We found that the antibody does not reliably detect the endogenous Chs2 protein, and so we find no pattern in the proventriculus or any other tissue in our immunostainings. It is very possible that the combination of low endogenous levels of Chs2 with a sub-optimal antibody (or low titer) leads to this result. In any case, as the antibody does not detect endogenous Chs2, it cannot be validated by analysing the expression upon Chs2 knockdown. In contrast, our antibody clearly detects specific staining in various tissues (e.g. trachea, salivary glands, gut) when Chs2 is expressed using the Gal4/UAS system, confirming its specificity for Chs2. It is worth to point that it is not unusual to find antibodies that are not sensitive enough to detect endogenous proteins but can detect overexpressed proteins (e.g

(Lebreton and Casanova, 2016)).

As an additional way to validate the specificity of our antibody, we have used the chimeras generated, as suggested by the reviewer. As indicated in the Materials and Methods section, the Anti-Chs2 was generated against a region comprising 1222-1383 aa in Chs2, with low homology to Kkv. This region is present in the kkv-Chs2GFP chimera but absent in Chs2-KkvGFP (see Fig 7A). Accordingly, our antibody recognises kkv-Chs2GFP but does not recognise Chs2-KkvGFP (Fig S7).

We have revised the text in chapter 6 (6. Subcellular localisation of Chs2 in endogenous and ectopic tissues) to clarify these points and we have added the validation of the antibody using the chimeras in chapter 8 (8. Analysis of Chs2-Kkv chimeras) and Fig S7

9) The legend and text explaining Fig. 4 D-E' can be improved. The authors used the Crimic line, which is integrated into the third ("coding") intron. This orientation can lead to the expression of Gal4 and cause a truncated version of the protein (according to Flybase). Is Chs2 expression reduced in the crimic mutant? If the mutation causes expression of a truncated version, the Chs2 antibody may not be able to detect it as it recognizes a fragment between 1222 and 1383 aa? Also, I'm unsure whether the Chs2 antibody or GFP was used to detect expression in PR cells. The authors describe using Ch2CR60212>SrcGFP together with Chs2+ specific antibodies.

We apologise for the confusion.

As the reviewer points, Chs2CR60212-TG4.0 contains a Trojan-GAL4 gene trap sequence in the third intron, inserted via CRISPR/Cas9. As described in Flybase (https://flybase.org/), the inserted cassette contains a 'Trojan GAL4' gene trap element composed of a splice acceptor site followed by the T2A peptide, the GAL4 coding sequence and an SV40 polyadenylation signal. When inserted in a coding intron in the correct orientation, the cassette should result in truncation of the trapped gene product and expression of GAL4 under the control of the regulatory sequences of the trapped gene.

We found that when crossed to UAS-GFP or UAS-nlsCherry, this line reproduces a expression pattern that must correspond to Chs2. As the antibody that we generated is not suitable for detecting Chs2 endogenous expression, we resorted to using this combination, Chs2CR60212-TG4.0 crossed to a reporter line (such asUAS-GFP or UAS-nlsCherry), to visualise Chs2 expression by staining for GFP/Cherry in the intestinal tract and in the embryo (Figures 4 and S4).

We realise that the Figure labelling we used in our original submission is very misleading, and we apologise for this. In the original figures we had labelled the staining combination with Kkv, Chs2, Exp as if we had used these antibodies. However, in all cases, we used GFP to visualise the pattern of these proteins in the genetic combinations indicated in the figures. We have corrected this in our revised version. We have also updated the text (Chapter 5), figures and figure legends.

As the reviewer points, the insertion in Chs2CR60212-TG4.0 is likely to generate a truncated Chs2 protein. We cannot confirm this using the Chs2 antibody we generated because it does not recognise the endogenous Chs2 pattern. Nevertheless, as indicated in point 5, we are currently characterising this line. Our preliminary results indicate a high complexity of effects from this allele that require thorough analysis, as it may be acting as a dominant negative.

Reviewer #1 (Significance (Required)):

Significance: The manuscript's strength and most important aspects are the genetic analysis, expression, and localization studies of the two Chitin synthases in Drosophila embryos and larvae. However, beyond this manuscript, the development of mechanistic details, such as interaction partners that trigger secretion and action at the apical membranes and the role of the coiled-coil domain, will be interesting.

The manuscript uses "first-class" genetics to describe the different roles of the two Chitin synthases in Drosophila, comparing ectodermal chitin (tracheal and epidermal chitin) with endodermal (midgut) chitin. Such a precise analysis has not been investigated before in insects. Therefore, the study deeply extends knowledge about the role of Chitin synthases in insects.

The audience will specialize in basic research in zoology, developmental biology, and cell biology regarding - how the different Chitin synthases produce chitin. Nevertheless, as chitin is relevant to material research and medical and immunological aspects, the manuscript will be fascinating beyond the specific field and thus for a broader audience.

I'm working on chitin in the tracheal system and epidermis in Drosophila.

__Reviewer #2 (Evidence, reproducibility and clarity (Required)): __ Drosophila have two different chitin synthase enzymes, Kkv and Chs2, and due to unique expression patterns and mutant phenotypes, it is relatively clear that they have different functions in producing either the cuticle-related chitin network (Kkv) or the chitin associated with the peritrophic matrix (PM). However, what is unknown is whether the different functions in making cuticle vs PM chitin is related to differences in cellular expression and/or enzyme properties within the cell. The authors exploit the genetic tractability of Drosophila and their ability to image cuticle vs PM chitin production to examine whether these 2 enzymes can substitute each other. They conclude that these two proteins are not equivalent in their capacity to generate chitin. The data are convincing; however, it is currently presented in a subjective fashion, which makes it difficult to interpret. Additionally, in my opinion there is some interpretation that requires softening or alternatively interpreted.

We are pleased that the reviewer finds our data convincing. However, we acknowledge the reviewer's concern that our data was presented in a subjective manner, and we apologise for this. In response, we have carefully reviewed the entire manuscript and revised our data presentation to ensure a more objective tone. Numerous changes (including additional quantifications, new experiments and clarifications) have been incorporated throughout the text. These revisions are highlighted in the marked-up version. We hope that this revision provides a more accurate and objective presentation of our work.

Major Comments:

1- While the imaging is lovely, there are some things that are difficult to see in the figures. For example, the "continuous, thin and faint 'chitin' layer that lined the gut epithelium" is very difficult to visualise in the control images. Can they increase the contrast to help the reader appreciate this layer? This is particularly important as we are asked to appreciate a loss of this layer in the absence of Chs2.

We have tried to improve the figures so that the PM layer in the midgut region is more clearly visible. We have added magnifications of small sections at the midgut lumen/epithelium border in grey to help visualise the PM. These improvements have been made in Figures 1,2,S1,S2,S3 and we believe that they better illustrate our results.

2- All the mutant analysis is presented subjectively. For example, the authors state that they "found a consistent difference of CBP staining when they compared the 'Chs2' escapers to the controls". How consistent is consistent? Can this be quantified? What is the penetrance of this phenotype? They say that the thin layer is absent in the midgut and the guts are thinner. Could they provide more concrete data?

As indicated above, we have reviewed the text to provide a more objective description of the phenotypes.

We have quantified the defects in the Df(Chs2) mutant conditions. For this quantification we dissected intestinal tracts of control and Df(Chs2) larva escapers. We fixed, stained and mounted them together. The control guts expressed GFP in the midgut region as a way to distinguish control from mutants. We analysed the presence or absence of chitin in the PM. We found absence of chitin in the proventricular lumen and in the midgut in all Df(Chs2) guts and presence of chitin there in all control ones (n=12 Df(Chs2) guts, n=9 control guts, from 5 independent experiments). The results indicate a fully penetrant phenotype of lack of chitin in Df(Chs2) larva escapers (100% penetrance). We have added this quantification in the text, chapter 2 (2. Chs2 deposits chitin in the PM).

To quantify the thickness of the guts, we took measurements of the diameter in control and Df(Chs2) guts at two comparable distance positions from the proventriculus (position 1, position 2, see image). Our quantifications indicated thinner tubes in mutant conditions.

Image shows the anterior part of the intestinal tract, with the proventriculus encircled in white. Positions 1 and 2 indicate where the diameter quantifications were taken. Scatter plots quantifying the diameter at the two different positions in control and Chs2 larval escapers. Bars show mean {plus minus} SD. p=p value of unpaired t test two-tailed with Welch's correction.

However, we are aware that our analysis of the thickness of the gut is not accurate, because we have not used markers to precisely measure at the same position in all guts and because we have not normalised the measurement position in relation to the whole intestinal tract (mainly due to technical issues).

In relation to the fragility, we noticed that the guts of Chs2 larval escapers tended to break more easily during dissection than control guts, however, we have not been able to quantify this parameter in a reliable and objective manner.

Since we consider that the requirement of Chs2 for PM deposition is sufficiently demonstrated, and that aspects such as gut morphology or fragility relate to the physiological requirements of the PM, which we are beginning to address as a new independent project (see our response to point 5 of Reviewer 1), we have decided to remove the sentence 'We also noticed that the guts of L3 escapers were thinner and more fragile at dissection." from the manuscript to avoid subjectivity.

3- They state that Chs2 was able to restore accumulation of chitin in the PM of the proventriculus and the midgut. Please quantify. Additionally, does this restore the morphology of the guts (related to the comment above on the thinner guts in the absence of Chs2)?

We have quantified the rescue of chitin deposition in the PM when Chs2 is expressed in PR cells in a Df(Chs2) mutant background. For this quantification we used the following genetic cross: PRGal4/Cyo; Df(Chs2)/TM6dfdYFP (females) crossed to UASChs2GFP or UASChs2/Cyo; Df(Chs2)/TM6dfdYFP. We selected Df(Chs2) larval escapers by the absence of TM6 (recognisable by the body shape). Among these larval escapers, we identified the presence of Chs2 in PR cells by the expression of GFP or Chs2. We found absence of chitin in the proventriculus and in the midgut in all Df(Chs2) guts that did not express Chs2 in PR cells (n=8/8 Df(Chs2)). In contrast, chitin was present in those intestinal tracts where Chs2 expression was detected in PR cells (n=8/8 PRGal4-UASChs2; Df(Chs2) guts, from 5 independent experiments). The results indicate a full rescue of chitin deposition by Chs2 expression in PR cells in Df(Chs2) mutant larvae. We have added this quantification in the text, chapter 2 (2. Chs2 deposits chitin in the PM).

As requested by the reviewer, we have also conducted measurements to quantify gut thickness. We performed an analysis similar to the one described in point 2, this time comparing the diameter of Df(Chs2) and PRGal4-UASChs2;Df(Chs2) guts at positions 1 and 2 (see image in point 2 of Reviewer 2). Our quantifications indicated that guts were thicker when Chs2 is expressed in the PR region in Df(Chs2) larval escapers.

As discussed in point 2, we have decided not to include these results in the manuscript, as this type of analysis requires a more comprehensive investigation.

Scatter plots quantifying the diameter at the two different positions in Chs2 larval escapers and Chs2 larval escapers expressing Chs2 in PR cells. Bars show mean {plus minus} SD. p=p value of unpaired t test two-tailed with Welch's correction.

4- This may be beyond the scope of this paper, but I find it interesting that the PM chitin is deposited in the proventricular lumen. Yet it forms a thin layer that lines the entire midgut? Any idea how this presumably dense chitin network gets transported throughout the midgut to line the epithelium? I imagine that this is unlikely due to diffusion, especially if they see an even distribution across the midgut. Do they see any evidence of a graded lining (i.e. is it denser in the midgut towards the proventriculus and does this progressively decrease as you look through the midgut?)?

Insect peritrophic matrices have been classified into Type I and II (with some variations) depending on their origin (extensively reviewed in (Peters, 1992, Hegedus et al., 2019). Type I PMs are typically produced by delamination as concentric lamellae along the length of the midgut. Type II PMs, in contrast, are produced in a specialised region of the midgut that corresponds to the proventriculus and are typically more organised than Type I. In Type II PMs, distinct layers originate from distinct cell clusters in the proventriculus. It has been proposed that as food passes, it becomes encased by the extruded PM, which then slides down to ensheath the midgut. Drosophila larvae have been proposed to secrete a type II PM: through PM implantation experiments, Rizki proposed that the proventriculus is required to generate the PM in Drosophila larvae (Rizki, 1956). Our experiments confirmed this hypothesis: we show that expressing Chs2 exclusively in PR cells is sufficient to produce a PM along the midgut. Furthermore, we also show that expressing Chs2 in the midgut is not sufficient to produce a PM layer lining the midgut, at least at larval stages.

The type II PM in Drosophila is proposed to be fully organised into four layers in the proventricular region (also referred as PM formation zone) before reaching the midgut (Peters, 1992, King, 1988, Rizki, 1956, Zhu et al., 2024). However, the mechanism by which the PM is subsequently transported into the midgut remains unclear. PM movement posteriorly is thought to depend on to the pressure exerted by continuous secretion of PM material (Peters, 1992). Early work by Wigglesworth (1929, 1930) proposed that the PM is secreted into the proventricular lumen, becomes fully organised, and is then pushed down by a press mechanism involving the aposed ectodermal/endodermal walls of the proventriculus. Rizki suggested that muscular contractions of the proventriculus walls may play a role, and that peristaltic movements of the gut add a pulling force to push the PM into the midgut (Rizki, 1956). Nevertheless, to our knowledge, the exact mechanism is still not fully understood.

In response to the reviewer's question, the level of resolution of our analysis does not allow us to determine whether there is a graded PM lining along the midgut. However, available data using electron microscopy approaches suggest that the PM is a fully organised structure composed of four layers that is secreted and transported to line the midgut (King, 1988, Zhu et al., 2024).

5- The authors state that expression of kkv in tracheal cells of kkv mutants perfectly restores accumulation of chitin in the luminal filaments. Is this really 100% restoration? They also reference a paper here, which may have quantified this result.

We previously reported that the expression of kkv in tracheal cells restores chitin deposition in kkv mutants (Moussian et al,2015). However, our previous study did not quantify this rescue. As requested by the reviewer, we have now quantified the extent of the rescue.

To perform this quantification, we used the following genetic cross:

btlGa4/(Cyo); kkv/TM6dfdYFP (females) crossed to +/+; kkv UASkkvGFP/TM6dfdYFP (males)

We stained the resulting embryos with CBP (to detect chitin) and GFP. GFP staining allowed us to identify the kkv mutants (by the absence of dfdYFP marker) and to simultaneously identify the embryos that expressed kkvGFP in tracheal cells (through btlGal4-driven expression). Since btlGal4 is homozygous viable, most females carried two copies of btlGal4.

We compared the following embryo populations across 4 independent experiments:

1. Cyo/+; kkv/kkv UASkkvGFP (kkv mutants not expressing kkv in the trachea)

2. btlGal4/+; kkv/kkv UASkkvGFP (kkv mutants expressing kkv in the trachea) Results:

3. Cyo/+; kkv/kkv UASkkvGFP ---- 0/6 embryos deposited chitin in trachea

4. btlGal4/+; kkv/kkv UASkkvGFP ---- 27/27 embryos deposited chitin in trachea These results indicate complete restauration of chitin deposition in kkv mutants when kkv is expressed in tracheal cells (100% rescue).

To further investigate whether Chs2 can compensate for kkv function in ectodermal tissues, we performed a similar quantification using the following genetic cross:

btlGa4/(Cyo); kkv/TM6dfdYFP (females) crossed to UASChs2GFP/UASChs2GFP; kkv UASkkvGFP/TM6dfdYFP (males)

We compared the following embryo populations across 2 independent experiments:

1. Cyo/UASChs2GFP; kkv/kkv (kkv mutants not expressing Chs2 in the trachea)

2. btlGal4/ UASChs2GFP; kkv/kkv (kkv mutants expressing Chs2 in the trachea) Results:

3. Cyo/UASChs2GFP; kkv/kkv ---- 0/4 embryos deposited chitin in trachea

4. btlGal4/ UASChs2GFP; kkv/kkv ---- 0/16 embryos deposited chitin in trachea These results indicate no restauration of chitin deposition in kkv mutants expressing Chs2 in the trachea (0% rescue).

We have now incorporated these quantifications in the text, chapter 4 (4. Chs2 cannot replace Kkv and deposit chitin in ectodermal tissues.)

6- They ask whether Kkv overexpression in the proventriculus can rescue Chs2 mutants... and vice versa, whether Chs2 overexpression in ectodermal cells can rescue kkv mutants. They show that kkv overexpression leads to an intracellular accumulation of chitin in the proventriculus. However, Chs2 overexpression in the trachea did not lead to any accumulation of chitin in the cells. They tailored their experiments and the associated discussion to address the hypothesis that there is potentially some difference in trafficking of these components. However, another possibility, which they have not ruled out, is that the different ability of kkv and Chs2 to produce chitin inside cells of the proventriculus and ectoderm, respectively, is potentially related to different enzymatic activities and cofactors required for chitin formation in these different cell types. Is this another potential explanation for the differences that they observe?

We note that Kkv overexpression in any cell type (e.g. ectoderm, endoderm) consistently leads to chitin polymerisation. In ectodermal tissues, Kkv expression, in combination with Exp/Reb activity, results in extracellular chitin deposition. In the absence of Exp/Reb, Kkv expression leads to the accumulation of intracellular chitin punctae (De Giorgio et al., 2023, Moussian et al., 2015); this work). This correlates with the accumulation of Kkv at the apical membrane and presence of Kkv-containing vesicles, regardless of the presence of Exp/Reb (De Giorgio et al., 2023, Moussian et al., 2015); Figure 6, S6). In endodermal tissues, regardless of the presence of Exp/Reb, Kkv cannot deposit chitin extracellularly and instead produces intracellular chitin punctae. This correlates with a diffuse accumulation of Kkv in the endodermal cells (PR cells, or gut cells in the embryo) but presence of Kkv-containing vesicles (Figure 6, S6).

In previous work we showed that Kkv's ability to polymerise chitin is completely abolished when it is retained in the ER. Indeed, we found that a mutation in a conserved WGTRE region leads to ER retention, the absence of Kkv-containing vesicles in the cell, and absence of intracellular chitin punctae or chitin deposition (De Giorgio et al., 2023).

These findings indicate a correlation between Kkv subcellular localisation and chitin polymerisation/extrusion. Therefore, we hypothesise that intracellular trafficking and subsequent subcellular localisation play a crucial role in regulating Kkv activity (De Giorgio et al., 2023; this work).

We find that Chs2 is expressed in PR cells (Figure 4) and observe that only in these PR cells does Chs2 localise apically (Fig 5A-D, S5A,B). This localisation correlates with the ability of Chs2 to deposit chitin in the PM and the presence of intracellular chitin punctae in PR cells (Fig 1F). When Chs2 is expressed in other cells types, we detect it primarily in the ER and observed no Chs2-containing vesicles (vesicles are suggestive of trafficking). This localisation correlates with the inability of Chs2 to produce intracellular chitin punctae or extracellular chitin deposition.

Again, these results suggest a correlation between Chs2 subcellular localisation and chitin polymerisation/extrusion, aligning with the results observed for Kkv. Therefore, we hypothesise in this work that the intracellular trafficking and subsequent subcellular localisation of Chs2 play a crucial role in regulating its activity.

Our hypothesis is consistent with seminal work in yeast chitin synthases, which has demonstrated the critical role of intracellular trafficking, and particularly ER exit, in regulating chitin synthase activity (reviewed in (Sanchez and Roncero, 2022).

That said, we cannot exclude other explanations that are also compatible with the observed results. As pointed out by the reviewer, it is possible that Chs2 and Kkv require different enzymatic activities and/or cofactors for chitin polymerisation/deposition, which may be specific to different cell types. Indeed, we know that the auxiliary proteins Exp/Reb are specifically expressed in certain ectodermal tissues (Moussian et al., 2015). These mechanisms could act jointly or in parallel with the regulation of intracellular trafficking, or could even regulate this intracellular trafficking itself.

Identifying the exact mechanisms controlling Kkv and Chs2 intracellular trafficking would be necessary to determine whether additional mechanisms (specific cofactors or enzymatic activities) are also involved or even serve as the primary regulatory elements.

We have introduced these additional possibilities in the discussion section.

7- They co-express Chs2 and Reb and show that this does not lead to chitin production or secretion. In the discussion they conclude that Chs2 does not "seem to be dependent on 'Reb' activity". I think that this statement potentially needs softening. They show that Reb is not sufficient in to induce Chs2 chitin production in cells that do not normally make a PM. However, they do not show that it is not essential in cells that normally express Chs2 and make PM.

We fully agree with the reviewer's observation and thank her/him for pointing it out.

As indicated by the reviewer, we show that co-expression of Reb and Chs2 in different tissues does not lead to an effect distinct from that observed with Chs2 expression alone. In addition, in the discussion we mention that we could not detect expression of reb/exp in PR cells, which aligns with the findings from Zhu et al, 2024, indicating no expression of reb/exp in the midgut cells of the adult proventriculus, as assessed by scRNAseq. We found that exp is expressed in the ectodermal cells of the larval proventriculus (Fig S4D), correlating with kkv expression in this region and cuticle deposition. These findings led us to propose that Chs2 does not seem to be dependent on Exp/Reb activity.

However, in our original manuscript, we did not directly address whether Exp/Reb are required in the cells that normally express Chs2. As a result, we could not conclude that Chs2 relies on a set of auxiliary proteins different from Exp/Reb, and therefore a different molecular mechanism to that of Kkv in regulating chitin deposition.

To address this specific point, we have conducted a new experiment to test Exp/Reb requirement in PR cells. We co-expressed RNAi lines for Exp/Reb in these cells and found that chitin deposition in the PM was not prevented. This further supports the hypothesis that Exp/Reb activity is not necessary for Chs2 function. We have added this experiment to Chapter 4 and Fig S3I,J.

8- They looked at the endogenous expression pattern of kkv and Chs2 and say that they found accumulation of Kkv in the proventriculus and no accumulation in the midgut. Siimilarly, they look at the expression of Chs2 and detect it in cells of the proventriculus. Are there markers of these different cell types that they could use to colocalize these enzymes?

We agree with the reviewer that this is an important issue and we note that Reviewer 1 also raised the same point. Therefore, we have addressed this issue.

We obtained an antibody against Dve, kindly provided by Dr. Hideki Nakagoshi. Dve marks the endodermal region in the proventriculus (Fuss and Hoch, 1998, Fuss et al., 2004, Nakagoshi et al., 1998).This antibody worked nicely in our dissected L3 digestive tracts and allowed us to mark the endodermal region. We also obtained an antibody against Fkh, kindly provided by Dr. Pilar Carrera. Fkh marks the ectodermal foregut cells (Fuss and Hoch, 1998, Fuss et al., 2004, Nakagoshi et al., 1998). While, in our hands, this antibody performed well in embryonic tissues, we observed no staining in our dissected L3 digestive tracts. The reason for this is unclear, but we suspect technical limitations may be responsible (the ectodermal region of the proventriculus is very internal, potentially hindering antibody penetration). To circumvent this inconvenience, we tested a FkhGFP tagged allele available in Bloomington Stock Center. Fortunately, we were able to detect GFP in ectodermal cells of L3 carrying this allele. Using this approach, we conducted experiments to detect Fkh and Dve in relation to chitin accumulation in the wild type (Fig S1). In addition, we used these markers to map the expression of Kkv and Chs2 in the proventriculus (Fig 4). Our results using these endodermal/ectodermal markers confirmed the presence of a cuticle adjacent to the FkhGFP-positive cells and a PM adjacent to the PR cells, marked by Dve. Additionally, we show that Chs2-expressing cells are positive for Dve while Kkv-expressing cells are not. We could not conduct an experiment showing Kkv and Fkh co-expression due to technical incompatibilities, as we have to use GFP tagged alleles for both Kkv and Fkh to reveal their expression. However, we believe that our imaging of Dve/Kkv clearly shows that Kkv expressing cells lack Dve expression and localise in the internal (ectodermal) region of the proventriculus (Fig 4E).

9- They overexpress Chs2 in cells of the midgut and see that it colocalises with an ER marker. They conclude that it is retained in the ER, which again, for them suggests that it has a trafficking problem in these cells. However, they are overexpressing it in these cells and this strong accumulation that they observe in the ER could simply be due to the massive expression levels. Additionally, they cannot conclude that it doesn't get out of the ER at all. They could be correct in thinking that there may be a trafficking issue, but this experiment does not conclusively show that Chs2 is entirely retained in the ER when expressed in ectopic tissues. I wonder if their interpretation needs softening or whether they should potentially address alternative hypotheses.

The reviewer raises two distinct issues: 1) the localisation of overexpressed proteins 2) Chs2 ER retention.

We agree that massive overexpression can lead to artifactual subcellular localisation due to saturation of the secretory pathway, causing ER accumulation. In our experiments, we overexpressed Kkv and Chs2 in different tissues (trachea, salivary glands, embryonic gut, and larval proventriculus), inducing high levels of both chitin synthases.

For Kkv, we observed distinct subcellular localisation patterns in ectodermal versus endodermal tissues (illustrated in new Fig S6). In ectodermal tissues such as the trachea, large amounts of KkvGFP were detected, most of it localising apically. We also detected a more general KkvGFP distribution throughout the cell, including the ER, particularly at early stages. Additionally, we observed many KkvGFP-positive vesicles, reflecting exocytic and endocytic trafficking, as described previously (De Giorgio et al., 2023). The presence of these vesicles (as well as the apical localisation) indicates that KkvGFP is able to exit the ER. Indeed, our previous work demonstrated that when Kkv is retained in the ER, it does not localise apically or appear in vesicles (De Giorgio et al, 2023). In endodermal tissues, as described in our manuscript, KkvGFP did not exhibit polarised apical localisation and instead showed a diffuse pattern with some cortical enrichment. However, the presence of KkvGFP-containing vesicles still suggests that the protein is capable of exiting the ER also in these endodermal tissues.

We observed a different subcellular pattern when we overexpressed Chs2GFP. In tissues where Chs2 is not normally expressed (e.g., trachea, salivary gland, embryonic gut), we did not detect apical or membrane accumulation (see Fig. 5,S5, S6 and response to point 4 of Reviewer #1). Nor did we observe accumulation of Chs2GFP in intracellular vesicles. Instead, Chs2GFP showed strong colocalisation with an ER marker (see Fig. 5,S5, S6 and response to point 4 of Reviewer #1). In contrast, when overexpressed in PR cells, we detected apical enrichment (Fig 5A-D, S5A,B). This indicates that despite massive expression levels, Chs2 can exit the ER in particular tissues.

Taken together, our results strongly suggest that overexpressed Kkv can exit the ER in the different tissues analysed, whereas most Chs2GFP is retained in the ER in tissues other than PR cells. This correlates with the ability of overexpressed KkvGFP to polymerise chitin (either in intracellular puncta or deposited extracellularly depending on the presence of Exp/Reb) in all analysed tissues. Conversely, Chs2 was unable to polymerise chitin (either in intracellular puncta or extracellularly regardless of Exp/Reb presence) in tissues other than PR cells.

Nevertheless, we acknowledge that we cannot definitively conclude that all Chs2 protein is entirely retained in the ER. We have included this caveat in our revised manuscript (Chapter 6 and Discussion section).

Minor Comments: - No mention of Fig 3I in the results section and the order discussed in the results does not match the order in the figure.

We apologise for these inconsistencies. We have addressed this issue in the text, figure legend, and the image order in Figure 3 and Figure S3.

• In the results please provide some information on what the CRIMIC collection is and how it allows you to see Chs2 expression for non-experts.

We have addressed this point in chapter 5 in the revised version, and we now provide a more detailed explanation of the CRIMIC Chs2CR60212-TG4.0 allele.

Further details of this allele are also provided in our responses to points 5 and 9 of Reviewer 1.

Reviewer #2 (Significance (Required)):

Drosophila produce different types of chitinous structures that are required for either the exoskeleton of the animal or for proper gut function (peritrophic matrix). Additionally, most insects have two enzymes involved in the production of chitin and current data suggests that they have unique roles in producing either the exoskeleton or the peritrophic matrix. However, it is unclear whether their different functions are due to differences in cell type expression or differences in physiological activity of the enzymes. The authors exploit Drosophila to drive these 2 enzymes in different cell types that are known to produce the exoskeleton or the peritrophic matrix to determine whether they can functionally substitute mutant backgrounds. Their results give us a hint that these enzymes are not equivalent. What the authors were unable to address is why they are not equivalent. They hypothesise that the different physiological functions of the enzymes may be related to trafficking differences within their respective cell types. While this is an interesting hypothesis, the date are not really clear yet to make this conclusion.

This work will be of interest to anyone interested in chitinous structures in insects and the cell biology of chitin-related enzymes.

Literature

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AHMAD, M., CHAUDHARY, S. U., AFZAL, A. J. & TARIQ, M. 2015. Starvation-Induced Dietary Behaviour in Drosophila melanogaster Larvae and Adults. Sci Rep, 5__,__ 14285.

DE GIORGIO, E., GIANNIOS, P., ESPINAS, M. L. & LLIMARGAS, M. 2023. A dynamic interplay between chitin synthase and the proteins Expansion/Rebuf reveals that chitin polymerisation and translocation are uncoupled in Drosophila. PLoS Biol, 21__,__ e3001978.

FUSS, B. & HOCH, M. 1998. Drosophila endoderm development requires a novel homeobox gene which is a target of Wingless and Dpp signalling. Mech Dev, 79__,__ 83-97.

FUSS, B., JOSTEN, F., FEIX, M. & HOCH, M. 2004. Cell movements controlled by the Notch signalling cascade during foregut development in Drosophila. Development, 131__,__ 1587-95.

HEGEDUS, D. D., TOPRAK, U. & ERLANDSON, M. 2019. Peritrophic matrix formation. J Insect Physiol, 117__,__ 103898.

KING, D. G. 1988. Cellular organization and peritrophic membrane formation in the cardia (proventriculus) of Drosophila melanogaster. J Morphol, 196__,__ 253-82.

LEBRETON, G. & CASANOVA, J. 2016. Ligand-binding and constitutive FGF receptors in single Drosophila tracheal cells: Implications for the role of FGF in collective migration. Dev Dyn, 245__,__ 372-8.

MOUSSIAN, B., LETIZIA, A., MARTINEZ-CORRALES, G., ROTSTEIN, B., CASALI, A. & LLIMARGAS, M. 2015. Deciphering the genetic programme triggering timely and spatially-regulated chitin deposition. PLoS Genet, 11__,__ e1004939.

NAKAGOSHI, H., HOSHI, M., NABESHIMA, Y. & MATSUZAKI, F. 1998. A novel homeobox gene mediates the Dpp signal to establish functional specificity within target cells. Genes Dev, 12__,__ 2724-34.

PETERS, W. 1992. Peritrophic Membranes, Springer Berlin, Heidelberg.

RIZKI, M. T. M. 1956. The secretory activity of the proventriculus of Drosophila melanogaster. Journal of Experimental Zoology, 131__,__ 203-221.

SANCHEZ, N. & RONCERO, C. 2022. Chitin Synthesis in Yeast: A Matter of Trafficking. Int J Mol Sci, 23.

ZHU, H., LUDINGTON, W. B. & SPRADLING, A. C. 2024. Cellular and molecular organization of the Drosophila foregut. Proc Natl Acad Sci U S A, 121__,__ e2318760121.

Reviewer #1 (Public review):

Summary:

This manuscript by Harris and Gallistel investigates how the rate of learning and strength of conditioned behavior post learning depend on the various temporal parameters of Pavlovian conditioning. They replicate results from Gibbon and Balsam (1981) in rats to show that the rate of learning is proportional to the ratio between the cycle duration and the cue duration. They further show that the strength of conditioned behavior post learning is proportional to the cue duration, and not the above ratio. The overall findings here are interesting, provide context to many conflicting recent results on this topic, and are supported by reasonably strong evidence. Nevertheless, there are some major weaknesses in the evidence presented for some of the stronger claims in the manuscript.

Strengths:

This manuscript has many strengths including a rigorous experimental design, several different approaches to data analysis, careful consideration of prior literature, and a thorough introduction and discussion. The central claim-that animals track the rates of events in their environment, and that the ratio of two rates determine the rate of learning-is supported with solid evidence.

Weaknesses:

Despite the above major strengths, some key aspects of the paper need major improvement. These are listed below.

(1) A key claim made here is that the same relationship (including the same parameter) describes data from pigeons by Gibbon and Balsam (1981) and the rats in this study. I think the evidence for this claim is weak as presented here. First, the exact measure used for identifying trials to criterion makes a big difference in Fig 3. As best as I understand, the authors do not make any claims about which of these approaches is the "best" way. Second, the measure used for identifying trials to criterion in Fig 1 appears different from any of the criteria used in Fig 3. If so, to make the claim that the quantitative relationship is one and the same in both datasets, the authors need to use the same measure of learning rate on both datasets and show that the resultant plots are statistically indistinguishable. Currently, the authors simply plot the dots from the current dataset on the plot in Fig 1 and ask the readers to notice the visual similarity. This is not at all enough to claim that both relationships are the same. In addition to the dependence of the numbers on the exact measure of learning rate used, the plots are in log-log axis. Slight visual changes can mean a big difference in actual numbers. For instance, between Fig 3 B and C, the highest information group moves up only "slightly" on the y-axis but the difference is a factor of 5. The authors need to perform much more rigorous quantification to make the strong claim that the quantitative relationships obtained here and in Gibbon and Balsam 1981 are identical.

(2) Another interesting claim here is that the rates of responding during ITI and the cue are proportional to the corresponding reward rates with the same proportionality constant. This too requires more quantification and conceptual explanation. For quantification, it would be more convincing to calculate the regression slope for the ITI data and the cue data separately and then show that the corresponding slopes are not statistically distinguishable from each other. Conceptually, I am confused why the data used to the test the ITI proportionality come from the last 5 sessions. Specifically, if the model is that animals produce response rates during the ITI (a period with no possible rewards) based on the overall rate of rewards in the context, wouldn't it be better to test this before the cue learning has occurred? Before cue learning, the animals would presumably only have attributed rewards in the context to the context and thus, produce overall response rates in proportion to the contextual reward rate. After cue learning, the animals could technically know that the rate of rewards during ITI is zero. Why wouldn't it be better to test the plotted relationship for ITI before cue learning has occurred? Further, based on Fig 1, it seems that the overall ITI response rate reduces considerably with cue learning. What is the expected ITI response rate prior to learning based on the authors' conceptual model? Why does this rate differ pre and post cue learning? Finally, if the authors' conceptual framework predicts that ITI response rate after cue learning should be proportional to contextual reward rate, why should the cue response rate be proportional to cue reward rate instead of cue reward rate plus contextual reward rate?

(3) I think there was a major conceptual disconnect between the gradual nature of learning shown in Figs 7 and 8 and the information theoretic model proposed by the authors. To the extent that I understand the model, the animals should simply learn the association once the evidence crosses a threshold (nDKL > threshold) and then produce behavior in proportion to the expected reward rate. If so, why should there be a gradual component of learning as shown in these figures? In terms of the proportional response rule to rate of rewards, why is it changing as animals go from 10% to 90% of peak response? I think the manuscript would be much strengthened if these results are explained within the authors' conceptual framework. If these results are not anticipated by the authors' conceptual framework, please do explicitly state this in the manuscript.

(4) I find the idea stated in the Conclusion section that any model considering probability of reinforcement cannot be correct because it doesn't have temporal units to be weak. I think the authors might mean that existing models based on probability do not work and not that no possible model can work. For any point process, the standard mathematical treatment of continuous time is to compute the expected count of events as p*dt where p is the probability of occurrence of the event in that time bin and dt is an infinitesimal time bin. There is obviously a one-to-one mapping between probability of an event in a point process and its rate. Existing models use an arbitrary time bin/trial and thus, I get the authors' argument in the discussion. However, I think their conclusion is overstated.

(5) The discussion states that the mutual information defined in equation 1 does not change during partial reinforcement. I am confused by this. The mean delay between reinforcements increases in inverse proportion to the probability of reinforcement, but doesn't the mean delay between cue and next reinforcement increase by more than this amount (next reinforcement is greater than or equal to the cue-to-cue interval away from the cue for many trials)? Why is this ratio invariant to partial reinforcement?

Comments on revisions:

Update following revision

(1) This point is discussed in more detail in the attached file, but there are some important details regarding the identification of the learned trial that require more clarification. For instance, isn't the original criterion by Gibbon et al. (1977) the first "sequence of three out of four trials in a row with at least one response"? The authors' provided code for the Wilcoxon signed rank test and nDkl thresholds looks for a permanent exceeding of the threshold. So, I am not yet convinced that the approaches used here and in prior papers are directly comparable. Also, there's still no regression line fitted to their data (Fig 3's black line is from Fig 1, according to the legends). Accordingly, I think the claim in the second paragraph of the Discussion that the old data and their data are explained by a model with "essentially the same parameter value" is not yet convincing without actually reporting the parameters of the regression. Related to this, the regression for their data based on my analysis appears to have a slope closer to -0.6, which does not support strict timescale invariance. I think that this point should be discussed as a caveat in the manuscript.

(2) The authors report in the response that the basis for the apparent gradual/multiple step-like increases after initial learning remains unclear within their framework. This would be important to point out in the actual manuscript. Further, the responses indicating the fact that there are some phenomena that are not captured by the current model would be important to state in the manuscript itself.

(3) There are several mismatches between results shown in figures and those produced by the authors' code, or other supplementary files. As one example, rat 3 results in Fig 11 and Supplementary Materials don't match and neither version is reproduced by the authors' code. There are more concerns like this, which are detailed in the attached review file.

Author response:

The following is the authors’ response to the original reviews

ANALYTICAL

(1) A key claim made here is that the same relationship (including the same parameter) describes data from pigeons by Gibbon and Balsam (1981; Figure 1) and the rats in this study (Figure 3). The evidence for this claim, as presented here, is not as strong as it could be. This is because the measure used for identifying trials to criterion in Figure 1 appears to differ from any of the criteria used in Figure 3, and the exact measure used for identifying trials to criterion influences the interpretation of Figure 3***. To make the claim that the quantitative relationship is one and the same in the Gibbon-Balsam and present datasets, one would need to use the same measure of learning on both datasets and show that the resultant plots are statistically indistinguishable, rather than simply plotting the dots from both data sets and spotlighting their visual similarity. In terms of their visual characteristics, it is worth noting that the plots are in log-log axis and, as such, slight visual changes can mean a big difference in actual numbers. For instance, between Figure 3B and 3C, the highest information group moves up only "slightly" on the y-axis but the difference is a factor of 5 in the real numbers. Thus, in order to support the strong claim that the quantitative relationships obtained in the Gibbon-Balsam and present datasets are identical, a more rigorous approach is needed for the comparisons.

***The measure of acquisition in Figure 3A is based on a previously established metric, whereas the measure in Figure 3B employs the relatively novel nDKL measure that is argued to be a better and theoretically based metric. Surprisingly, when r and r2 values are converted to the same metric across analyses, it appears that this new metric (Figure 3B) does well but not as well as the approach in Figure 3A. This raises questions about why a theoretically derived measure might not be performing as well on this analysis, and whether the more effective measure is either more reliable or tapping into some aspect of the processes that underlie acquisition that is not accounted for by the nDKL metric.

Figure 3 shows that the relationship between learning rate and informativeness for our rats was very similar to that shown with pigeons by Gibbon and Balsam (1981). We have used multiple criteria to establish the number of trials to learn in our data, with the goal of demonstrating that the correspondence between the data sets was robust. In the revised Figure 3, specifically 3C and 3D, we have plotted trials to acquisition using decision criterion equivalent to those used by Gibbon and Balsam. The criterion they used—at least one peck at the response key on at least 3 out of 4 consecutive trials—cannot be directly applied to our magazine entry data because rats make magazine entries during the inter-trial interval (whereas pigeons do not peck at the response key in the inter-trial interval). Therefore, evidence for conditioning in our paradigm must involve comparison between the response rate during CS and the baseline response rate, rather than just counting responses during the CS. We have used two approaches to adapt the Gibbon and Balsam criterion to our data. One approach, plotted in Figure 3C, uses a non-parametric signed rank test for evidence that the CS response rate exceeds the pre-CS response rate, and adopting a statistical criterion equivalent to Gibbon and Balsam’s 3-out-of-4 consecutive trials (p<.3125). The second method (Figure 3D) estimates the nDkl for the criterion used by Gibbon and Balsam and then applies this criterion to the nDkl for our data. To estimate the nDkl of Gibbon and Balsam’s data, we have assumed there are no responses in the inter-trial interval and the response probability during the CS must be at least 0.75 (their criterion of at least 3 responses out of 4 trials). The nDkl for this difference is 2.2 (odds ratio 27:1). We have then applied this criterion to the nDkl obtained from our data to identify when the distribution of CS response rates has diverged by an equivalent amount from the distribution of pre-CS response rates. These two analyses have been added to the manuscript to replace those previously shown in Figures 3B and 3C.

(2) Another interesting claim here is that the rates of responding during ITI and the cue are proportional to the corresponding reward rates with the same proportionality constant. This too requires more quantification and conceptual explanation. For quantification, it would be more convincing to calculate the regression slope for the ITI data and the cue data separately and then show that the corresponding slopes are not statistically distinguishable from each other. Conceptually, it is not clear why the data used to test the ITI proportionality came from the last 5 conditioning sessions. What were the decision criteria used to decide on averaging the final 5 sessions as terminal responses for the analyses in Figure 5? Was this based on consistency with previous work, or based on the greatest number of sessions where stable data for all animals could be extracted?

If the model is that animals produce response rates during the ITI (a period with no possible rewards) based on the overall rate of rewards in the context, wouldn't it be better to test this before the cue learning has occurred? Before cue learning, the animals would presumably only have attributed rewards in the context to the context and thus, produce overall response rates in proportion to the contextual reward rate. After cue learning, the animals could technically know that the rate of rewards during ITI is zero. Why wouldn't it be better to test the plotted relationship for ITI before cue learning has occurred? Further, based on Figure 1, it seems that the overall ITI response rate reduces considerably with cue learning. What is the expected ITI response rate prior to learning based on the authors' conceptual model? Why does this rate differ from pre and post-cue learning? Finally, if the authors' conceptual framework predicts that ITI response rate after cue learning should be proportional to contextual reward rate, why should the cue response rate be proportional to the cue reward rate instead of the cue reward rate plus the contextual reward rate?

A single regression line, as shown in Figure 5, is the simplest possible model of the relationship between response rate and reinforcement rate and it explains approximately 80% of the variance in response rate. Fixing the log-log slope at 1 yields the maximally simple model. (This regression is done in the logarithmic domain to satisfy the homoscedasticity assumption.) When transformed into the linear domain, this model assumes a truly scalar relation (linear, intercept at the origin) and assumes the same scale factor and the same scalar variability in response rates for both sets of data (ITI and CS). Our plot supports such a model. Its simplicity is its own motivation (Occam’s razor).

If separate regression lines are fitted to the CS and ITI data, there is a small increase in explained variance (R₂ = 0.82). These regression lines have been added to the plot in the revised manuscript (Figure 5). We leave it to further research to determine whether such a complex model, with 4 parameters, is required. However, we do not think the present data warrant comparing the simplest possible model, with one parameter, to any more complex model for the following reasons:

· When a brain—or any other machine—maps an observed (input) rate to a rate it produces (output rate), there is always an implicit scalar. In the special case where the produced rate equals the observed rate, the implicit scalar has value 1. Thus, there cannot be a simpler model than the one we propose, which is, in and of itself, interesting.

· The present case is an intuitively accessible example of why the MDL (Minimum Description Length) approach to model complexity (Barron, Rissanen, & Yu, 1998; Grünwald, Myung, & Pitt, 2005; Rissanen, 1999) can yield a very different conclusion from the conclusion reached using the Bayesian Information Criterion (BIC) approach. The MDL approach measures the complexity of a model when given N data specified with precision of B bits per datum by computing (or approximating) the sum of the maximum-likelihoods of the model’s fits to all possible sets of N data with B precision per datum. The greater the sum over the maximum likelihoods, the more complex the model, that is, the greater its measured wiggle room, it’s capacity to fit data. Recall that von Neuman remarked to Fermi that with 4 parameters he could fit an elephant. His deeper point was that multi-parameter models bring neither insight nor predictive power; they explain only post-hoc, after one has adjusted their parameters in the light of the data. For realistic data sets like ours, the sums of maximum likelihoods are finite but astronomical. However, just as the Sterling approximation allows one to work with astronomical factorials, it has proved possible to develop readily computable approximations to these sums, which can be used to take model complexity into account when comparing models. Proponents of the MDL approach point out that the BIC is inadequate because models with the same number of parameters can have very different amounts of wiggle room. A standard illustration of this point is the contrast between logarithmic model and power-function model. Log regressions must be concave; whereas power function regressions can be concave, linear, or convex—yet they have the same number of parameters (one or two, depending on whether one counts the scale parameter that is always implicit). The MDL approach captures this difference in complexity because it measures wiggle room; the BIC approach does not, because it only counts parameters.

· In the present case, one is comparing a model with no pivot and no vertical displacement at the boundary between the black dots and the red dots (the 1-parameter unilinear model) to a bilinear model that allows both a change in slope and a vertical displacement for both lines. The 4-parameter model is superior if we use the BIC to take model complexity into account. However, 4-parameter has ludicrously more wiggle room. It will provide excellent fits—high maximum likelihood—to data sets in which the red points have slope > 1, slope 0, or slope < 0 and in which it is also true that the intercept for the red points lies well below or well above the black points (non-overlap in the marginal distribution of the red and black data). The 1-parameter model, on the other hand, will provide terrible fits to all such data (very low maximum likelihoods). Thus, we believe the BIC does not properly capture the immense actual difference in the complexity between the 1-parameter model (unilinear with slope 1) to the 4-parameter model (bilinear with neither the slope nor the intercept fixed in the linear domain).

· In any event, because the pivot (change in slope between black and red data sets), if any, is small and likewise for the displacement (vertical change), it suffices for now to know that the variance captured by the 1-parameter model is only marginally improved by adding three more parameters. Researchers using the properly corrected measured rate of head poking to measure the rate of reinforcement a subject expects can therefore assume that they have an approximately scalar measure of the subject’s expectation. Given our data, they won’t be far wrong even near the extremes of the values commonly used for rates of reinforcement. That is a major advance in current thinking, with strong implications for formal models of associative learning. It implies that the performance function that maps from the neurobiological realization of the subject’s expectation is not an unknown function. On the contrary, it’s the simplest possible function, the scalar function. That is a powerful constraint on brain-behavior linkage hypotheses, such as the many hypothesized relations between mesolimbic dopamine activity and the expectation that drives responding in Pavlovian conditioning (Berridge, 2012; Jeong et al., 2022; Y.  Niv, Daw, Joel, & Dayan, 2007; Y. Niv & Schoenbaum, 2008).

The data in Figures 4 and 5 are taken from the last 5 sessions of training. The exact number of sessions was somewhat arbitrary but was chosen to meet two goals: (1) to capture asymptotic responding, which is why we restricted this to the end of the training, and (2) to obtain a sufficiently large sample of data to estimate reliably each rat’s response rate. We have checked what the data look like using the last 10 sessions, and can confirm it makes very little difference to the results. We now note this in the revised manuscript. The data for terminal responding by all rats, averaged over both the last 5 sessions and last 10 sessions, can be downloaded from https://osf.io/vmwzr/

Finally, as noted by the reviews, the relationship between the contextual rate of reinforcement and ITI responding should also be evident if we had measured context responding prior to introducing the CS. However, there was no period in our experiment when rats were given unsignalled reinforcement (such as is done during “magazine training” in some experiments). Therefore, we could not measure responding based on contextual conditioning prior to the introduction of the CS. This is a question for future experiments that use an extended period of magazine training or “poor positive” protocols in which there are reinforcements during the ITIs as well as during the CSs. The learning rate equation has been shown to predict reinforcements to acquisition in the poor-positive case (Balsam, Fairhurst, & Gallistel, 2006).

(3) There is a disconnect between the gradual nature of learning shown in Figures 7 and 8 and the information-theoretic model proposed by the authors. To the extent that we understand the model, the animals should simply learn the association once the evidence crosses a threshold (nDKL > threshold) and then produce behavior in proportion to the expected reward rate. If so, why should there be a gradual component of learning as shown in these figures? In terms of the proportional response rule to the rate of rewards, why is it changing as animals go from 10% to 90% of peak response? The manuscript would be greatly strengthened if these results were explained within the authors' conceptual framework. If these results are not anticipated by the authors' conceptual framework, this should be explicitly stated in the manuscript.

One of us (CRG) has earlier suggested that responding appears abruptly when the accumulated evidence that the CS reinforcement rate is greater than the contextual rate exceeds a decision threshold (C.R.  Gallistel, Balsam, & Fairhurst, 2004). The new more extensive data require a more nuanced view. Evidence about the manner in which responding changes over the course of training is to some extent dependent on the analytic method used to track those changes. We presented two different approaches. The approach shown in Figures 7 and 8 (now 6 and 7), extending on that developed by Harris (2022), assumes a monotonic increase in response rate and uses the slope of the cumulative response rate to identify when responding exceeds particular milestones (percentiles of the asymptotic response rate). This analysis suggests a steady rise in responding over trials. Within our theoretical model, this might reflect an increase in the animal’s certainty about the CS reinforcement rate with accumulated evidence from each trial. While this method should be able to distinguish between a gradual change and a single abrupt change in responding (Harris, 2022) it may not distinguish between a gradual change and multiple step-like changes in responding and cannot account for decreases in response rate.

The other analytic method we used relies on the information theoretic measure of divergence, the nDkl (Gallistel & Latham, 2023), to identify each point of change (up or down) in the response record. With that method, we discern three trends. First, the onset tends to be abrupt in that the initial step up is often large (an increase in response rate by 50% or more of the difference between its initial value and its terminal value is common and there are instances where the initial step is to the terminal rate or higher). Second, there is marked within-subject variability in the response rate, characterized by large steps up and down in the parsed response rates following the initial step up, but this variability tends to decrease with further training (there tend to be fewer and smaller steps in both the ITI response rates and the CS response rate as training progresses). Third, the overall trend, seen most clearly when one averages across subjects within groups is to a moderately higher rate of responding later in training than after the initial rise. We think that the first tendency reflects an underlying decision process whose latency is controlled by diminishing uncertainty about the two reinforcement rates and hence about their ratio. We think that decreasing uncertainty about the true values of the estimated rates of reinforcement is also likely to be an important part of the explanation for the second tendency (decreasing within-subject variation in response rates). It is less clear whether diminishing uncertainty can explain the trend toward a somewhat greater difference in the two response rates as conditioning progresses. It is perhaps worth noting that the distribution of the estimates of the informativeness ratio is likely to be heavy tailed and have peculiar properties (as witness, for example, the distribution of the ratio of two gamma distributions with arbitrary shape and scale parameters) but we are unable at this time to propound an explanation of the third trend.

(4) Page 27, Procedure, final sentence: The magazine responding during the ITI is defined as the 20 s period immediately before CS onset. The range of ITI values (Table 1) always starts as low as 15 s in all 14 groups. Even in the case of an ITI on a trial that was exactly 20 s, this would also mean that the start of this period overlaps with the termination of the CS from the previous trial and delivery (and presumably consumption) of a pellet. It should be indicated whether the definition of the ITI period was modified on trials where the preceding ITI was < 20 s, and if any other criteria were used to define the ITI. Were the rats exposed to the reinforcers/pellets in their home cage prior to acquisition?

There was an error in the description provided in the original text. The pre-CS period used to measure the ITI responding was 10 s rather than 20 s. There was always at least a 5-s gap between the end of the previous trial and the start of the pre-CS period. The statement about the pre-CS measure has been corrected in the revised manuscript.

(5) For all the analyses, the exact models that were fit and the software used should be provided. For example, it is not necessarily clear to the reader (particularly in the absence of degrees of freedom) that the model discussed in Figure 3 fits on the individual subject data points or the group medians. Similarly, in Figure 6 there is no indication of whether a single regression model was fit to all the plotted data or whether tests of different slopes for each of the conditions were compared. With regards to the statistics in Figure 6, depending on how this was run, it is also a potential problem that the analyses do not correct for the potentially highly correlated multiple measurements from the same subjects, i.e. each rat provides 4 data points which are very unlikely to be independent observations.

Details about model fitting have been added to the revision. The question about fitting a single model or multiple models to the data in Figure 6 (now 5) is addressed in response 2 above. In Figure 5, each rat provides 2 behavioural data points (ITI response rate and CS response rate) and 2 values for reinforcement rate (1/C and 1/T). There is a weak but significant correlation between the ITI and CS response rates (r = 0.28, p < 0.01; log transformed to correct for heteroscedasticity). By design, there is no correlation between the log reinforcement rates (r = 0.06, p = .404).

CONCEPTUAL

(1) We take the point that where traditional theories (e.g., Rescorla-Wagner) and rate estimation theory (RET) both explain some phenomenon, the explanation in terms of RET may be preferred as it will be grounded in aspects of an animal's experience rather than a hypothetical construct. However, like traditional theories, RET does not explain a range of phenomena - notably, those that require some sort of expectancy/representation as part of their explanation. This being said, traditional theories have been incorporated within models that have the representational power to explain a broader array of phenomena, which makes me wonder: Can rate estimation be incorporated in models that have representational power; and, if so, what might this look like? Alternatively, do the authors intend to claim that expectancy and/or representation - which follow from probabilistic theories in the RW mould - are unnecessary for explanations of animal behaviour?***

It is important for the field to realize that the RW model cannot be used to explain the results of Rescorla’s (Rescorla, 1966; Rescorla, 1968, 1969) contingency-not-pairing experiments, despite what was claimed by Rescorla and Wagner (Rescorla & Wagner, 1972; Wagner & Rescorla, 1972) and has subsequently been claimed in many modelling papers and in most textbooks and reviews (Dayan & Niv, 2008; Y. Niv & Montague, 2008). Rescorla programmed reinforcements with a Poisson process. The defining property of a Poisson process is its flat hazard function; the reinforcements were equally likely at every moment in time when the process was running. This makes it impossible to say when non-reinforcements occurred and, a fortiori, to count them. The non-reinforcements are causal events in RW algorithm and subsequent versions of it. Their effects on associative strength are essential to the explanations proffered by these models. Non-reinforcements—failures to occur, updates when reinforcement is set to 0, hence also the lambda parameter—can have causal efficacy only when the successes may be predicted to occur at specified times (during “trials”). When reinforcements are programmed by a Poisson process, there are no such times. Attempts to apply the RW formula to reinforcement learning soon foundered on this problem (Gibbon, 1981; Gibbon, Berryman, & Thompson, 1974; Hallam, Grahame, & Miller, 1992; L.J. Hammond, 1980; L. J. Hammond & Paynter, 1983; Scott & Platt, 1985). The enduring popularity of the delta-rule updating equation in reinforcement learning depends on “big-concept” papers that don’t fit models to real data and discretize time into states while claiming to be real-time models (Y. Niv, 2009; Y. Niv, Daw, & Dayan, 2005).

The information-theoretic approach to associative learning, which sometimes historically travels as RET (rate estimation theory), is unabashedly and inescapably representational. It assumes a temporal map and arithmetic machinery capable in principle of implementing any implementable computation. In short, it assumes a Turing-complete brain. It assumes that whatever the material basis of memory may be, it must make sense to ask of it how many bits can be stored in a given volume of material. This question is seldom posed in associative models of learning, nor by neurobiologists committed to the hypothesis that the Hebbian synapse is the material basis of memory. Many—including the new Nobelist, Geoffrey Hinton— would agree that the question makes no sense. When you assume that brains learn by rewiring themselves rather than by acquiring and storing information, it makes no sense.

When a subject learns a rate of reinforcement, it bases its behavior on that expectation, and it alters its behavior when that expectation is disappointed. Subjects also learn probabilities when they are defined. They base some aspects of their behavior on those expectations, making computationally sophisticated use of their representation of the uncertainties (Balci, Freestone, & Gallistel, 2009; Chan & Harris, 2019; J. A. Harris, 2019; J.A. Harris & Andrew, 2017; J. A. Harris & Bouton, 2020; J. A. Harris, Kwok, & Gottlieb, 2019; Kheifets, Freestone, & Gallistel, 2017; Kheifets & Gallistel, 2012; Mallea, Schulhof, Gallistel, & Balsam, 2024 in press).

(2) The discussion of Rescorla's (1967) and Kamin's (1968) findings needs some elaboration. These findings are already taken to mean that the target CS in each design is not informative about the occurrence of the US - hence, learning about this CS fails. In the case of blocking, we also know that changes in the rate of reinforcement across the shift from stage 1 to stage 2 of the protocol can produce unblocking. Perhaps more interesting from a rate estimation perspective, unblocking can also be achieved in a protocol that maintains the rate of reinforcement while varying the sensory properties of the US (Wagner). How does rate estimation theory account for these findings and/or the demonstrations of trans-reinforcer blocking (Pearce-Ganesan)? Are there other ways that the rate estimation account can be distinguished from traditional explanations of blocking and contingency effects? If so, these would be worth citing in the discussion. More generally, if one is going to highlight seminal findings (such as those by Rescorla and Kamin) that can be explained by rate estimation, it would be appropriate to acknowledge findings that challenge the theory - even if only to note that the theory, in its present form, is not all-encompassing. For example, it appears to me that the theory should not predict one-trial overshadowing or the overtraining reversal effect - both of which are amenable to discussion in terms of rates.

I assume that the signature characteristics of latent inhibition and extinction would also pose a challenge to rate estimation theory, just as they pose a challenge to Rescorla-Wagner and other probability-based theories. Is this correct?

The seemingly contradictory evidence of unblocking and trans-reinforcer blocking by Wagner and by Pearce and Ganesan cited above will be hard for any theory to accommodate. It will likely depend on what features of the US are represented in the conditioned response.

RET predicts one-trial overshadowing, as anyone may verify in a scientific programming language because it has no free parameters; hence, no wiggle room. Overtraining reversal effects appear to depend on aspects of the subjects’ experience other than the rate of reinforcement. It seems unlikely that it can proffer an explanation.

Various information-theoretic calculations give pretty good quantitative fits to the relatively few parametric studies of extinction and the partial-reinforcement extinction effect (see Gallistel (2012, Figs 3 & 4); Wilkes & Gallistel (2016, Fig 6) and Gallistel (2025, under review, Fig 6). It has not been applied to latent inhibition, in part for want of parametric data. However, clearly one should not attribute a negative rate to a context in which the subject had never been reinforced. An explanation, if it exists, would have to turn on the effect of that long period on initial rate estimates AND on evidence of a change in rate, as of the first reinforcement.

Recommendations for authors:

MINOR POINTS

(1) It is not clear why Figure 3C is presented but not analyzed, and why the data presented in Figure 4 to clarify the spread of the distribution of the data observed across the plots in Figure 3 uses the data from Figure 3C. This would seem like the least representative data to illustrate the point of Figure 4. It also appears that the data plotted in Figure 4 corresponds to Figure 3A and 3B rather than the odds 10:1 data indicated in the text.

Figures 3 has changed as already described. The data previously plotted in Figure 4 are now shown in 3B and corresponds to that plotted in Figure 3A.

(2) Log(T) was not correlated with trials to criterion. If trials to criterion is inversely proportional to log(C/T) and C is uncorrelated with T, shouldn't trials to criterion be correlated with log(T)? Is this merely a matter of low statistical power?

Yes. There is a small, but statistically non-significant, correlation between log(T) and trials to criterion, r = 0.35, p = .22. That correlation drops to .08 (p = .8) after factoring out log(C/T), which demonstrates that the weak correlation between log(T) and trials to criterion is based on the correlation between log(t) and log(C/T).

(3) The rationale for the removal of the high information condition samples in the Fig 8 "Slope" plot to be weak. Can the authors justify this choice better? If all data are included, the relationship is clearly different from that shown in the plot.

We have now reported correlations that include those 3 groups but noted that the correlations are largely driven by the much lower slope values of those 3 groups which is likely an artefact of their smaller number of trials. We use this to justify a second set of correlations that excludes those 3 groups.

(4) The discussion states that there is at most one free parameter constrained by the data - the constant of proportionality for response rate. However, there is also another free parameter constrained by data-the informativeness at which expected trials to acquisition is 1.

I think this comment is referring to two different sets of data. The constant of proportionality of the response rate refers to the scalar relationship between reinforcement rate and terminal response rate shown in Figure 5. The other parameter, the informativeness when trials to acquisition equals 1, describes the intercept of the regression line in Figure 1 (and 3).

(5) The authors state that the measurement of available information is not often clear. Given this, how is contingency measurable based on the authors' framework?

(6) Based on the variables provided in Supplementary File 3, containing the acquisition data, we were unable to reproduce the values reported in the analysis of Figure 3.

Figure 3 has changed, using new criteria for trials to acquisition that attempt to match the criterion used by Gibbon and Balsam. The data on which these figures are based has been uploaded into OSF.

GRAPHICAL AND TYPOGRAPHICAL

(1) Y-axis labels in Figure 1 are not appropriately placed. 0 is sitting next to 0.1. 0 should sit at the bottom of the y-axis.

If this comment refers to the 0 sitting above an arrow in the top right corner of the plot, this is not misaligned. The arrow pointing to zero is used to indicate that this axis approaches zero in the upward direction. 0 should not be aligned to a value on the axis since a learning rate of zero would indicate an infinite number of learning trials. The caption has been edited to explain this more clearly.

(2) Typo, Page 6, Final Paragraph, line 4. "Fourteen groups of rats were trained with for 42 session"

Corrected. Thank you.

(3) Figure 3 caption: Typo, should probably be "Number of trials to acquisition"?

This change has now been made. The axis shows reinforcements to acquisition to be consistent with Gibbon and Balsam, but trials and number of reinforcements are identical in our 100% reinforcement schedule.

(4) Typo Page 17 Line 1: "Important pieces evidence about".

Correct. Thank you.

(5) Consider consistent usage of symbols/terms throughout the manuscript (e.g. Page 22, final paragraph: "iota = 2" is used instead of the corresponding symbol that has been used throughout).

Changed.

(6) Typo Page 28, Paragraph 1, Line 9: "We used a one-sample t-test using to identify when this".

This section of text has been changed to reflect the new analysis used for the data in Figure 3.

(7) Typo Page 29, Paragraph 1, Line 2: "problematic in cases where one of both rates are undefined" either typo or unclear phrasing.

“of” has been corrected to “or”

(8) Typo Page 30: Equation 3 appears to have an error and is not consistent with the initial printing of Equation 3 in the manuscript.

The typo in initial expression of Eq 3 (page 23) has been corrected.

(9) Typo Page 33, Line 5: "Figures 12".

Corrected.

(10) Typo Page 34, Line 10: "and the 5 the increasingly"? Should this be "the 5 points that"?

Corrected.

(11) Typo Page 35, Paragraph 2: "estimate of the onset of conditioned is the trial after which".

Corrected.

(12) Clarify: Page 35, final paragraph: it is stated that four-panel figures are included for each subject in the Supplementary files, but each subject has a six-panel figure in the Supplementary file.

The text now clarifies that the 4-panel figures are included within the 6-panel figures in the Supplementary materials.

(13) It is hard to identify the different groups in Figure 2 (Plot 15).

The figure is simply intended to show that responding across seconds within the trial is relatively flat for each group. Individuation of specific groups is not particularly important.

(14) It appears that the numbering on the y-axis is misaligned in Figure 2 relative to the corresponding points on the scale (unless I have misunderstood these values and the response rate measure to the ITI can drop below 0?).

The numbers on the Y axes had become misaligned. That has now been corrected.

(15) Please include the data from Figure 3A in the spreadsheet supplementary file 3. If it has already been included as one of the columns of data, please consider a clearer/consistent description of the relevant column variable in Supplementary File 1.

The data from Figure 3 are now available from the linked OSF site, referenced in the manuscript.

(16) Errors in supplementary data spreadsheets such that the C/T values are not consistent with those provided in Table 1 (C/T values of 4.5, 54, 180, and 300 are slightly different values in these spreadsheets). A similar error/mismatch appears to have occurred in the C/T labels for Figures (e.g. Figure 10) and the individual supplementary figures.

The C/T values on the figures in the supplementary materials have been corrected and are now consistent with those in Table 1.

(17) Currently the analysis and code provided at https://osf.io/vmwzr/ are not accessible without requesting access from the author. Please consider making these openly available without requiring a request for authorization. As such, a number of recommendations made here may already have been addressed by the data and code deposited on OSF. Apologies for any redundant recommendations.

Data and code are now available in at the OSF site which has been made public without requiring request.

(18) Please consider a clearer and more specific reference to supplementary materials. Currently, the reader is required to search through 4 separate supplementary files to identify what is being discussed/referenced in the text (e.g. Page 18, final line: "see Supplementary Materials" could simply be "see Figure S1").

We have added specific page numbers in references to the Supplementary Materials.

Unario y keyword

2 raisedTo: (keyword) y binario (3 + 2)

1 + (3 negated) binario y 3 negated (unario)

2 negated raisedTo: 3 + 2 unario ( 2 negated raisedTo) y binario (3 + 2)

Colección.

Estructura: Un arreglo, 'collect:' un bloque Contiene binario y keyword

Este tipo de mensaje corresponde a arreglos dinámicos. Se entiende porque algunos términso son separados con el símbolo " " y siendo más preciso está en la categoría estático.

Es un mensaje unario.

Es un mensaje binario.

Reviewer #1 (Public review):

Summary:

Gruskin and colleagues use twin data from a movie-watching fMRI paradigm to show how genetic control of cortical function intersects with the processing of naturalistic audiovisual stimuli. They use hyperalignment to dissect heritability into the components that can be explained by local differences in cortical-functional topography and those that cannot. They show that heritability is strongest at slower-evolving neural time scales and is more evident in functional connectivity estimates than in response time series.

Strengths:

This is a very thorough paper that tackles this question from several different angles. I very much appreciate the use of hyperalignment to factor out topographic differences, and I found the relationship between heritability and neural time scales very interesting. The writing is clear, and the results are compelling.

Weaknesses:

The only "weaknesses" I identified were some points where I think the methods, interpretation, or visualization could be clarified.

(1) On page 16, the authors compare heritability in functional connectivity (FC) and response time series, and find that the heritability effect is larger in FC. In general, I agree with your diagnosis that this is in large part due to the fact that FC captures the covariance structure across parcels, whereas response time series only diverge in terms of univariate time-point-by-time-point differences. Another important factor here is that (within-subject) FC can be driven by intrinsic fluctuations that occur with idiosyncratic timing across subjects and are unrelated to the stimulus (whereas time-locked metrics like ISC and time-series differences cannot, by definition). This makes me wonder how this connectivity result would change if the authors used intersubject functional connectivity (ISFC) analysis to specifically isolate the stimulus-driven components of functional connectivity (Simony et al., 2016). This, to me, would provide a closer comparison to the ISC and response time series results, and could allow the authors to quantify how much of the heritability in FC is intrinsic versus stimulus-driven. I'm not asking that the authors actually perform this analysis, as I don't think it's critical for the message of the manuscript, but it could be an interesting future direction. As the authors discuss on page 17, I also suspect there's something fundamentally shared between response time series and connectivity as they relate to functional topography (Busch et al., 2021) that drives part of the heritability effect.

(2) The observation that regions with intermediate ISC have the largest differences between MZ, DZ, and UR is very interesting, but it's kind of hard to see in Figure 1B. Is there any other way to plot this that might make the effect more obvious? For example, I could imagine three scatter plots where the x- and y-axes are, e.g., MZ ISC and UR ISC, and each data point is a parcel. In this kind of plot, I would expect to see the middle values lifted visibly off the diagonal/unity line toward MZ. The authors could even color the data points according to networks, like in Figure 3C. (They also might not need to scale the ISC axis all the way to r = 1, which would make the differences more visible.)

(3) On page 9, if I understand correctly, the authors regress the vector of ISC values across parcels out of the vector of heritability values across parcels, and then plot the residual heritability values. Do they center the heritability values (or include some kind of intercept) in the process? I'm trying to understand why the heritability values go from all positive (Figure 2A) to roughly balanced between positive and negative (Figure 2B). Important question for me: How should we interpret negative values in this plot? Can the authors explain this explicitly in the text? (I also wonder if there's a more intuitive way to control for ISC. For example, instead of regressing out ISC at the parcel/map level, could they go into a single parcel and then regress the subject-level pairwise ISC values out when computing the heritability score?).

(4) On page 4 (line 155), the authors say "we shuffled dyad labels"- is this equivalent to shuffling rows and columns of the pairwise subject-by-subject matrix combined across groups? I'm trying to make sure their approach here is consistent with recommendations by Chen et al., 2016. Is this the same kind of shuffling used for the kinship matrix mentioned in line 189?

(5) I found panel A in Figure 4 to be a little bit misleading because their parcel-wise approach to hyperalignment won't actually resolve topographic idiosyncrasies across a large cortical distance like what's depicted in the illustration (at the scale of the parcels they are performing hyperalignment within). Maybe just move the green and purple brain areas a bit closer to each other so they could feasibly be "aligned" within a large parcel. Worth keeping in mind when writing that hyperalignment is also not actually going to yield a one-to-one mapping of functionally homologous voxels across individuals: it's effectively going to model any given voxel time series as a linear combination of time series across other voxels in the parcel.

(6) I believe the subjects watched all different movies across the two days, however, for a moment I was wondering "are Day 1 and Day 2 repetitions of the same movies?" Given that Day 1 and Day 2 are an organizational feature of several figures, it might be worth making this very explicit in the Methods and reminding the reader in the Results section.

References:

Busch, E. L., Slipski, L., Feilong, M., Guntupalli, J. S., di Oleggio Castello, M. V., Huckins, J. F., Nastase, S. A., Gobbini, M. I., Wager, T. D., & Haxby, J. V. (2021). Hybrid hyperalignment: a single high-dimensional model of shared information embedded in cortical patterns of response and functional connectivity. NeuroImage, 233, 117975. https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2021.117975

Chen, G., Shin, Y. W., Taylor, P. A., Glen, D. R., Reynolds, R. C., Israel, R. B., & Cox, R. W. (2016). Untangling the relatedness among correlations, part I: nonparametric approaches to inter-subject correlation analysis at the group level. NeuroImage, 142, 248-259. https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2016.05.023

Simony, E., Honey, C. J., Chen, J., Lositsky, O., Yeshurun, Y., Wiesel, A., & Hasson, U. (2016). Dynamic reconfiguration of the default mode network during narrative comprehension. Nature Communications, 7, 12141. https://doi.org/10.1038/ncomms12141

Succinil CoA en translocación mitocondrial de la Piruvato quinasa

Loa efectos de un metabolito.

Me quedo la duda de si este término es así "Aginación" o es "Asignación" porque sería el valor que se le asigna a x para ser igual a tres.

En Pharo, un mensaje unario es el tipo más simple de mensaje que puedes enviar a un objeto. Consiste en una sola palabra sin argumentos.

No abordamos esto con profundidad en la clase, comprendo para que sirven pero sería muy bueno si pudieramos estudiar un poco más esto.

Esta parte me resulto muy relevante mientras desarrollaba el ejercicio de CY, porque al dirigirme al documento, comprendía mejor las preguntas del texto.

Hace referencia a las clases (creo) que permiten representar datos simples como números, caracteres, cadenas de texto, símbolos y booleanos. esto teniendo en cuenta que en pharo hablamos de objetos.

Estas partes resultan bastante familiares, teniend en cuenta la gama de herramientas que han sido trabajadas en el marco de la clase, lo cuál tiene sentido teniendo en cuenta que de alguna forma todas las herramientas hacen parte de un ecosistema más grande

Estas dos opciones son las formas más sencillas de interactuar con el código e identificar de manera rápida si tenemos errores en nuestra prosa.

Para estas alturas de la clase, lo interesante es que ya comprendo mejor los conceptos como prosa, código y datos

Serait-ce trop tarte à la crème que de mettre à jour ton discours par rapport à ce dont tout le monde parle aujourd'hui : les générateurs de textes IA? Je me dis que l'on pourrait repartir de la proposition de Louise, la maîtrise de la déprise, pour penser l'écriture. Ce que ChatGPT propose, c'est finalement une double ou triple confiscation de l'écriture (ce qui est presque contre-intuitif lorsque l'on pense à cette machine qui, justement, ne fait que vomir du texte) : confiscation 1) car "elle écrit à notre place", 2) car ce qu'on donne de notre écriture (prompts, données à interpréter) est offert à OpenAI + ce qui est généré l'est à partir de nos données qui relevaient de l'espace public 3) car il y a un risque de perte de compétence. Sans doute que cette privation s'étend à bien d'autres égards, d'ailleurs. Cette citation de Ertzcheid pourrait être utilisée aussi :

Pascal disait : je n’ai pas eu le temps de faire plus court (la citation exacte est « Je n’ai fait [cette lettre] plus longue que parce que je n’ai pas eu le loisir de la faire plus courte »). Ce qui frappe et questionne aujourd’hui, je le redis, c’est l’immensité des moyens technologiques mobilisés au service de toujours davantage de réductions (dont certains ad absurdum) : il s’agit de toujours davantage résumer, synthétiser, ramasser ; tout en prétendant faire toujours plus « pour nous » et le faire à notre place. Longtemps les technologies nous ont placé en situation de pilotage, avant de nous reléguer au rang de co-pilote, puis en nous laissant co-pilote mais en supprimant le pilote au profit d’une seule fonction de pilotage automatique, et nous voilà désormais simplement, inexorablement, irrévocablement … passagers. Passagers par ailleurs exposés à la permanence d’un contrôle identitaire, et passagers sans autre bagage que l’acceptation naïve d’imaginer que nous pourrions encore être maîtres du choix de notre destination.

Et donc toi, repartir de cette notion de déprise (que Louise arrimait plutôt à l'identité), pour parler de déprise de l'écriture. Et proposer PMP comme une manière de reprendre la maîtrise, via le développement de compétences, via l'élaboration d'un collectif, via l'éditorialisation, via des solutions plus sobres.

Je crois qu'il y a un enjeu : celui aussi de retrouver un plaisir d'écriture.

Note d'information : Former nos enfants à une démocratie solidaire

Date : 27 janjier 2021

Source : Extraits de "Former nos enfants à une économie social et solidaire ..." (Conférence en ligne)

Résumé Exécutif :

Ce document synthétise les principaux thèmes et idées abordées lors d'une conférence consacrée à l'éducation à la démocratie solidaire.

La discussion met en lumière la fragilité de nos démocraties actuelles, la nécessité urgente d'une éducation renouvelée impliquant la coéducation entre les parents, l'école et les "tiers lieux", et l'importance cruciale de former les enfants à penser par eux-mêmes et à fabriquer du commun.

Les intervenants soulignent les défis posés par l'individualisme social, la peur de l'altérité et les transformations du statut de l'enfant dans une société marquée par le capitalisme pulsionnel.

Ils proposent des pistes concrètes basées sur la coopération, la réflexivité, la valorisation du travail manuel et le partage de l'inépuisable (la culture).

Thèmes Principaux et Idées Clés :

• La Crise Sanitaire comme Révélateur de Fragilité et de Solidarité :
• La pandémie a mis en évidence notre "fragilité" mais aussi notre "solidarité".
• La solidarité est décrite comme "d'abord un fait" avant d'être une valeur : "nous sommes solidaires que nous le voulions ou non".
• Cette solidarité peut être activée "pour le meilleur ou la désactiver pour le pire".
• La crise appelle également à l'"inventivité".
• La Coéducation : un Trépied Éducatif Fondamental :
• L'éducation et le développement de l'enfant reposent sur la complémentarité de trois composantes essentielles : les parents, l'école et les "tiers lieux" (associations, clubs, etc.).

• La coéducation est une "réalité que nous le voulions ou non" car "c'est le même enfant qui va vivre dans sa famille, aller à l'école, pratiquer un sport ou dans une association".

• L'objectif est d'accompagner l'enfant vers une éducation "plus émancipatrice et une pédagogie plus solidaire".

Rôles Spécifiques des Acteurs Éducatifs :

• Les Parents : Assurent la mission éducative "fondatrice" de la filiation, mettent l'enfant au monde, lui présentent le monde et lui apprennent les gestes premiers. Ils lui permettent de découvrir que "le monde n'est pas entièrement à son service" et l'importance de la frustration pour une croissance équilibrée, conjuguée à la perspective du "retour" et du "bonheur d'être ensemble".

• L'École : Un lieu pour "apprendre ensemble et apprendre à apprendre ensemble", à partager des savoirs "en se respectant comme des individus singuliers". Elle "agrandit le cercle" des solidarités, passant de la solidarité intrafamiliale à la solidarité avec la classe, et au-delà, à la "solidarité avec la planète". C'est le pari de la République, visant le "développement complet de la personne" et l'interaction avec la famille et le territoire.

• Les Tiers Lieux : Lieux informels ou non formels où les enfants "se réunissent", "partent en vacances ensemble", "prennent des responsabilités dans des collectifs". Ils contribuent à la "responsabilisation" de l'enfant.

• Ces trois missions (filiation, transmission, responsabilisation) sont complémentaires pour une "véritable éducation".

Redéfinir les "Fondamentaux" de l'Éducation :

• Le terme "fondamentaux" fait débat, souvent réduit à lire, écrire et compter.

• Jules Ferry, en 1881, défendait une vision plus large incluant "les leçons de choses", le dessin, l'histoire naturelle, les musées scolaires, la gymnastique, les promenades, le travail manuel, le chant. Ces "accessoires" étaient "la chose principale" pour faire de l'école primaire une "école d'éducation libérale" (à la liberté).

• Ferdinand Buisson (1884) va plus loin, affirmant que l'instruction primaire est devenue une "instruction nationale embrassant l'ensemble des connaissances humaines, l'éducation toute entière physique, morale et intellectuelle". Cette éducation globale est "le fondement sur lequel reposera désormais l'édifice tout entier de la culture humaine" et la "condition de cet avenir" pour la démocratie moderne. Il récuse une conception "minimaliste, charitable" de l'éducation pour les déshérités.

Menaces Pesant sur Nos Démocraties (du point de vue éducatif) :

• Un nuage de mots basé sur les réponses des participants révèle les préoccupations : individualisme, peur, ignorance, intolérance, internet, communautarisme, isolement, complotisme, compétition, violence, égoïsme, médias, réseaux sociaux, inégalité, obscurantisme, populisme, extrémisme, désinformation, fondamentalisme.

• Montée de l'Individualisme Social : Ce n'est plus un défaut personnel mais un "mode de fonctionnement" de la société, lié à l'effondrement des systèmes religieux traditionnels et aux transformations sociétales (ex: contraception).

Cet individualisme, bien que source de progrès et d'émancipation, devient préoccupant lorsqu'il devient un système, entraînant une "perte de confiance à l'égard des institution" perçues comme ne servant pas forcément l'intérêt individuel plutôt que le "bien commun". La démocratie doit passer de l'émancipation des tutelles à la capacité de "se réunir ensemble pour construire... le pacte social".

• Attraction de l'Entre Soi et Refus de l'Altérité : Montée des "ghetos" (sociaux, économiques) et peur de se confronter à la différence.

• Évolution du Statut de l'Enfant : Les enfants désirés inversent parfois le rapport familial traditionnel, mettant une pression pour réussir. L'enfant a appris à obtenir satisfaction en créant de la surenchère entre les adultes, activé par la "machinerie publicitaire et commerciale" qui encourage le caprice et la satisfaction immédiate.

• Montée du Capitalisme Pulsionnel (Bernard Stigler) : Un capitalisme qui pousse à satisfaire les pulsions, à ne pas interroger la légitimité de ses désirs, à vouloir et exiger d'avoir tout ce qu'on désire.

Il est activé par les outils de l'immédiateté (smartphone, télécommande) et crée un "sentiment de toute puissance" et l'idée que "tout est réversible" comme dans les jeux électroniques, contrairement à la vie où "il y a de l'irréversible". Se laisser aller aux pulsions "abîme l'humain dans l'autre".

• Le Présentisme : Vivre pour la satisfaction immédiate des pulsions ou des besoins, peinant à se projeter dans un "futur commun" ou à transformer le "futur" (ce qui arrive) en "avenir" (ce qui doit être construit).

Principes Fondamentaux pour l'Éducation à la Démocratie :

• Apprendre à Penser par Soi-même : La maxime kantienne "Sapere aude" (ose penser par toi-même). C'est une "tâche gigantesque" qui exige de "tenir sous contrôle ses préventions, son plein de pulsion, d'espoir et d'intérêt" pour pouvoir "donner raison à l'autre" même si on a tort contre soi-même (Gadamer).

• Cela implique d'apprendre la "vertu du surcis", de "sursoir à l'acte", de "réfléchir avant d'agir" (l'exemple de Janusz Korczak et de sa "boîte des bagarres").

• Cela nécessite d'être "nourri par la culture" pour aider à réfléchir et à vivre, même les événements douloureux.

• Cela signifie transformer le "plaisir de savoir tout de suite" (comme dans les théories du complot qui bloquent l'apprentissage) en "plaisir de chercher", de se documenter, de travailler, d'enquêter.

• Cela requiert d'être "exigeant avec soi-même" pour penser de façon "toujours plus lucide", ne pas se satisfaire de l'approximation ou du slogan. Cette exigence doit être intériorisée par l'enfant (l'exemple du "polissage du texte libre" chez Freinet).

• Fabriquer du Commun : Les citoyens qui pensent par eux-mêmes doivent aussi "fabriquer du commun".

• Cela se fait en "débattant au lieu de se battre" (la métaphore de la Table Ronde de Marcel Mauss). Les éducateurs sont les "charpentiers de cornoille" qui fabriquent cette table.

• Cela implique l'"entraide", y compris comme une "obligation" (sur le modèle de la non-assistance à personne en danger), car "le but de la société c'est le bonheur de chacun" et l'entraide fabrique du commun et de la démocratie.

• Cela passe par la "confrontation", la "collaboration dans un projet", la "coopération dans son sens le plus exigeant" (comme dans la "classe puzzle" d'Elliot Aronson).

Pistes d'Action Concrètes (Propositions des Participants) :

• Sciences et Techniques : Présenter les sciences comme incertaines, enseigner la zéthétique et l'esprit critique, utiliser les nouvelles technologies comme leviers d'émancipation sous accompagnement.

• Culture et Arts : Mettre en avant le patrimoine local, faire venir la culture à l'école, donner la parole aux élèves.

• Citoyenneté, Numérique, Esprit Critique : Apprendre à s'informer, éduquer aux médias, questionner les sources, décoder les fake news, organiser des challenges sur les arguments fallacieux.

• Interculturel : Apprendre les langues en s'appuyant sur les langues du groupe, organiser des rencontres et partenariats interculturels (musique, cuisine, écriture), faire des partenariats avec d'autres pays.

• Rencontre et Vivre Ensemble : Mettre en place des liens de confiance parents-enseignants, penser la place des loisirs et de la pratique artistique et culturelle, faire de la classe un lieu de vie en société, favoriser le dialogue, former à la médiation et gestion de conflits, apprendre à accepter de ne pas savoir et le droit à l'échec.

• Écologie et Environnement : Sensibiliser à l'action concrète pour un "changement durable", sortir de l'ethnocentrisme, permettre aux enfants d'agir et décider d'initiatives locales.

• Organisation du Travail et Travail d'Équipe : Mettre en place des méthodes de travail collaboratives, modifier la politique salariale pour encourager les acteurs à faire autrement, développer l'évaluation du travail de groupe, impliquer les élèves dans la prise de décision et l'auto-évaluation, éduquer à l'acceptation des différents points de vue.

• Actions Militantes, Faits de Société, Mouvements Sociaux : Donner le goût de l'action collective, parler des mouvements sociaux, proposer des espaces de débat et d'engagement, valoriser et participer aux engagements, utiliser les outils de la communication non violente.

• Projet et Activité : Porter des projets communs et citoyens, lier l'individuel et le collectif (l'important est l'expérience, pas seulement le résultat), former les accompagnateurs à la démarche de projet, rendre les élèves acteurs de leurs apprentissages et de leur responsabilisation.

• Économie Sociale et Solidaire : Responsabiliser les jeunes comme acteurs de projets entrepreneuriaux collectifs et d'utilité sociale, adopter des outils de prise de décision démocratique, promouvoir le bénévolat, le travail pour le plaisir, l'échange et la solidarité (pas seulement le profit financier).

Perspectives Pédagogiques :

• L'éducation doit redevenir une "responsabilité collective" de tout le "village".

• Face à une société où la réussite individuelle est supposée contribuer à l'intérêt collectif, il faut travailler à des formes de "coopération qui profitent à tous et construisent le commun".

• Face à une société de la satisfaction pulsionnelle et de l'immédiateté, il faut travailler sur le "surcis", la "réflexivité" et le "nourrissage par la culture".

• Face à une pédagogie bancaire (Paolo Freire) où l'on bâcle le travail, il faut faire de la "remise en chantier", de la "patience d'atelier" (Alain), en visant à "devenir meilleur que soi-même" (Albert Jacquard) plutôt que meilleur que les autres.

• Face à une société de la virtualisation de l'économie, il faut faire de la "rencontre avec la résistance de l'objet", du "travail concret", du "travail de la main" pour "obéir à des lois sans s'humilier en obéissant aux autres".

• Face à une société où l'on consomme l'épuisable, il faut permettre d'accéder aux "bien communs fondamentaux" et trouver sa satisfaction dans le "partage de l'inépuisable" (la culture).

L'Articulation Individuel/Collectif :

• C'est un "enjeu majeur" et un "problème" à considérer en éducation.

• Spontanément, la "division du travail" l'emporte, entraînant inégalités et intériorisation des rôles (concepteur, exécutant, chômeur, gêneur).

• L'éducation n'est pas le lieu de la production narcissique de l'éducateur.

• Il faut organiser le travail de groupe sur la "rotation des tâches" pour que chacun explore "tous les rôles" (l'exemple de Macarenko et du "président d'un jour"). Donner à chacun la possibilité d'explorer de nouvelles responsabilités et savoirs.

Conclusion :

• Nos démocraties sont "fragiles" et "mortelles", nécessitant un "investissement éducatif".

• Face à la fragilité, il n'y a que la "solidarité", qui demande de l'"inventivité".

• Il faut un "village solidaire", "exemplaire" (les adultes sont des repères), et "démocratique".

• Le travail est "compliqué" mais "on va y arriver" car l'enjeu est "essentiel".

Les démocraties ont besoin d'une "éducation à la démocratie" qui soit une "éducation à la solidarité" où chacun apprend à penser et à s'allier pour construire le bien commun.

Citations Clés :

• "Cette solidarité n'est pas d'abord une valeur c'est d'abord un fait nous sommes solidaires que nous le voulions ou non"

• "Former nos enfants à une démocratie solidaire ce que peuvent les parents l'école et l'éducation populaire"

• "c'est le même enfant que nous voulons accompagner ensemble pour une éducation à la fois plus émancipatrice et une pédagogie plus solidaire"

• "l'école de la République est celle qui précisément ne s'en tient pas à une vision des fondamentaux qui seraient étriqués... l'école de la République c'est une école qui vise le développement complet de la personne"

• "L'instruction primaire tel que l' définit loi du 28 mars 1882... n'est plus cet enseignement rudimentaire... c'est une instruction nationale embrassant l'ensemble des connaissances humaines l'éducation toute entière physique morale et intellectuelle" (Ferdinand Buisson)

• "ose penser par toi-même" (Kant, Sapere aude)

• "C'est véritablement une tâche gigantesque qui se trouve assignée à chaque homme à tout instant... Il s'agit de tenir sous contrôle ses préventions... suffisamment pour que l'autre ne devienne pas invisible... qu'on puisse donner raison à l'autre qu'on doiv tort contre soi-même" (Gadamer)

• "tu as le devoir de réfléchir avant de te battre" (Interprétation de l'action de Korczak)

• "Transformer le plaisir de savoir tout de suite en plaisir de chercher"

• "pour commencer il fallu d'abord poser les lances" (Marcel Mauss)

• "débattre au lieu de se battre"

• "il faut tout un village pour élever un enfant"

• "La bonne évaluation c'est celle qui permet de devenir meilleur que soi-même" (Albert Jacquard cité)

• "Le coût on le connaît et le coût il est réel le coût il est vrai le problème c'est que la société dans laquelle nous vivons n'est plus une société du coût c'est une société du prix"

• "les lois elles n'émanent pas de moi elles n'émanent pas de celui qui me les impose elles émanent du matériau même avec lequel je travaille"

• "nos démocraties modernes ont besoin d'une éducation à la démocratie qui soit une éducation à la solidarité et qui souhaite une éducation où chacun apprend à penser et apprend à s'allier avec autrui pour construire le bien commun"

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Reply to the reviewers

Dear Editor,

Thank you for reviewing our article. We are happy to see that the reviewers are positive on our manuscript. We have tried to address nearly all their comments. Find below a point-by-point answer.

With best regards,

Bruno Lemaitre and Asya Dolgikh

Reviewer #1 (Evidence, reproducibility and clarity (Required)):

This work defines NimB1 protein as a PS binding bridging molecule but with a negative regulatory role in efferocytosis. Specifically, the authors demonstrate via a variety of genetic, cell biological, and other approaches that loss of NimB1 leads to Drosophila macrophages being more adherent to apoptotic targets and engulf them more robustly. The authors also nicely demonstrate that the function of NimB1 differs from NimB4, and the double mutant demonstrating PS-binding yet, distinct roles. Further, the authors show that NimB1 does not affect bacterial phagocytosis.

Overall, this is a well-done study. The authors have already done a very thorough job addressing the key points and I congratulate the authors.

My only minor comment is that the authors could try to make the comment better about whether or not such a 'negative regulatory' bridging molecules may exist in other species, and particularly mammals. If so, this is quite novel. The authors refer to CD47 but this is a membrane protein. The other minor comment is whether the authors ever tried express the PS binding domains as a fusion protein - this would provide a more direct evidence for the binding to PS (although the authors do competitive inhibition with Annexin V). This could be commented upon although testing this is not necessary if they have not already done so.

We greatly appreciate the reviewer’s positive feedback. In the revised manuscript, we have now included a more detailed discussion of mammalian proteins with analogous roles, specifically referencing Draper isoforms (I and II), the CD300 receptor family, and surfactant proteins A and B (see page 16).

Reviewer #1 (Significance (Required)):

The identification of the negative regulator bridging protein NimB1 is novel and could be broadly interesting to those studying efferocytosis.

Regarding the suggestion to overexpress just the putative PS-binding domain of NimB1, we agree this could strengthen the evidence for its PS-binding function. However, generating a new transgenic fly line would require significant additional time. Moreover, the presence of a PS-binding motif was also proposed in the recent study on Orion (Ji et al., 2023), which we have cited in our manuscript. The Orion binds PS through a conserved RRY motif. This motif is critical for Orion’s ability to directly interact with PS and facilitate its secretion. Mutagenesis experiments disrupting the RRY motif—specifically substituting arginine residues with alanines—abolished Orion’s PS-binding capacity, demonstrating the essential role of this sequence. Functional assays also validated that Orion competes with Annexin V, a well-established PS-binding protein, for access to PS-exposing surfaces (Ji et al., 2023).

Reviewer #2 (Evidence, reproducibility and clarity (Required)):

Summary:

In this study, Dolgikh and colleagues propose a first investigation about the role of the drosophila Nimrod protein NimB1. Although the role of several members of the family in phagocytosis has been explored, the function of Nimrod type B proteins is less addressed. Within silico analysis, they first see a strong similarity between NimB1 and NimB4. They show that NimB1 is primarily expressed in phagocytes, and as NimB4 can bind phosphatidylserines (PS), leading to a possible shared role in efferocytosis. Using transgenic and null drosophila models, the authors then compare the impact of NimB1 overexpression or deficiency. They compare the effects shown to NimB4 and Draper deficient lines, as these two proteins were previously shown to play a role in efferocytosis. They propose that NimB1 is a secreted protein that binds apoptotic cells. They show that NimB1 deficiency changes the adhesion properties of macrophages. The major finding is that NimB1 delays the early stages of efferocytosis, contrary to NimB4 and Draper that on the contrary facilitate efferocytosis. In contrast, the authors propose that NimB1 increases the formation of phagosomes.

We appreciate the reviewer’s acknowledgment that our key discovery centered around NimB1 functioning as a negative regulator of efferocytosis. This finding highlights NimB1’s distinct role compared to NimB4 and Draper, which instead promote the process.

Major comments:

One of the major technical challenges here was to generate models to allow the detection of the protein in cellulo and in vivo. Although the results are convincing in transgenic lines NimB1 expression is driven by the endogenous promoter, one could still argue that the GFP tags would lead to changes in the localization of the protein.

We understand the concern regarding potential localization changes introduced by GFP tags. However, in previous studies, the same fosmid construct was applied to NimB4-sGFP, and produced a distinctly different expression pattern—NimB4-sGFP expression was more pronounced and clearly present in the glial cells in the brain (Petrignani et al, 2021: Figure EV1A). The fact that the NimB1-sGFP and NimB4-sGFP fosmids localized to different tissues suggests that possible any mis-localization changes due to the GFP tag do not override localization properties intrinsic to the proteins.

In line with the previous comment, to show that NimB1 is a secreted protein, the authors use an overexpression model. How to be sure, that overexpression itself does not lead to increased secretion, or shedding from the membrane?

The observation that uas-NimB1-RFP accumulates in the nephrocytes upon Lpp-Gal4 (fat body) expression, and the presence of a signal peptide suggests that this protein can be secreted.

We cannot exclude that in endogenous condition, NimB1, remains attached to hemocytes. We have confirmed that the Lpp driver is not expressed in nephrocytes.

Would an experiment with a control consisting in a known protein secreted by macrophages lead to the same staining pattern (positive control)? Could another methodology like a Western Blot on supernatants from hemocyte cell culture (over)expressing NimB1, with an anti-RFP staining, be envisaged?

We have already performed similar experiment with other secreted proteins such as NimB4-GFP (Petrignani et al., 2021: Figure: 1B). In the revised article, we have added Viking-RFP as a positive control of a secreted protein (Figure S1F). Figure S2 shows a Western blot with hemolymph extract. We detected NimB1-RFP at its expected molecular weight of 44 kDa, verifying that is present into the hemolymph (Supplementary Document S2 C).

It sems counterintuitive that phagocytes from Draper and NimB4 null mutants with defects in efferocytosis show increased load of apoptotic cells (Figure 6C and D in both unchallenged and injury condition). Do the authors have precedent data to cite going to the same direction? Are cell debris engulfed but not degraded efficiently?

The observation that Draper and NimB4 null mutants have an increased load of apoptotic cells has already been reported in the literature. Several studies have now shown that Draper is not always required for the initial uptake of apoptotic corpses but is critical for phagosome maturation (Meehan et al., 2016; Serizier et al., 2022; Serizier & McCall, 2017). In our article on NimB4 (Petrignani et al., 2021), we have previously shown that the accumulation of immature phagosomes that are not properly eliminated indirectly impairs the uptake of new apoptotic corpses. This explains why efferocytosis is then impaired only at late time points, when unresolved phagosomes have accumulated to the threshold that prevents further phagocytosis.

In Figure 6D it seems indeed that NimB4, NimB1/NimB4 and Draper mutants do not accumulate more apoptotic material upon injury. However, levels for NimB4 is close to the one obtained with NimB1 mutants. Is it statistically true? If yes, what could be the reason for this similarity? In any case, as some important conclusion relies on the comparison between UC and injury conditions, adequate statistics and representations could be proposed.

We thank the reviewer for this pertinent observation and the opportunity to clarify. In the unchallenged (UC) condition, NimB4sk2 and draperΔ5 mutants indeed exhibit significantly elevated levels of apoptotic cell (AC) content in macrophages compared to wild-type and NimB1 mutant genotypes (****p crimic and NimB1229/NimB1crimic* mutants show significantly lower levels in the UC condition, consistent with a role for NimB1 in early recognition or regulation of phagocytic initiation, not in corpse degradation.

In contrast, upon injury (90 minutes post-challenge) we observe a statistically significant increase in apoptotic material in NimB1 mutants compared to UC hemocytes of the same genotype (****p sk2 and draperΔ5* mutants between the UC and 90 min conditions (ns for NimB4). This is consistent with their known defect in corpse degradation, which results in saturation of phagocytic capacity at baseline, and an inability to respond further upon challenge with apoptotic cells.

While the absolute levels of apoptotic material in injured NimB1 and UC NimB4 mutants appear similar at first glance, statistical testing confirms that they are significantly different. NimB4 mutant macrophages retain apoptotic debris due to defective degradation, whereas NimB1 mutants have an increase in newly acquired apoptotic content due to enhanced uptake.

Additionally, NimB161, NimB4sk2 double mutants display a partial increase in apoptotic load upon injury (****p To directly address the reviewer’s suggestion, we have now recalculated and visualized key comparisons with appropriate statistical testing, as shown in Revision Figure 1. All statistical analyses were conducted using unpaired two-tailed Student’s t-tests. This additional figure allows clearer evaluation of genotype-specific differences at both baseline and post-injury conditions and supports our conclusions that NimB1 and NimB4 regulate distinct stages of phagocytosis. We have also clarified the text to better explain that both NimB4 and Draper mutants accumulate unresolved apoptotic material under baseline conditions, and do not accumulate further material upon challenge, due to a block in phagosome maturation.

Revisions Figure 1.

__Quantification of phagocytic events in wild-type and mutant macrophages under unchallenged and post-injury conditions __

(A) Comparison of phagocytic events per frame in w1118 (wild-type), NimB1crimic, NimB1229/NimB1crimic, NimB4sk2, NimB161,NimB4 sk2, and draperΔ5 larvae under unchallenged conditions (UC) and 90 minutes after injury (90 min). Data are presented as individual data points with means. Statistical significance was determined using Student's t-test (*P (B) Direct comparison of phagocytic events between NimB1crimic (red) and NimB4sk2 (gray), and between NimB1229/crimic (dark red) and NimB4sk2 (gray) under both unchallenged (UC) and post-injury (90 min) conditions.

The authors claim with analyses of Figure 8C and D, that NimB1 mutants show acidic vehicles normal in size and fluorescence intensity. However, statistical differences are still observed compared to control condition, which is also seen in representative images shown.

In Figure 8C and D, we provide two quantitative measures to clarify the size and intensity of acidic vesicles. First, we show that mean fluorescence in hemocytes is elevated for all NimB and draper mutants compared to wild type, indicating an overall increase in internalized material. However, we also quantified the number of vesicles per hemocyte and found that NimB1 mutants exhibit significantly more vesicles. Despite this increase, the representative images do not show an obvious enlargement of individual vesicles, suggesting that while more material is being taken up, the vesicles themselves are not enlarged. The enlarged vesicles in case of NimB4 or draper mutant would result from the unresolved cargo (Petrignani et al., 2021). This distinction underscores that higher fluorescence values reflect increased cargo internalization, rather than the larger vesicular structures that result from impaired degradation as in NimB4 or draper mutants.

Minor comments:

In figure 2D, what allows to say the expression is restricted in macrophages? Is it the colocalization with SIMU being a macrophage-specific marker?

In Figure 2D, we relied on SIMU as a macrophage-specific marker in Drosophila embryos to determine that NimB1 expression is restricted to macrophages. Previous research has demonstrated that SIMU is predominantly expressed in embryonic macrophages (where it is essential for apoptotic cell clearance) (Kurant et al., 2008; Roddie et al., 2019). Consequently, the colocalization of NimB1 signal with SIMU-positive cells strongly indicates that NimB1 is confined to macrophages during this developmental stage.

In figure S3B and C, it appears that double NimB1/NimB4 mutants exhibit less spreading than single ones (especially NimB4). Is it the case (statistical significance). If yes what could be the explanation?

Yes, the double NimB1, NimB4 mutants exhibit higher number of hemocytes and significantly reduced cell spreading compared to single mutants. The phenotype is similar to NimC1, eater double mutants (Melcarne et al., 2019) which also show higher number of hemocytes, reduced cell spreading and also diminished capacity to phagocytose apoptotic cells (and, in the case of NimC1, Eater, bacteria as well) (Melcarne et al., 2019). A likely explanation lies in impaired membrane remodeling critical for pseudopod extension and phagosome formation. Studies have shown that defects in actin polymerization or membrane tension can hinder pseudopod extension, reducing phagocytic efficiency (Lee et al., 2007; Masters et al., 2013). Same for the decreased ability of these mutants to form filopodium, a process essential for effective target engagement and engulfment. Filopodia play a significant role in capturing particles and directing them toward the macrophage body for engulfment (Horsthemke et al., 2017). Disruptions in these pathways lead to reduced phagocytic efficiency and a more rounded macrophage morphology, as the cells fail to spread properly (Horsthemke et al., 2017; Lillico et al., 2018). Other than these general observations, we do not have an explanation as to why NimB1, NimB4 double mutants specifically show a higher number of hemocytes and reduced cell spreading.

Several graphs are identical between figure 4 and S4. It is probably not useful and complicates reading.

We agree that duplicating these graphs complicates the presentation. Therefore, we have removed the redundant graphs in the supplementary materials, ensuring the data are shown only once to maintain clarity and ease of reading

As TEM images shown in Figure 8B do not lead to quantitative data, I would put it as supplementary file.

We agree that the TEM images in Figure 8B do not provide strictly quantitative data. To streamline the main manuscript, we have relocated these images to the supplementary section in the revised version

Reviewer #2 (Significance (Required)):

This study uses several approaches and models to address the role of NimB1 in efferocytosis. Both In Vitro and In Vivo approaches are proposed. They give insight into the role of this protein with unknown function so far. Some statistical analysis could be performed to improve the clarity of conclusions. One of the important aspects is the secreted nature of NimB1.However, additional approaches could be proposed to confirm this.

Basic immunologists and cell biologists would be interested in reading this article that highlights the delicate equilibrium between pro and anti-efferocytosis molecules.

I am an immunologist/cell biologist with expertise in lysosomal catabolism. As I work on mouse models or Human samples, my mastering of drosophila as a model is limited.

We thank the reviewer for the positive evaluation of our work. In this revision, we have added further detail to clarify the properties of NimB1 as a secreted protein and strengthen our data presentation. By providing additional clarity on methods and interpretations, we hope immunologists and cell biologists—including those who do not routinely work with Drosophila—will find our findings more accessible.

Reviewer #3 (Evidence, reproducibility and clarity (Required)):

This paper investigates the role of NimB1, a secreted member of the Nimrod family in Drosophila, in the process of efferocytosis, the clearance of apoptotic cells by macrophages. Previous studies have identified NimB4, another secreted Nimrod protein, as a positive regulator of efferocytosis, enhancing both apoptotic cell binding and phagosome maturation. In contrast, the authors propose that NimB1 functions as a negative regulator, slowing down the early stages of apoptotic cell binding and internalization. This regulatory balance is suggested to fine-tune efferocytosis to maintain homeostasis.

The primary aim of this study was to characterize the function of NimB1 to better understand the roles of proteins within the NimB family.

This study identifies a novel function for NimB1 in modulating the early stages of efferocytosis, adding to our understanding of how Nimrod proteins fine-tune apoptotic cell clearance. The authors establish a clear phenotypic contrast between NimB1 and NimB4, which provides a compelling framework for understanding how positive and negative regulators coordinate phagocytosis. It also highlights the multiple roles of the secreted members of the Nimrod scavenger receptor family, which have remained so far poorly investigated.

This is an interesting study that could be strengthened by additional validation and broader experimental support. As the authors point out in the discussion, it is known that PS bridging molecules contribute to phagocytosis and that the contribution of positive and negative players finely tune phagocytosis in flies and mammals. Clarifying the mode of action of NimB1 in those processes would higher the impact of this interesting piece of work. For example, does NimB1 interact with NimB4 and if so, what is the role of this interaction? How does NimB1 integrate in the signaling cascade that allows scavenger receptors to bind PS? Does it act similar to Orion by enhancing the PS binding of a scavenger receptor?

Key Findings • NimB1 and NimB4 are structurally similar, as supported by AlphaFold2 modeling, suggesting functional relatedness. • NimB1 is expressed in macrophages, secreted into the hemolymph, and binds apoptotic cells in a phosphatidylserine (PS)-dependent manner. • NimB1 is induced by challenge. • NimB1 mutants display a hyper-phagocytic phenotype, with faster recognition and internalization of apoptotic cells. • NimB1 loss enhances macrophage adhesion and actin remodeling, while bacterial phagocytosis remains unaffected, suggesting a specific role in apoptotic clearance. • NimB1 acts early in the phagocytic process, while NimB4 functions at later stages, particularly in phagosome maturation.

We thank the reviewer for their positive assessment and are pleased that our findings identify NimB1 as a novel secreted negative regulator of efferocytosis, underscoring a greater level of regulatory complexity in apoptotic cell clearance.

Unfortunately, attempts to produce functional NimB1 protein were not successful, limiting our ability to address some of the reviewer’s suggestions experimentally. Despite these challenges, the evidence we present—particularly from our genetic assays—clearly indicates that NimB1 exerts an inhibitory influence during the early steps of apoptotic cell binding, distinguishing it from the late-stage promoting function of NimB4.

Major comments:

Figure 1: AlphaFold is a valuable tool for generating hypotheses, however predicted structures should not be presented as definitive evidence of similarity, particularly without complementary experimental validation. This section would be stronger if the structural predictions were explicitly framed as predictions. In the absence of such data, the interpretation should be toned down.

We agree with the reviewer and we have now framed our observation as prediction and toned down our interpretation. We also note that the similarities between NimB4 and NimB1 are also underlined by the phylogenetic analysis and expression pattern.

Figure 2DE: Given its basal level in homeostatic conditions, it would have been useful to look at the NimB1-GFP upon challenge. Also, the authors show only a single larval macrophage with no comparison point. To strengthen this result, the authors could include another protein quantification method, such as western blotting. Alternatively, labelling of NimB1>UASmRFP in embryo that present the highest expression levels would also strengthen this result.

Unfortunately, we cannot currently perform additional experiments on embryos within the scope of this project because those experiments were performed by our collaborators in Haifa (Estee Kurant Lab). Repeating them would require sending the lines to their lab and accommodating their experimental schedule and manpower constraints.

In supplementary Figure S1F: the authors overexpress NimB1-RFP using the fat body driver Lpp-Gal4 and show larvae with RFP in the nephrocyte. Could filet preparations be shown? Could the authors present evidence that the Lpp driver is not expressed in the nephrocytes (or refer to literature)?

The Lpp-Gal80 driver is described as fat body-specific and has been used to manipulate gene expression in the fat body in many other studies. We have checked Lpp-Gal80>UAS-GFP expression in larvae and did not observe expression in larval nephrocytes. The whole live larvae were observed under the microscope with no prior filet preparations. To provide the evidence that Lpp is not expressed in the nephrocytes we are providing the images of the whole larvae expressing GPF from the Lpp, as per genotype: Lgg-Gal80>UAS-GFP (see below, Revisions Figure 2).

Revisions Figure 2.

__Expression pattern of Lpp-Gal80>UAS-GFP in Drosophila larvae __

Representative fluorescence microscopy images showing GFP expression driven by the Lpp-Gal80 system in Drosophila larvae. The images display dorsal (top) and ventral (bottom) views of the same larva, demonstrating the pattern of expression throughout the fat body tissue. Green fluorescence indicates cells expressing the GFP reporter under the control of the Lpp promoter, which is predominantly active in the larval fat body.

The results on the increased number of hemocytes observed in the double NimB1, NimB4 mutant animals (Figure S3A) remains not only disconnected from the rest of the data but also unexplained. Providing a mechanistic view may require a significant amount of work that may indicate an additional role of the two NimBs but will not add to our understanding of the role of NimB1 in phagocytosis. Nevertheless, it would be at least useful to know whether in the double mutant the lymph gland is still intact, as its precocious histolysis could account for the elevated number of hemocytes. If that were the case, that could indicate that lacking the two NimBs triggers an inflammatory state that affects the lymph gland, meaning that the pathway controlling phagocytosis also has a systemic impact on development. When checking the representative Figure S4D, it seems that very large cells are present in the double mutants, even larger than in the single mutants. These could be (pre)lamellocytes, which constitute activated hemocytes, known to impact the status of the lymph gland. If the enhanced number of hemocytes does not depend on lymph gland histolysis, a simple immunolabeling with the anti-PH3 antibody would assess the proliferative phenotype of the double mutant hemocytes. At least this piece of data would provide a better explanation for the observed phenotype.

We thank the reviewer for this interesting comment. We cannot explain why NimB1, NimB4 double mutants have more hemocytes. It is unclear to us if this is a secondary consequence of defects in efferocytosis or linked to another function of these two NimBs, such as a role in adhesion. We did look at the lymph gland and our preliminary observations suggest that NimB1, NimB4 double mutants have an easily ruptured or fragile lymph gland, which could explain the higher number and the roundish shape of hemocytes in circulation as proposed by the reviewer. Lacking expertise on lymph gland, we prefer not to include this data, as they are not central to the main message of this article on role of NimB1 on efferocytosis. We have also noted the presence of lamellocytes in unchallenged NimB1, NimB4 double mutant larvae, as well as excessive lamellocyte production compared to controls upon clean injury (see below, Revisions Figure 3). We have mentioned the presence of lamellocytes in NimB1, NimB4 double mutants in the revised version. We prefer not include this new data directly in the article because this not central to the main message of the article.

__Revisions Figure 3. __

A.

B.

Lamellocyte recruitment following a clean injury in L3 Drosophila larvae:

(A) Quantification of lamellocytes per 50 frames of x63 microscopy lens in w1118 (wild-type), NimB1crimic, NimB4sk2, NimB161, NimB4sk2, and draperΔ5 larvae under unchallenged conditions (UC) and 3 hours after clean injury (3h). Arrowheads indicate lamellocytes.

(B) Representative confocal microscopy images of hemocytes isolated from challenged NimB161, NimB4sk2 larvae. Cells were fixed and stained with Phalloidin (green) to label F-actin and DAPI (blue) to visualize nuclei. The smaller inset (40x magnification) shows a detailed view of individual lamellocytes with characteristic morphology, while the larger field (20x magnification) displays the overall view on the hemocytes. Scale bar = 50 μm.

Figure 6: The connection between the ex-vivo (Figure 5) and in vivo (Figure 6) assays should be clarified. In the first type of assay, the lack of NimB4 results in reduced internalization (while lack of NimB1 enhances it). In the in vivo assay, more fragments are seen within the cell (hence internalized), using the NimB4 mutant. Also, in the ex-vivo assay, the lack of NimB1 does not affect the first steps ('attachment' and 'membrane'), while NimB4 does, yet it is proposed that NimB1 acts in the early steps (page 11-12). In that case, wouldn't we expect the double mutant NimB1 NmB4 to have the NimB1 phenotype?

The apparent discrepancy between our ex vivo and in vivo assays reflects the different methodologies and what each assay measures. In the ex vivo assay (Figure 4), we add exogenous fluorescently-labeled apoptotic cells to measure new engulfment events. Here, NimB4 mutant macrophages show reduced phagocytic index because they are already saturated with unresolved phagosomes, limiting their capacity to uptake additional corpses, as previously described by (Petrignani et al., 2021). This reduced uptake capacity is reflected in the decreased phagocytic index observed.

In contrast, our in vivo assay (Figure 6) uses DAPI staining to visualize all internalized material, including previously engulfed debris. As expected, we observe accumulation of DAPI signals in NimB4 mutant macrophages under unchallenged conditions, reflecting their inability to process and clear phagosomes rather than enhanced engulfment. This phenotype highlights the role of NimB4 in phagosome maturation rather than initial uptake.

Regarding the role of NimB1 in early phagocytic steps, while attachment and membrane measurements in the ex vivo assay don't show significant differences in NimBcrimic mutants individually, our other experiments demonstrate that NimB1 functions as a negative regulator during early recognition phases. The predominance of the NimB4 phenotype in the NimB1crimic, NimB4 double mutant parallels observations in draper mutants, where double mutants lacking both Draper I (positive regulator) and Draper II (negative regulator) display the Draper I phenotype (Logan et al., 2012). This suggests that phagosome maturation defects (the NimB4 phenotype) present a more severe bottleneck in the phagocytic process than enhanced early uptake (the NimB1crimic phenotype), explaining why the double mutant primarily exhibits accumulation of unresolved phagosomes rather than accelerated uptake. We have re-written this part of the article to clarify these points (see page 11).

Figure 8A: a definition of the phagocytic cup mentioned in the text (page 12, 2nd paragraph) as well as the homogenization of the scale bars in Figure 8A would clarify the interpretation of Figure 8A. The structures shown for w1118 seem quite distant from the structures highlighted for NimB1crimic.

According to reviewer 2, we have now moved this figure to the supplement. The reviewer is correct and we have modified the associated text to clarify the interpretation of the images (see page 12-13).

The same scale should be used across different panels in Figure 8. This is particularly important since the authors mention the size of the lysotracker vesicles to conclude on their levels of maturity. This data and conclusions would be strengthened by a quantification of the vacuole sizes and the combination with markers of phagosome/lysosome maturation levels. It would help disentangling the complementary roles of NimB1 and NimB4.

The scale bar has been homogenized.

Minor comments:

Figure 2BC: is there a particular reason to shift from Rp49 to Rpl32 as normalizing gene in Figure 2B and C? This prevents the comparison of NimB1 expression levels across the different graphs.

We thank the reviewer for highlighting this point. We changed the housekeeping gene from Rp49 to RPL32 in Figure 2C to unify the normalization strategy across all experiments and allow comparisons throughout the manuscript.

Page 9, 2nd paragraph and Figure S3C: the authors mention "Actin structure revealed an increased ratio of filopodia to lamellipodia across all mutants". A clear definition of the parameters defining filopodia and lamellipodia is required to fully appreciate the meaning of the ratio.

We thank the reviewer for the comment. To address this comment, we have included a clear definition of the parameters used to distinguish filopodia and lamellipodia on page 9. In particular, in the revised version we now specify that filopodia were defined as thin, spike-like actin-rich protrusions, while lamellipodia were defined as broad, sheet-like structures at the cell periphery. These criteria were applied consistently for quantification.

Figure S5B: a bar is missing in the right graph (% of cells containing AC, NimB1>UAS-NimB1-RFP). Page 10 2nd paragraph. The authors mention "draper mutants displayed impaired apoptotic cell binding and engulfment" referring to Figure 4. Figure S4 provide a more convincing illustration of this statement, since the decreased phagocytic index in Drpr KO is mostly due to less cells phagocytosing and not less material phagocytosed.

We thank the reviewer for the careful examination. In Figure S5B, the missing bar was due to its color being too close to the background color, making it difficult to distinguish. We have now corrected this by adjusting the color to ensure it is clearly visible.

Regarding the comment on page 10, we agree that Figure S4 more clearly illustrates the impaired apoptotic cell binding and engulfment observed in draper mutants, particularly through the reduced percentage of hemocytes engaging in phagocytosis. We have now clarified the statement in the text to ensure consistency and to guide the reader appropriately to Figure S4 (10).

Figure 6: not easy to distinguish the DAPI labelling relative to the nucleus vs. that of apoptotic fragments.

This is a good point. We have changed the images for clearer demonstration of the DAPI labelling. See Figure 6.

Figure 7B: the number of cells used to generate the violin plot should be indicated in the legend or the method section.

We have mentioned the number of cells used in the quantification (n-50 per genotype) in the figure legend.

A schematic figure recapitulating the data would help

We have added a schematic figure recapitulating the data. See Figure 9 with associated text.

Page 11 last line: homeostatic rather than hemostatic.

Thank you for this comment. We have changed it.

Reviewer #3 (Significance (Required)):

This study identifies a novel function for NimB1 in modulating the early stages of efferocytosis, adding to our understanding of how Nimrod proteins fine-tune apoptotic cell clearance. The authors establish a clear phenotypic contrast between NimB1 and NimB4, which provides a compelling framework for understanding how positive and negative regulators coordinate phagocytosis. It also highlights the multiple roles of the secreted members of the Nimrod scavenger receptor family, which have remained so far poorly investigated.

This is an interesting study that could be strengthened by additional validation and broader experimental support. As the authors point out in the discussion, it is known that PS bridging molecules contribute to phagocytosis and that the contribution of positive and negative players finally tune phagocytosis in flies and mammals. Clarifying the mode of action of NimB1 in those processes would higher the impact of this interesting piece of work. For example, does NimB1 interact with NimB4 and if so, what is the role of this interaction? How does NimB1 integrate in the signaling cascade that allows scavenger receptors to bind PS? Does it act similar to Orion by enhancing the PS binding of a scavenger receptor?

We thank the reviewer for the insightful comments and suggestions. Indeed, understanding the mode of action of NimB1 in the regulation of efferocytosis would significantly strengthen the impact of our findings. Our data, supported by structural and phylogenetic analyses, indicate that NimB1 and NimB4 share a conserved phosphatidylserine (PS)-binding motif, suggesting that these proteins may interact functionally. Preliminary biochemical observations, together with structural predictions, raise the possibility of a direct or indirect interaction between NimB1 and NimB4, although this remains to be experimentally confirmed.

Our observations from NimB1 and NimB4 double mutants reveal that the phenotype closely resembles that of NimB4 single mutants, indicating that NimB4 plays a dominant role in the downstream maturation steps of phagosome processing. These findings are consistent with a model in which NimB1 may modulate early phagocytic uptake, possibly by competing with NimB4 for PS binding or by limiting NimB4 accessibility to apoptotic cells, thereby fine-tuning the rate of efferocytosis.

Regarding the integration into the signaling cascade, while NimB1 and Orion both recognize PS, our data suggest that they function through distinct mechanisms. Orion enhances PS binding to Draper receptor isoforms to promote apoptotic corpse recognition. In contrast, NimB1 appears to act as an inhibitory modulator, potentially masking PS or limiting receptor engagement, thus slowing the phagocytic response. Further functional studies, including receptor-binding assays, will be important to determine whether NimB1 acts by altering receptor-ligand interactions or through a different regulatory pathway.

Future experiments investigating the potential direct interactions between NimB1 and NimB4, their respective affinities for PS, and their influence on phagocytic receptor dynamics will be necessary to better understand NimB1’s precise mode of action. Such studies will help clarify how secreted regulators fine-tune efferocytosis in Drosophila and may offer broader insights into conserved principles of phagocytic regulation across species.

__ __

List of References:

Horsthemke, M., Bachg, A. C., Groll, K., Moyzio, S., Müther, B., Hemkemeyer, S. A., Wedlich-Söldner, R., Sixt, M., Tacke, S., Bähler, M., & Hanley, P. J. (2017). Multiple roles of filopodial dynamics in particle capture and phagocytosis and phenotypes of Cdc42 and Myo10 deletion. The Journal of Biological Chemistry, 292(17), 7258–7273. https://doi.org/10.1074/jbc.M116.766923

Ji, H., Wang, B., Shen, Y., Labib, D., Lei, J., Chen, X., Sapar, M., Boulanger, A., Dura, J.-M., & Han, C. (2023). The Drosophila chemokine–like Orion bridges phosphatidylserine and Draper in phagocytosis of neurons. Proceedings of the National Academy of Sciences, 120(24), e2303392120. https://doi.org/10.1073/pnas.2303392120

Kurant, E., Axelrod, S., Leaman, D., & Gaul, U. (2008). Six-Microns-Under Acts Upstream of Draper in the Glial Phagocytosis of Apoptotic Neurons. Cell, 133(3), 498–509. https://doi.org/10.1016/j.cell.2008.02.052

Lee, W. L., Mason, D., Schreiber, A. D., & Grinstein, S. (2007). Quantitative Analysis of Membrane Remodeling at the Phagocytic Cup. Molecular Biology of the Cell, 18(8), 2883–2892. https://doi.org/10.1091/mbc.E06-05-0450

Lillico, D. M. E., Pemberton, J. G., & Stafford, J. L. (2018). Selective Regulation of Cytoskeletal Dynamics and Filopodia Formation by Teleost Leukocyte Immune-Type Receptors Differentially Contributes to Target Capture During the Phagocytic Process. Frontiers in Immunology, 9. https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.01144

Masters, T. A., Pontes, B., Viasnoff, V., Li, Y., & Gauthier, N. C. (2013). Plasma membrane tension orchestrates membrane trafficking, cytoskeletal remodeling, and biochemical signaling during phagocytosis. Proceedings of the National Academy of Sciences, 110(29), 11875–11880. https://doi.org/10.1073/pnas.1301766110

Meehan, T. L., Joudi, T. F., Timmons, A. K., Taylor, J. D., Habib, C. S., Peterson, J. S., Emmanuel, S., Franc, N. C., & McCall, K. (2016). Components of the Engulfment Machinery Have Distinct Roles in Corpse Processing. PLOS ONE, 11(6), e0158217. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0158217

Melcarne, C., Ramond, E., Dudzic, J., Bretscher, A. J., Kurucz, É., Andó, I., & Lemaitre, B. (2019). Two Nimrod receptors, NimC1 and Eater, synergistically contribute to bacterial phagocytosis in Drosophila melanogaster. The FEBS Journal, 286(14), 2670–2691. https://doi.org/10.1111/febs.14857

Petrignani, B., Rommelaere, S., Hakim-Mishnaevski, K., Masson, F., Ramond, E., Hilu-Dadia, R., Poidevin, M., Kondo, S., Kurant, E., & Lemaitre, B. (2021). A secreted factor NimrodB4 promotes the elimination of apoptotic corpses by phagocytes in Drosophila. EMBO Reports, 22(9), e52262. https://doi.org/10.15252/embr.202052262

Roddie, H. G., Armitage, E. L., Coates, J. A., Johnston, S. A., & Evans, I. R. (2019). Simu-dependent clearance of dying cells regulates macrophage function and inflammation resolution. PLoS Biology, 17(5), e2006741. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.2006741

Serizier, S. B., & McCall, K. (2017). Scrambled Eggs: Apoptotic Cell Clearance by Non-Professional Phagocytes in the Drosophila Ovary. Frontiers in Immunology, 8, 1642. https://doi.org/10.3389/fimmu.2017.01642

Serizier, S. B., Peterson, J. S., & McCall, K. (2022). Non-autonomous cell death induced by the Draper phagocytosis receptor requires signaling through the JNK and SRC pathways. Journal of Cell Science, 135(20), jcs250134. https://doi.org/10.1242/jcs.250134

Note de Synthèse : Audition de Najat Vallaud-Belkacem sur les Violences dans les Établissements Scolaires

Source : Extraits de l'audition de Najat Vallaud-Belkacem, ancienne ministre de l'Éducation Nationale, par la commission d'enquête parlementaire sur les violences dans les établissements scolaires.

Date de l'audition : 2025.

Objet : Analyse de la prise en compte des violences exercées par des adultes ayant autorité sur des enfants en milieu scolaire, identification des failles en matière de signalement, prise en charge des victimes et gestion des auteurs.

Principaux Thèmes Abordés :

• Gestion des cas de violence pendant son mandat (2014-2017) : Modalités de remontée des informations, création d'outils dédiés.

• Le logiciel "Fait Établissement" : Création, périmètre (public vs privé sous contrat), limites et évolution envisagée.

• Relations et contrôles des établissements privés sous contrat : Nature des contrôles existants, débat sur l'élargissement du périmètre de contrôle de l'État.
• L'affaire de Villefontaine et la loi de 2016 : Le dysfonctionnement de la transmission d'informations entre la justice et l'Éducation Nationale, la réponse législative mise en place.
• Vérification des casiers judiciaires des personnels : Le travail inédit entrepris sous son ministère pour les personnels publics et privés, sa poursuite.
• La libération de la parole des victimes : Fragilité de ce processus et nécessité de mesures pérennes.
• Le rôle du SGEC (Secrétariat Général de l'Enseignement Catholique) : Interactions avec le ministère, influence.
• Formation et bien-être des personnels de l'éducation nationale : Leur importance pour la détection et le signalement des violences

Idées et Faits les Plus Importants :

• Prise de conscience et émoi : L'ancienne ministre exprime son "émotion et [sa] solidarité aux victimes de Betharam et des autres établissements privés où la parole s'est récemment libérée", soulignant l'aspect "fléau systémique" des violences.
• Mécanismes de remontée d'informations existants et améliorations :Pendant son mandat, son cabinet recevait les remontées de "faits graves" des directeurs de cabinet des recteurs.
• Des courriers de particuliers (parfois de proches des auteurs) étaient également reçus.
• Le bien-être des élèves était une priorité de son mandat. Des circulaires et des réunions avec les recteurs insistaient sur la remontée de tous les faits.
• Création du logiciel "Fait Établissement" : Ce fut une réponse à une "lacune" constatée, l'absence d'un "logiciel adapté pour que ces effets puisse être remonté établissement par établissement". Cet outil, toujours en fonction, permet de remonter les faits graves, de compiler des typologies de violence anonymisées pour la prévention, et de demander de l'appui.
• Le périmètre du logiciel "Fait Établissement" et les établissements privés sous contrat :Lors de sa création, l'outil s'adressait "à tous les établissements publics comme privés".
• Cependant, la distinction réside dans la capacité de l'État à imposer son utilisation. Ce qui relève de la "vie scolaire" dans les établissements privés sous contrat est lié à leur "caractère propre", limitant l'action des pouvoirs publics. L'ancienne ministre est favorable à un changement de législation pour y remédier.
• Elle note que "souvent vous allez avoir des établissements privés qui vont préférer mettre en place des dispositifs maison", lesquels "ne sont pas propices à la libération de la parole des élèves".
• L'intégration des établissements privés sous contrat au logiciel n'était donc pas obligatoire à l'époque, même si certains l'utilisaient ("certains établissements privés sous contrat je ne suis pas en train de dire qu'aucun d'eux ne le fait").
• La ministre actuelle a annoncé vouloir élargir le périmètre via un décret, ce que l'ancienne ministre approuve.
• Contrôle des établissements privés :Elle rappelle que les établissements privés sous contrat sont soumis à trois types de contrôle selon le code de l'éducation : "un contrôle pédagogique, un contrôle budgétaire et un contrôle administratif".
• "Hors de ces trois types de contrôle aujourd'hui dans les textes il n'existe pas de possibilité pour les pouvoirs publics de vérifier encore une fois que sur les questions de lutte contre le harcèlement de lutte contre les violences faites aux enfants... et bien des mesures soient prises ou respectées". Elle estime qu'il faut "changer la loi dans ce sens-là".
• Elle reconnaît que le contrôle des établissements privés sous contrat "semble inexistant" pendant son mandat, comme il l'était avant et après.
• Elle regrette de ne pas avoir eu le temps d'aller plus loin après les travaux menés sur les établissements hors contrat (référentiel, formation d'inspecteurs), dont la logique aurait dû s'étendre au sous-contrat.
• L'affaire de Villefontaine (2015) et la loi de 2016 :Cette affaire (un enseignant condamné en 2008 pour détention d'images pédopornographiques qui continuait d'enseigner) a révélé un "manque de connaissance au sein de l'éducation nationale de condamnation passée d'un enseignant".
• "Ce qui est extrêmement grave à ce moment-là" est que l'Éducation Nationale n'avait pas eu connaissance de cette condamnation, malgré des circulaires antérieures demandant la transmission par le parquet.
• L'enquête conjointe IGENR/IGSJ a constaté que la transmission était "totalement hasardeuse".
• La loi de 2016 : L'objectif était de "corriger" cette situation en obligeant le parquet à transmettre l'information de la mise en examen. La loi a instauré un "cadre juridique précis" pour "sécuriser les magistrats" et "créer un cadre applicable pour tous".
• Un équilibre a été recherché entre "protection des enfants" et "respect de la présomption d'innocence et de la vie privée des personnes mises en cause".
• La transmission avant condamnation devait être entourée de garanties (appréciation de l'autorité judiciaire, limitation des infractions, support écrit, confidentialité, information de la personne concernée, information sur l'issue définitive, effacement si non-culpabilité).
• Elle estime que l'absence de cadre légal avant 2016 "bridait le plus souvent les magistrats en question et que par peur d'être mis en cause les parquets se dispensaient d'informer".
• Concernant la critique selon laquelle la loi de 2016 aurait pu réduire le champ d'action du procureur (en limitant l'information au stade de l'enquête/information judiciaire et non de la garde à vue), elle maintient que la loi a "posé un cadre" et que l'équilibre trouvé était "bienvenu sur ce point". Elle est toutefois "à l'écoute" d'une possible évolution si cela ressortait des consultations, mais insiste sur la nécessité d'un "cadre clair, unifié, précis connu de tous".
• Elle précise que ce cadre "autorisait bien l'ensemble des administrations publiques à contrôler le bulletin numéro 2 du casier judiciaire des agents en contact habituel avec des mineurs en cours de carrière", y compris dans les ministères de l'Agriculture et de la Défense, ainsi que le périscolaire.
• Vérification du stock de casiers judiciaires :Un travail "complètement inédit" a été entrepris : "la vérification des antécédents judiciaires de tous nos personnel non seulement pour l'avenir donc dans une logique de flux mais aussi sur le passé donc dans une logique de stock".
• 850 000 dossiers B2 et Fijaï ont été passés au crible à raison de 3000 dossiers par jour.
• Ce travail a conduit à "26 radiations et fin de contrat".
• Les enseignants du privé étaient "naturellement" concernés par cette vérification.
• L'ancienne ministre ne sait pas si ce travail sur le stock a été poursuivi après son départ en mai 2017.
• Elle explique que l'absence de transmission systématique par la justice (plutôt que de laisser la charge à l'Éducation Nationale) s'explique par "un manque de moyens considérable" de la justice française (greffiers, outils informatiques, etc.).
• Relations avec le SGEC :Il n'y avait pas de "dîner mensuel" ou de "proximité" ou "promiscuité" particulière avec le SGEC sous son mandat.
• Le SGEC était traité "comme tous les interlocuteurs de [son] ministère", reçu "régulièrement" pour évoquer les réformes ("programmes, réforme du collège, questions de mixité sociale, questions de valeur de la République").
• Sa position était que "l'enseignement privé ne devait pas être considéré comme extérieur aux missions de service public de l'éducation".
• Elle ne se souvient pas que le SGEC ait montré une "réticence" directe à l'égard du caractère obligatoire de "Fait Établissement" pour le privé, mais estime que le SGEC n'était pas forcément suivi par tous les établissements de son réseau.
• Les rencontres avec le SGEC n'avaient pas forcément d'ordre du jour ou de compte-rendu public systématique, comme pour les autres interlocuteurs, y compris les organisations syndicales.
• La libération de la parole et l'omerta :Elle n'a pas été "surprise" par la révélation des violences sexuelles sur mineurs (citant les travaux de la CIVIS et de la CIAS), mais par "l'ampleur la gravité la durée de ces faits et la silenciation le phénomène d'omerta total" concernant des établissements comme Betaram.
• Elle est frappée par la "fragilité" de la libération de la parole, rappelant que des plans de lutte contre la pédocriminalité existaient à la fin des années 90, mais qu'une "parenthèse s'est refermée" (mentionnant l'affaire Outreau et la remise en question de la parole des enfants).
• "Il faudrait cette fois-ci prendre les mesures qui s'imposent pour éviter que cette parenthèse de libération de la parole ne se referme trop vite".
• Elle insiste sur le fait que le problème n'est pas tant les "canaux" de signalement (comme le logiciel "Fait Établissement") que la "silenciation". Il faut installer une "culture de cette parole là".
• Elle reconnaît le problème du "cloisonnement entre les administrations" qui peut empêcher les informations de remonter au bon niveau.
• Rôle des personnels et de leur formation :Elle cite une enquête montrant une aggravation de la victimation chez les professionnels de l'éducation, suggérant que des "climats dégradés entre adultes" peuvent miner leur capacité à détecter, écouter et signaler.
• Elle insiste sur la nécessité de "que les personnels de l'éducation nationale soient bien traités pour se sentir bien dans leur mission" et d'être "bien formés sur toutes ces questions-là".
• Elle regrette la réduction de la "formation continue offerte aux enseignants", estimant que cela affecte leur capacité à "voir les signaux".

Points de Tension ou Zones de Débat :

• Le périmètre du logiciel "Fait Établissement" et son caractère obligatoire pour le privé sous contrat : Le débat sur les moyens légaux pour l'imposer, distincts de la simple recommandation.
• Les pouvoirs réels du SGEC : La question de son autorité sur les établissements de son réseau et l'absence de cadre formel et public pour les échanges avec le ministère.
• L'application de la loi de 2016 sur la transmission d'informations par la justice : La question de savoir si la formalisation a pu limiter le partage d'informations à des stades précoces (garde à vue), potentiellement au détriment de la protection immédiate des enfants.
• La poursuite de la vérification du stock de casiers judiciaires après 2017 : Une interrogation sur la continuité de cette mesure cruciale.
• La distinction entre libération de la parole et capacité d'écoute/détection : L'ancienne ministre met l'accent sur la culture de la parole, tandis que les rapporteurs soulignent la nécessité d'apprendre "à entendre à écouter à décrypter".

Conclusion Provisoire :

• L'audition de Najat Vallaud-Belkacem met en lumière les efforts entrepris sous son ministère pour améliorer la gestion des violences en milieu scolaire, notamment par la création d'outils de signalement (Fait Établissement) et un cadre légal pour la transmission d'informations judiciaires (Loi de 2016), suite à des dysfonctionnements graves révélés par des affaires comme celle de Villefontaine.

Elle souligne les limites rencontrées, en particulier concernant les établissements privés sous contrat où la capacité de l'État à imposer des mesures est restreinte par la législation actuelle.

L'ancienne ministre insiste également sur la fragilité de la libération de la parole des victimes et sur le rôle crucial de la formation et du bien-être des personnels pour la détection et le signalement des violences.

Des questions subsistent sur l'application effective et la poursuite de certaines mesures après son départ, ainsi que sur l'articulation entre les différents ministères et réseaux d'établissements.

Synthèse de la Réunion : Victimes d'Abus en Institutions Objet : Réunion de la commission d'enquête sur les abus en institution scolaire.

Date : 2025

Participants : Députés, représentants de collectifs de victimes (Betaram, Garaison, Filles du Bon Pasteur, anciens de Saint-Dominique de Neuilly, Village d'enfants de Riom, Saint-François Xavier), victimes individuelles.

Principaux Thèmes Abordés :

Cette réunion a été marquée par des témoignages bouleversants de victimes d'abus physiques, psychologiques et sexuels survenus au sein d'institutions éducatives, principalement privées catholiques, sur une période allant des années 1950 aux années 1990, avec des répercussions jusqu'à aujourd'hui.

Les thèmes centraux qui émergent sont :

• L'ampleur et la gravité des abus : Les témoignages révèlent une diversité d'actes de violence, allant des gifles considérées comme "éducatives" aux agressions sexuelles graves et aux viols.

• Plusieurs institutions sont spécifiquement nommées : Betaram,

• Cendrillon,
• Notre Dame du Sacré Cœur à Dax,
• Istaris,
• Saint-Dominique de Neuilly,
• le Village d'enfants de Riom,
• Saint-François Xavier,

• et d'autres établissements associés aux "Bons Pasteurs".

• L'omerta et le silence institutionnel et sociétal :

Un fil conducteur majeur est le silence qui a entouré ces abus pendant des décennies. Ce silence est attribué à plusieurs facteurs :

• La honte, la culpabilité et l'humiliation ressenties par les victimes, les démolissant pour la vie entière.

• La peur des représailles et des conséquences (expulsion, punitions).

• Le refus des familles de croire ou de réagir ("tout le monde savait" mais "tout le monde a laissé faire").

• La protection de la réputation de l'institution, perçue comme plus importante que le bien-être des enfants ("on lave notre linge sale en famille").

• La hiérarchie ecclésiastique et les autorités de contrôle qui étaient au courant mais n'ont pas agi.

• Le rôle des institutions et des autorités :Établissements concernés : Principalement des écoles privées, souvent catholiques, accueillant parfois des enfants placés par la justice (ordonnances de 1945 et 1958).

Certains établissements, comme Riomont, ont été décrits comme des "lieux de privation de liberté" ou des "bagnes pour enfants".

• Recrutement des personnels :

Le recrutement est dénoncé comme étant souvent basé sur le "copinage" et l'adhésion à des méthodes violentes (la "pédoplégie" ou pédagogie par les coups), plutôt que sur les qualifications pédagogiques. Des individus ayant commis des abus ont été mutés dans d'autres établissements, sans traçabilité ni signalement.

• Absence de contrôle et inspections inefficaces : Les témoins affirment qu'il n'y avait que très peu, voire pas de contrôles, ou que ceux-ci étaient annoncés à l'avance, permettant aux établissements de masquer la réalité. Les enfants n'étaient pas entendus lors des inspections.

• Responsabilité de l'État et des autorités locales :

L'inaction de l'État pendant des décennies, malgré les signalements potentiels (notamment via les fugues récupérées par les forces de l'ordre), est mise en cause.

Les alliances objectives entre les institutions locales (justice, mairie) et les établissements, ainsi que le financement public sans contrôle effectif, ont permis à ces systèmes de perdurer.

• Le rôle du diocèse et de l'Église :

La couverture des abus par la hiérarchie ecclésiastique est fortement suggérée. La nébuleuse entourant la tutelle de certains établissements, comme Riomont, rend difficile l'identification des responsables.

• Les conséquences à long terme sur les victimes :

Les abus ont eu des impacts dévastateurs sur la vie des victimes, provoquant des troubles psychologiques (anorexie mentale, manque de confiance en soi, troubles de l'attention, hyperactivité), des addictions (alcool, drogue), des suicides, des problèmes de santé physique (altération de l'audition, traces physiques des coups), et des difficultés relationnelles, notamment avec les femmes.

Les victimes portent encore les "stigmates physiques" de ces violences.

• Le combat pour la reconnaissance et la réparation : La création de collectifs de victimes est perçue comme un jour "fondateur" permettant la libération de la parole.

L'objectif est que "ça n'advienne plus jamais".

Les victimes demandent la reconnaissance des souffrances subies, des excuses publiques de la part de l'État et des institutions, et des mesures concrètes pour que ces abus ne se reproduisent pas.

Idées et Faits Importants :

• Définition des violences : Les victimes rejettent l'idée de différencier les "gifles" et les "abus sexuels", soulignant que l'acceptation des violences physiques ouvre la porte à l'ensemble d'un système d'abus.

• "lorsqu'on dit euh un coup, une gifle, finalement euh à l'époque c'était accepté. Derrière les coûts, il y avait des violences physiques. Derrière les violences physiques, il y avait très souvent des violences sexuelles. Et en fait, lorsqu'on accepte le début, on ferme les yeux sur l'ensemble d'un système."

• La "pédoplégie" : Concept mis en avant pour décrire la "pédagogie par les coups" pratiquée dans certains établissements, notamment Betaram.

• Mutations et "exfiltrations" des abuseurs : Il est souligné que les prêtres ou surveillants mis en cause n'étaient pas sanctionnés, mais déplacés vers d'autres établissements, propageant ainsi le danger.

• "Ah, il est pas d'Xe, on l'a déplacé dans un département à côté."

• "le prêtre qui m'a le prêtre qui m'a agressé, il a été exfiltré de Cendrillon à l'époque. Il s'est retrouvé curé à Biscaros et après curé de Biscaros, il s'est retrouvé directeur à Tartase."

• Fugues comme signalements implicites : Les fugues fréquentes dans certains établissements, connues des forces de l'ordre, auraient dû alerter les autorités.

• Absence de traçabilité : Le manque de suivi des personnels ayant commis des actes répréhensibles est pointé du doigt.

• Le rôle des familles : Si certaines familles ont soutenu leurs enfants, d'autres n'ont pas voulu voir ou ont minimisé les faits, parfois par peur ou par conviction religieuse.

• Les conséquences physiques : Les témoignages évoquent des problèmes de santé lourds (cancers, endométriose) qui pourraient être liés aux traumatismes subis.

• Le contraste avec l'école publique actuelle : Un signalement pour harcèlement dans une école publique a été pris en charge rapidement, contrastant avec l'inertie constatée dans les établissements privés à l'époque.

• Propositions pour l'avenir :Création d'un "office national de prévention et de contrôle des établissements scolaires" avec des contrôles inopinés, s'inspirant des modèles existants dans d'autres secteurs (Ehpad).

• Amélioration du système de signalement, potentiellement avec un statut de lanceur d'alerte pour les professionnels de l'éducation.

• Meilleur recrutement du personnel, avec des règles claires et un suivi.
• Possibilité pour les députés de visiter tous les "espaces de privation de liberté", incluant potentiellement les écoles.
• Accompagnement psychologique et aide dans les démarches judiciaires pour les victimes, en respectant leur consentement.
• Un discours public de la part des élus qui reconnaisse la gravité des faits et s'engage pour l'avenir.
• L'argent et le financement public : Il est fait mention d'un financement important reçu par certains établissements, comme les "Bons Pasteurs", sans que cela n'empêche les abus ni n'entraîne leur fermeture.
• "en 1950, excusez-moi, je suis en 1954 21 bons pasteurs ont reçu la maicle 54, la maque somme de 1 milliard de l'époque"

Recommandations ou Questions Émergentes pour la Commission :

• Comment mettre en place des contrôles réellement efficaces et inopinés dans tous les établissements accueillant des enfants, qu'ils soient publics, privés sous contrat ou hors contrat, associatifs ou sportifs ?

• Comment assurer l'écoute des enfants lors des inspections ?

• Comment améliorer la traçabilité des personnels ayant fait l'objet de signalements ou d'accusations ?

• Comment responsabiliser les institutions (Église, associations, pouvoirs publics) qui ont couvert ces abus ?

• Comment faciliter les démarches judiciaires pour les victimes, en tenant compte de la prescription et du consentement ?

• Comment reconnaître et prendre en charge les conséquences à long terme (physiques et psychologiques) des abus subis par les victimes ?

• Quel discours les élus doivent-ils porter pour accompagner les victimes et éviter de répéter les erreurs du passé ?

• Est-il nécessaire de réformer les procédures de signalement au sein de l'éducation nationale ?

• Faut-il explorer le rôle et les alliances des acteurs locaux dans la pérennisation de ces systèmes abusifs ?

Sentiment Général :

La réunion a été marquée par une forte émotion et une détermination des victimes à obtenir justice et à faire en sorte que ces drames ne se reproduisent plus.

Le courage des témoins a été unanimement salué par les députés.

Le sentiment d'un "tsunami" inévitable qui fera tomber les silences a été évoqué.

Il y a un espoir que cette commission d'enquête permette d'avancer et de réparer ce qui a été brisé.

Prochaines Étapes :

• Poursuite des travaux de la commission d'enquête pendant plusieurs mois.

• Analyse des témoignages pour reconstituer comment les signalements, lorsqu'ils étaient émis, étaient traités.

• Examen des mesures proposées par le gouvernement.

• Élaboration de recommandations pour l'avenir.

Author response:

The following is the authors’ response to the original reviews

We thank the public reviewers and editors for their insightful comments on the manuscript. We have made the following changes to address their concerns and think the resulting manuscript is stronger as a result. Specifically, we have 1) added RNA FISH data of specific STB-2 and STB-3 RNA markers to confirm their distribution changes between STBⁱⁿ and STB^out TOs, 2) removed language throughout the text that refer to STB-3 as a terminally differentiated nuclear subtype, and 3) generated CRISPR-mediated knock-outs of two genes identified by network analysis and validated their rolse in mediating STB nuclear subtype gene expression.

Reviewer #1 (Public review): 

Strengths: 

The study offers a comprehensive SC- and SN-based characterization of trophoblast organoid models, providing a thorough validation of these models against human placental tissues. By comparing the older STBⁱⁿ and newer STB^out models, the authors effectively demonstrate the improvements in the latter, particularly in the differentiation and gene expression profiles of STBs. This work serves as a critical resource for researchers, offering a clear delineation of the similarities and differences between TO-derived and primary STBs. The use of multiple advanced techniques, such as high-resolution sequencing and trajectory analysis, further enhances the study's contribution to the field. 

Thank you for your thoughtful review—we appreciate your recognition of our efforts to comprehensively validate trophoblast organoid models and highlight key advancements in STB differentiation and gene expression.

Weaknesses: 

While the study is robust, some areas could benefit from further clarification. 

(1) The importance of the TO model's orientation and its impact on outcomes could be emphasized more in the introduction. 

We agree that TO orientation may significantly influence STB nuclear subtype differentiation. As the STB is critical for both barrier formation and molecular transport in vivo, lack of exposure to the surrounding media in STBⁱⁿ TOs in vitro could compromise these functions and the associated environmental cues that influence STB nuclear differentiation. We have added text to the introduction to highlight this point (lines 117-120).

(2) The differences in cluster numbers/names between primary tissue and TO data need a clearer explanation, and consistent annotation could aid in comparison. 

Thank you for highlighting that the comparisions and cluster annotations need clarification. In Figure 1, we did not aim to directly compare CTB and STB nuclear subtypes between TOs and tissue. Each dataset was analyzed independently, with clusters determined separately and with different resolutions decided via a clustering algorithm (Zappia and Oshlack, 2018). For example, for the STB, this approach identified seven subtypes in tissue but only two in TOs, making direct comparison challenging. To address this challenge, we integrated the SN datasets from TOs and tissue in Figure 6. This integration allowed us to directly compare gene expression between the sample types and examine the proportions within each STB subtype. Similarly, in Figure 2, direct comparison of individual CTB or STB clusters across the separate datasets is challenging (Figures 2A-C) due to differences in clustering. To overcome this, we integrated the datasets to compare cluster gene expression and relative proportions (Figures 2D-E). Nonetheless, to address the reviewers concern we have added text to the results section to clarify that subclusters of CTB and STB between datasets should not be directly compared until the datasets are integrated in Figure 2D-E and Figure 6 (lines 166-167).

(3) The rationale for using SN sequencing over SC sequencing for TO evaluations should be clarified, especially regarding the potential underrepresentation of certain trophoblast subsets. 

This is an important point as the challenges of studying a giant syncytial cell are often underappreciated by researchers that study mononucleated cells. We have added text to the introduction to clarify why traditional single cell RNA sequencing techniques were inadequate to collect  and characterize the STB (lines 91-93).

(4) Additionally, more evidence could be provided to support the claims about STB differentiation in the STB^out model and to determine whether its differentiation trajectory is unique or simply more advanced than in STBⁱⁿ. 

Our original conclusion that STB^out nuclei are more terminally differentiated than STBⁱⁿ was based on two observations: (1) STB^out TOs exhibit increased expression of STB-specific pregnancy hormones and many classic STB marker genes and (2) STB^out nuclei show an enrichment of the STB-3 nuclear subtype, which appears at the end of the slingshot pseudotime trajectory. However, upon consideration of the reviewer comments, we agree that this evidence is not sufficient to definitively distinguish if STB^out nuclei are more advanced or follow a unique differentiation trajectory dependent on new environmental cues. Pseudotime analyses provided only a predictive framework for lineage tracing, and these predictions must be experimentally validated. Real-time tracking of STB nuclear subtypes in TOs would require a suite of genetic tools beyond the scope of this study. Therefore, to address the reviewers' concerns we have removed language suggesting that STB-3 is a terminally differentiated subtype or that STB^out nuclei are more differentiated than STBⁱⁿ nuclei throughout the text until the discussion. Therein we present both our original hypothesis (that STB nuclei are further differentiated in STB^out) and alternative explanations like changing trajectories due to local environmental cues (lines 619-625).

Reviewer #2 (Public review): 

Strengths: 

(1) The use of SN and SC RNA sequencing provides a detailed analysis of STB formation and differentiation. 

(2) The identification of distinct STB subtypes and novel gene markers such as RYBP offers new insights into STB development. 

Thank you for highlighting these strengths—we appreciate your recognition of our use of SN and SC RNA sequencing to analyze STB differentiation and the discovery of distinct STB subtypes and novel gene markers like RYBP.

Weaknesses: 

(1) Inconsistencies in data presentation. 

We address the individual comments of reviewer 2 later in this response.

(2) Questionable interpretation of lncRNA signals: The use of long non-coding RNA (lncRNA) signals as cell type-specific markers may represent sequencing noise rather than true markers. 

We appreciate the reviewer’s attention to detail in noticing the lncRNA signature seen in many STB nuclear subtypes. However, we disagree that these molecules simply represent sequencing noise. In fact, may studies have rigorously demonstrated that lncRNAs have both cell and tissue specific gene expression (e.g., Zhao et al 2022, Isakova et al 2021, Zheng et al 2020). Further, they have been shown to be useful markers of unique cell types during development (e.g., Morales-Vicente et al 2022, Zhou et al 2019, Kim et al 2015) and can enhance clustering interpretability in breast cancer (Malagoli et al 2024). Many lncRNAs have also been demonstrated to play a functional role in the human placenta, including H19, MEG3, and MEG8 (Adu-Gyamfi et al 2023) and differences are even seen in nuclear subtypes in trophoblast stem cells (Khan et al 2021). Therefore, we prefer to keep these lncRNA signatures included and let future researchers test their functional role.

To improve the study's validity and significance, it is crucial to address the inconsistencies and to provide additional evidence for the claims. Supplementing with immunofluorescence staining for validating the distribution of STB_in, STB_out, and EVT_enrich in the organoid models is recommended to strengthen the results and conclusions. 

Each general trophoblast cell type (CTB, STB, EVT) has been visualized by immunofluorescence by the Coyne laboratory in their initial papers characterizing the STBⁱⁿ, STB^out, and EVT^enrich models (Yang et al, 2022 and 2023). We agree that it is important to validate the STB nuclear subtypes found in our genomic study. However, one challenge in studying a syncytia is that immunofluorescence may not be a definitive method when the nuclei share a common cytoplasm. This is because protein products from mRNAs transcribed in one nucleus are translated in the cytoplasm and could diffuse beyond sites of transcription. Therefore, RNA fluorescence in situ hybridization (RNA-FISH) is instead needed. While a systematic characterization of the spatial distribution of the many marker genes found each subtype is outside the scope of this study, we include RNA-FISH of one STB-2 marker (PAPPA2) and one STB-3 marker (ADAMTS6) in Figure 3F-G and Supplemental Figure 3.3. This demonstrates there is an increase in STB-2 marker gene expression in STBⁱⁿ TOs and an increase in STB-3 marker gene expression in STB^out TOs. 

Reviewer #3 (Public review):  

The authors present outstanding progress toward their aim of identifying, "the underlying control of the syncytiotrophoblast". They identify the chromatin remodeler, RYBP, as well as other regulatory networks that they propose are critical to syncytiotrophoblast development. This study is limited in fully addressing the aim, however, as functional evidence for the contributions of the factors/pathways to syncytiotrophoblast cell development is needed. Future experimentation testing the hypotheses generated by this work will define the essentiality of the identified factors to syncytiotrophoblast development and function. 

We thank the reviewer for their thoughtful assessment, constructive feedback, and encouraging comments. We acknowledge that the initial manuscript primarily presented analyses suggesting correlations between RYBP and other factors identified in the gene network analysis and STB function. Understanding how gene networks in the STB are formed and regulated is a long-term goal that will require many experiments with collaborative efforts across multiple research groups.

Nonetheless, to address this concern we have knocked out two key genes, RYBP and AFF1, in TOs using CRISPR-Cas9-mediated gene targeting. Bulk RNA sequencing of STBⁱⁿ TOs from both wild-type (WT) and knockout strains revealed that deletion of either gene caused a statistically significant decrease in the expression of the pregnancy hormone human placental lactogen and an increase in the expression of several genes characteristic of the oxygen-sensing STB-2 subtype, including FLT-1, PAPPA2, SPON2, and SFXN3. These findings demonstrate that knocking out RYBP or AFF1 results in an increase in STB-2 marker gene expression and therefore play a role in inhibiting their expression in WT TOs (Figure 5D-E and supplemental Figure 5.2). We also note that this is the first application of CRISPR-mediated gene silencing in a TO model.

Future work will visualize the distribution of STB nuclear subtypes in these mutants and explore the mechanistic role of RYBP and AFF1 in STB nuclear subtype formation and maintenance. However, these investigations fall outside the scope of the current study.

Localization and validation of the identified factors within tissue and at the protein level will also provide further contextual evidence to address the hypotheses generated. 

We agree that visualizing STB nuclear subtype distribution is essential for testing the many hypotheses generated by our analysis. To address this, we have included RNA-FISH experiments for two STB subtype markers (PAPPA2 for STB-2 and ADAMTS6 for STB-3) in TOs. These experiments reveal an increase in PAPPA2 expression in STBⁱⁿ TOs and an increase in ADAMTS6 expression in STB^out TOs (Figure 3F-G and Supplemental Figure 3.3). Genomic studies serve as powerful hypothesis generators, and we look forward to future work—both our own and that of other researchers—to validate the markers and hypotheses presented from our analysis.

Recommendations for the authors: 

Reviewing Editor Comments: 

We strongly encourage the authors to further strengthen the study by addressing all reviewers' comments and recommendations, with particular attention to the following key aspects:

(1) Clarifying the uniqueness of the STB differentiation trajectory between STBⁱⁿ and STB^out, and determining whether STB^out represents a more advanced stage of differentiation compared to STBⁱⁿ. It is also important to specify which developmental stage of placental villi the STB^out and STBⁱⁿ are simulating. 

We have revised the manuscript to remove definitive language claiming that STB-3 represents a terminally differentiated subtype or that STB^out nuclei are more differentiated than STBⁱⁿ nuclei. Instead, we now present our hypothesis and alternative explanations in the discussion (lines 619-625), and emphasize the need for experimental validation of pseudotime predictions to test these hypotheses.

(2) Utilizing immunofluorescence to validate the distribution of cell types in the organoid models. 

The Coyne lab has previously performed immunofluorescence of CTB and STB markers in STBⁱⁿ and STB^out TOs (Yang et al 2023). The syncytial nature of STBs complicates immunofluorescence-based validation of the STB nuclear subtypes due translating proteins all sharing a single common cytoplasm and therefore being able to diffuse and mix. Instead, we performed RNA-FISH for two STB subtype markers (PAPPA2, STB-2 and ADAMTS6, STB-3), which showed subtype-specific nuclear enrichment in STBⁱⁿ and STB^out TOs, respectively (Figure 3F-G and Supplemental Figure 3.3).  

(3) Addressing concerns regarding the use of lncRNA as cell marker genes. Employing canonical markers alongside critical TFs involved in differentiation pathways to perform a more robust cell-type analysis and validation is recommended.  

As discussed in detail above, we maintain that lncRNAs are valuable markers, supported by their demonstrated roles in cell and tissue specificity and placental function. These signatures provide important insights and hypotheses for future research, and we have clarified this rationale in the revised manuscript.

Reviewer #1 (Recommendations for the authors): 

(1) The authors have presented an extensive SC- and SN-based characterization of their improved trophoblast TO model, including a comparison to human placental tissues and the previous TO iteration. In this way, the authors' work represents an invaluable resource for investigators by providing thorough validation of the TO model and a clear description of the similarities and differences between primary and TO-derived STBs. I would suggest that the authors reshape the study to further highlight and emphasize this aspect of the study. 

We thank the reviewer for their thoughtful recommendation and agree that our datasets will serve as an invaluable resource for comparing in vitro models to in vivo gene expression. However, extensive validation is required to make definitive conclusions about the extent to which these systems mirror one another and where they diverge. For this reason, in this manuscript, we have focused on characterizing STB subtypes to provide a foundational understanding of the model and this poorly characterized subtype.

(2) Introduction, Paragraph 3: What is the importance of orientation for the trophoblast TO model? The authors may consider removing some of the less important methodologic details from this paragraph and including more emphasis on why their TO model is an improvement. 

Text has been added to this paragraph to highlight the importance of outward facing STB orientation, which is essential to mirror the STB’s transport function in vitro (lines 118-120).

(3) Results, Figure 1: In addition to the primary placental tissue plots showing all cell populations, it may be useful to have side-by-side versions of similar plots showing only the trophoblast subsets, so that the primary and TO data could be more easily compared visually. 

This has been implemented and added to the Supplemental Figure 1.4.

(4) Results, Figure 1: In simple terms, what is the reason for ending up with different cluster numbers/names from the primary tissue and TO? Would it be possible to apply the same annotation to each (at least for trophoblast types) and thus allow direct comparison between the two? 

As described above, each dataset was separately analyzed and clusters determined with an algorithm to determine the optimal clustering resolution. Therefore, the number of clusters between each dataset cannot be directly compared until the SN TO and tissue datasets are integrated together in Figure 6. We have added text to the manuscript to make it clear that they should not be compared except for in bulk number until this point (230-232).

(5) Results, Figure 2: For subsequent evaluation of different in vitro TO conditions, did the authors use only SN sequencing because they wanted to focus on STB? Based on Figure 1, it seems some CTB subsets would be underrepresented if using only SN. Given that the authors look at both STB and CTB in their different TOs, is this an issue? 

The CTB clusters that showed the greatest divergence between SC and SN datasets were those associated with mitosis and the cell cycle, likely due to nuclear envelope breakdown interfering with capture by the 10x microfluidics pipeline. While cytoplasmic gene expression provides valuable insights into CTB function, our manuscript focuses on the STB starting from Figure 2. Since the STB is captured exclusively by the SN dataset, we concentrated on this approach to streamline our analysis.

(6) Results, Figure 3: What do the authors consider to be the primary contributing factors for why the STB subsets display differential gene expression between STBⁱⁿ and STB^out? Is this due primarily to the cultural conditions and/or a result of the differing spatial arrangement with CTBs? 

This is an intriguing question that is challenging to disentangle because the culture conditions are integral to flipping the orientation. The two primary factors that differ between STBⁱⁿ and STB^out TOs are the presence of extracellular matrix in STBⁱⁿ and direct exposure to the surrounding media in STB^out. We believe these environmental cues play a significant role in shaping the gene expression of STB subsets. Fully disentangling this relationship would require a method to alter the TO orientation without changing the culture conditions. While this is an exciting direction for future research, it falls outside the scope of the present study.

(7) Results, Figure 4: The authors' analysis indicates that the STB nuclei from the STB^out TO are likely "more differentiated" than those in STBⁱⁿ TO. Could the authors provide some qualitative or quantitative support for this? Is the STB^out differentiated phenotype closer to what would be observed in a fully formed placenta? 

As discussed earlier, we agree with the reviewers that this claim should be removed from the text outside of the discussion.

(8) Results, Figure 5: Based on the trajectory analysis, do the authors consider that the STB from STB^out TO are simply further along the differentiation pathway compared to those from STBⁱⁿ TO, or do the STB from STB^out TO follow a differentiation pathway that is intrinsically distinct from STBⁱⁿ TO? 

We think the idea of an intrinsically distinct pathway is a fascinating alternative hypothesis and have added it into the discussion. We do not find the pseudotime currently allows us to answer this question without additional experiments, so we have removed claims that the STB^out STB nuclei are further along the differentiation pathway.

(9) Results, Figure 6: A notable difference between the STB^out TO and the term tissue is that the CTB subsets are much more prevalent. Is this simply a scale difference, i.e. due to the size of the human placenta compared to the limited STB nuclei available in the STB^out TO? Or are there other contributing factors? 

The proportion of CTB to STB nuclei in our term tissue (9:1) aligns with expectations based on stereological estimates. We believe the relatively low number of CTB nuclei in our dataset is due to the need for a larger sample size to capture more of this less abundant cell type. Since the primary focus of this paper is on STB, and we analyzed over 4,000 STB nuclei, we do not view this as a limitation. However, future studies utilizing SN to investigate term tissue should account for the abundance of STB nuclei and plan their sampling carefully to ensure sufficient representation of CTB nuclei if this is a desired focus.

Reviewer #2 (Recommendations for the authors): 

(1) The color annotations for cell types in Figure 2 are inconsistent between the different panels, and the term "Prolif" in Figure 2E is not explained by the authors. 

We chose colors to enhance visibility on the UMAP. We do not wish readers to make direct comparisons between the different CTB or STB subtypes of the sample types until the datasets are integrated in Figure 2D. This is because an algorithm for the clustering resolution has been chosen independently for each dataset. Cluster proportions are better compared in the integrated datasets in Figure 2D. We have added text to the results section to make this clear to the reader (lines 166-167).

(2) In Figure 3 and Supplementary Figures 1.3, the authors frequently present long non-coding RNA (lncRNA) signals as cell type-specific markers in the bubble plots. These signals are likely sequencing noise and may not accurately represent true markers for those cell types. It is recommended to revise this interpretation. 

As referenced above, there are many examples of lncRNAs that have biological and pathological significance in the placenta (H19, Meg3, Meg8) and lncRNAs often have cell type specific expression that can enhance clustering. We prefer to keep these signatures included and let future researchers determine their biological significance.

(3) In Figure 3C, the authors performed pathway enrichment analysis on the STB subtypes after integrating STB_in and STB_out organoids. The enrichment of the "transport across the blood-brain barrier" pathway in the STB-3 subtype does not align with the current understanding of STB cell function. Please provide corresponding supporting evidence. Additionally, please verify whether the other functional pathways represent functions specific to the STB subtypes. 

Interestingly, many of the genes categorized under “transport across the blood-brain barrier” are transporters shared with “vascular transport.” These include genes involved in the transport of amino acids (SLC7A1, SLC38A1, SLC38A3, SLC7A8), molecules essential for lipid metabolism (SLC27A4, SLC44A1), and small molecule exchange (SLC4A4, SLC5A6). Given that the vasculature, the STB, and the blood-brain barrier all perform critical barrier functions, it is unsurprising that molecules associated with these GO terms are enriched in the STB-3 subtype, which expresses numerous transporter proteins. Since the transport of materials across the STB is a well-established function, we have not included additional supporting evidence but have clarified the genes associated with this GO term in the text (lines 392-394 and supplemental Table 9).

(4) The pseudotime heatmap in Figure 4B is not properly arranged and is inconsistent with the differentiation relationships shown in Figure 4A. It is recommended to revise this. 

We are uncertain which aspect of the heatmap in Figure 4A is perceived as inconsistent with Figure 4B. One distinction is that pseudotime in Figure 4A is normalized from 0 to 100 to fit the blue-to-yellow-to-red color scale, whereas in Figure 4B, the color scale is not normalized and the color bar ranging from white to red. This difference reflects our intent to simplify Figure 4B-C, as the abundance of color between cell types and gene expression changes required a streamlined representation to ensure the figure remained clear and easy to interpret. This is classically done in the field and consistent with the default code in the slingshot package.

(5) In Figures 4C and 4D, although RYBP is highly expressed in STB, it is difficult to support the conclusion that RYBP shows the most significant expression changes. It is recommended to provide additional evidence. 

The claim that RYBP exhibits the most significant expression changes was based on p-value ordering of genes associated with pseudotime via the associationTest function in slingshot and not with immunofluorescence data. The text has been revised to make this distinction clear (lines 390-393).

(6) In Figure 4E, staining for CTB marker genes is missing, and in Figure 4F, CYTO is difficult to use as a classical STB marker. It is recommended to use the CGBs antibody from Figure 4E as a STB marker for staining to provide evidence.  

We have revised the Figure 5B-C to use e-Cadherin as a CTB marker gene in TOs and CGB antibody as a marker of STB.

In tissue, however, obtaining a good STB marker that does not overlap with the RYBP antibody (rabbit) in term tissue is difficult as the STB downregulates hCG expression closer to term to initiate contractions. SDC1 is often used but only labels the plasma membrane so does not help in distinguishing the STB cytoplasm. We have added an image of cytokeratin, e-Cadherin, and the STB marker ENDOU to validate that our current approach with e-Cadherin and cytokeratin allows us to accurately distinguish between CTB and STB cells.

(7) The velocity results in Figure 5A do not align with the differentiation relationships between cells and contradict the pseudotime results presented in Figure 4 by the authors. 

The reviewer raises an interesting observation regarding the velocity map in Figure 5A, which appears to show a bifurcation into two STB subtypes. This observation aligns with similar findings reported in tissue by our colleagues (Wang et al., 2024). However, given the low number of CTB cells in our tissue dataset, we were cautious about making definitive conclusions about pseudotime without a larger sample size. Notably, the RNA velocity map closely resembles the pseudotime trajectory in TOs, with CTB transitioning into the CTB-pf subtype and subsequently into the STB. One potential explanation for discrepancies between tissue and TOs is the difference in nuclear age: nuclei in tissue can be up to nine months old, whereas those in TOs are only hours or days old. It is possible that the lineage in TOs could bifurcate if cultured for longer than 48 hours, but our current dataset captures only the early stages of the STB differentiation process. While exploring these hypotheses is fascinating, they are beyond the scope of this current study.  

Reviewer #3 (Recommendations for the authors): 

Amazing work - I greatly enjoyed reading the manuscript. Here are a few questions and suggestions for consideration: 

Evidence presented throughout the results sections hints that the organoids may represent an earlier stage of placental development compared to the term. Increased hCG gene expression is observed, but as noted expression is decreased in term STB. STB:CTB ratios are also higher at term compared to the first trimester, etc. It was difficult to conclude definitively based on how data is presented in Fig 6 and discussed. Maybe there is no clear answer. Perhaps the altered cell type ratios in the organoid models (e.g., few STB in EVT enrich conditions) impact recapitulation of the in vivo local microenvironment signaling. As such, can the authors speculate on whether cell ratios could be strategically leveraged to model different gestational time points? 

Along these same lines, syncytiotrophoblast in early implantation (before proper villi development) is often described as invasive and later at the tertiary villi stage defined by hormone production, barrier function, and nutrient/gas exchange. Do the authors think the different STB subtypes captured in the organoid models represent different stages/functions of syncytiotrophoblast in placental development? 

Minor Comments 

(1) Please clarify what the third number represents in the STB:CTB ratio (e.g., 1:3:1 and 2:5:1). EVT? 

The first number is a decimal point and not a colon (ie 1.3 and 2.5). Therefore these numbers are to be read as the STB:CTB ratio is 1.3 to 1 or 2.5 to 1.

(2) Could consider co-localizing RYBP in term tissue with a syncytio-specific marker like CGB used for organoids (Fig 4F). 

We addressed this concern in comment 6 to reviewer 2.

(3) Recommend defining colors-which colors represent which module in Figure 5C in the legend and main body text. I see the labels surrounding the heatmap in 5B, but defining colors in text (e.g. cyan, magenta, etc.) would be helpful. Do the gray circles represent targets that don't belong to a specific module? Are the bolded factor names based on a certain statistical cutoff/defining criteria or were they manually selected? 

The text of both the results and figure legends has been revised to clarify these points.

(4) Data Availability: It would be helpful to provide supplemental table files for analyses (e.g., 5C to list the overlapping relationships in TGs for each TF/CR (5C) and 3E/6F to list DEG genes in comparisons). 

Supplemental files for each analysis have been added (Supplemental Table 8-14). In addition, the raw and processed data is available on GEO and we have created an interactive Shiny App so people without coding experience can interact with each dataset (lines 917-919).

(5) “...and found that each sample expressed these markers (Figure 6D), suggesting..." Consider clarifying "these". 

Text has been added to refer to a few of these marker genes within the text (line 540).

Citations

(1) Zappia L, Oshlack A. Clustering trees: a visualization for evaluating clusterings at multiple resolutions. GigaScience. 2018;7(7):giy083. PMCID: PMC6057528

(2) Zhou J, Xu J, Zhang L, Liu S, Ma Y, Wen X, Hao J, Li Z, Ni Y, Li X, Zhou F, Li Q, Wang F, Wang X, Si Y, Zhang P, Liu C, Bartolomei M, Tang F, Liu B, Yu J, Lan Y. Combined Single-Cell Profiling of lncRNAs and Functional Screening Reveals that H19 Is Pivotal for Embryonic Hematopoietic Stem Cell Development. Cell Stem Cell. 2019;24(2):285-298.e5. PMID: 30639035

(3) Malagoli G, Valle F, Barillot E, Caselle M, Martignetti L. Identification of Interpretable Clusters and Associated Signatures in Breast Cancer Single-Cell Data: A Topic Modeling Approach. Cancers. 2024;16(7):1350. PMCID: PMC11011054

(4) Adu-Gyamfi EA, Cheeran EA, Salamah J, Enabulele DB, Tahir A, Lee BK. Long non-coding RNAs: a summary of their roles in placenta development and pathology†. Biol Reprod. 2023;110(3):431–449. PMID: 38134961

(5) Zheng M, Hu Y, Gou R, Nie X, Li X, Liu J, Lin B. Identification three LncRNA prognostic signature of ovarian cancer based on genome-wide copy number variation. Biomed Pharmacother. 2020;124:109810. PMID: 32000042

(6) Khan T, Seetharam AS, Zhou J, Bivens NJ, Schust DJ, Ezashi T, Tuteja G, Roberts RM. Single Nucleus RNA Sequence (snRNAseq) Analysis of the Spectrum of Trophoblast Lineages Generated From Human Pluripotent Stem Cells in vitro. Front Cell Dev Biol. 2021;9:695248. PMCID: PMC8334858

(7) Isakova A, Neff N, Quake SR. Single-cell quantification of a broad RNA spectrum reveals unique noncoding patterns associated with cell types and states. Proc Natl Acad Sci United States Am. 2021;118(51):e2113568118. PMCID: PMC8713755

(8) Morales-Vicente DA, Zhao L, Silveira GO, Tahira AC, Amaral MS, Collins JJ, Verjovski-Almeida S. Singlecell RNA-seq analyses show that long non-coding RNAs are conspicuously expressed in Schistosoma mansoni gamete and tegument progenitor cell populations. Front Genet. 2022;13:924877. PMCID: PMC9531161

(9) Kim DH, Marinov GK, Pepke S, Singer ZS, He P, Williams B, Schroth GP, Elowitz MB, Wold BJ. Single-Cell

Transcriptome Analysis Reveals Dynamic Changes in lncRNA Expression during Reprogramming. Cell Stem Cell. 2015;16(1):88–101. PMCID: PMC4291542

(10) Yang L, Liang P, Yang H, Coyne CB. Trophoblast organoids with physiological polarity model placental structure and function. bioRxiv. 2023;2023.01.12.523752. PMCID: PMC9882188

Synthèse de l'audition d'associations de défense des enfants victimes de violences

Contexte de l'audition: Cette audition, diffusée en direct et faisant l'objet d'un compte-rendu écrit, s'inscrit dans le cadre d'une commission d'enquête parlementaire initiée en raison d'affaires récentes de violence contre les enfants, notamment l'affaire Bétharram et l'affaire du village d'enfants de Riyaumont.

L'objectif principal de la commission est de comprendre les actions menées par les associations pour protéger les enfants dans les établissements scolaires (où ils passent une part importante de leur temps, surtout en internat) et de formuler des préconisations pour renforcer le contrôle de l'État sur ces établissements afin de prévenir de telles violences.

L'audition a lieu en présence de représentant(e)s de * l'association l'Enfant Bleu, * de l'association Les Maltraitances Moi J'en Parle, et * de l'association Mouve Enfant.

Les personnes auditionnées ont prêté serment de dire la vérité.

Principaux Thèmes et Idées Clés:

**1. La nature des violences traitées par les associations : **

• Les associations auditionnées traitent une large palette de violences contre les enfants : physiques, psychologiques, sexuelles, négligence grave, ainsi que le harcèlement et le cyberharcèlement.

• L'Enfant Bleu signale que 90% des maltraitances qu'ils traitent sont intrafamiliales, bien qu'ils rencontrent également des cas en milieu scolaire.

• Les Maltraitances Moi J'en Parle traite principalement des violences intrafamiliales, incluant les violences éducatives ordinaires, mais aussi le harcèlement et le cyberharcèlement, et intervient dans la formation des adultes.

• Mouve Enfant traite également tous types de violences, avec une particularité forte sur les violences pédocriminelles, notamment celles commises au sein de l'Église, étant un mouvement de survivant(e)s.

2. Les violences en milieu scolaire et la difficulté à faire remonter l'information :

• Bien que les violences intrafamiliales soient majoritaires, les associations rencontrent des cas de violences commises dans les établissements scolaires, soit par des adultes sur des enfants, soit entre enfants (y compris des agressions sexuelles).

• Un point crucial soulevé est la "loi du silence" et la difficulté de faire sortir la parole du milieu scolaire et de l'Éducation Nationale.

Il existe des niveaux de frein à la remontée de l'information : * Au sein de l'école, où l'équipe peut avoir du mal à imaginer des problèmes ou à ne pas vouloir briser une alliance avec les parents ou la confiance en leurs collègues.

• À un niveau hiérarchique supérieur, où l'information ne sort pas de l'Éducation Nationale et ne donne pas lieu à une information préoccupante ou un signalement, comme dans l'affaire de la petite Amandine.

• La question du périscolaire est également soulevée, soulignant une déresponsabilisation possible entre l'école et la mairie.

Les associations obtiennent des informations sur les violences en milieu scolaire de diverses manières :

• Via des appels de parents ou d'anciennes victimes.

• Par des appels de professionnels de l'Éducation Nationale qui ne savent pas comment réagir ou ne sont pas soutenus par leur hiérarchie.

• Lors de leurs interventions de prévention dans les écoles, où les enfants font souvent des révélations.

L'Enfant Bleu signale un nombre important de révélations suite à leurs interventions.

3. La prévention, la formation et la culture de la protection :

• La prévention est considérée comme essentielle. Les enfants ne connaissent souvent pas les différentes formes de violence ni les interdits, ce qui rend difficile pour eux de parler. Informer les enfants sur les violences et leurs droits est une priorité nationale.

• La formation de la communauté éducative (enseignants et personnel périscolaire) est jugée indispensable.

Beaucoup d'enseignants ne sont pas formés pour repérer, aborder le sujet avec les enfants, ou savent à peine comment faire une information préoccupante (IP).

La formation leur donne des outils et les renforce.

• Il est nécessaire de changer la culture actuelle, qui est davantage axée sur le déni, l'omerta et le "pas de vague", pour une culture de la protection où l'enfant est considéré comme une personne à part entière dont la parole doit être entendue immédiatement et suivie d'action.

• Il est important d'informer les parents également sur les droits de l'enfant pour éviter les incompréhensions et les conflits.

4. Le rôle et les difficultés des associations :

• Les associations interviennent dans la prévention et le repérage des enfants victimes de violence, aidant un nombre significatif d'enfants.

• Elles sont confrontées à la difficulté d'obtenir l'agrément de l'Éducation Nationale, ce qui peut freiner leurs interventions malgré la demande croissante.

L'agrément est perçu comme une réassurance mais pas comme la seule condition d'intervention, les chefs d'établissement ayant une grande autonomie de décision.

• Il semble y avoir une iniquité territoriale dans les possibilités d'intervention des associations.

• Un point particulièrement critiqué est la règle, spécifiée par l'Éducation Nationale pour certaines associations, selon laquelle ce n'est pas aux associations de "recueillir" la parole de l'enfant, mais de la transmettre aux services sociaux.

Cette distinction entre "accueil" et "recueil" est jugée absurde et contre-productive.

• Les associations ont le sentiment de faire le travail que l'État devrait faire et manquent cruellement de moyens humains et financiers.

Elles subissent des coupes budgétaires malgré l'urgence de la situation.

5. Le constat d'un dysfonctionnement systémique et du manque de volonté politique :

• Les intervenants, notamment Arnaud Galet de Mouve Enfant, expriment une amertume face au manque d'action malgré les nombreux rapports (rapport Sauvé, rapports de la CIVISE) qui ont documenté l'ampleur de la pédocriminalité et des violences et formulé des préconisations.

• Il y a un dysfonctionnement hiérarchique avéré, notamment dans l'enseignement privé, où le secrétaire général de l'enseignement catholique lui-même reconnaît ne pas savoir ce qui se passe dans les établissements.

• Le système de signalement et de traitement des informations préoccupantes (IP) est jugé inefficace.

Les délais sont trop longs (jusqu'à 18 mois ou 2 ans pour les évaluations) et il n'y a pas de retour aux professionnels qui ont fait le signalement, ce qui nuit à la confiance.

• Les intervenants dénoncent une absence de volonté politique forte pour mettre fin aux violences contre les enfants, malgré les chiffres alarmants (160 000 enfants victimes de violence sexuelle chaque année, un enfant meurt tous les 5 jours).

• La commission d'enquête est vue avec un certain scepticisme au vu des expériences passées et du manque de suivi des rapports précédents.

• L'absence de réponse du gouvernement français aux sollicitations du Comité des Droits de l'Enfant de l'ONU concernant les violences sexuelles dans l'Église est citée comme un exemple du manque d'action étatique.

• L'idée d'un fichier centralisé des informations préoccupantes est soulevée comme un moyen essentiel de suivi, citant l'exemple tragique de la petite Marina.

• La création d'un ministère de l'enfance et des familles est préconisée.

6. Réflexions sur les programmes d'éducation à la vie affective, relationnelle et sexuelle (EVARS):

• L'arrivée du programme EVARS est vue comme un levier potentiel, mais les associations sont dubitatifs quant au niveau de préparation du système scolaire, notamment le manque de formation des enseignants.

• Les associations se sentent légitimes pour déployer ces programmes, mais sont confrontées à des réticences (culturelles et politiques) et à la difficulté d'obtenir l'agrément, même lorsqu'elles en ont un.

• La formation des enseignants uniquement en ligne (type MOOC) n'est pas jugée suffisante ; un contact direct et des cas pratiques sont nécessaires.

7. La question de la prescription:

Une des intervenantes a exprimé clairement sa position en faveur de l'imprescriptibilité des crimes sexuels sur les enfants.

Citations Importantes:

• Arnaud Galet (Mouve Enfant): "je me suis dit quand même un peu mon étonnement d'être ici pour différentes raisons bien sûr j'entends qu'il y a la question de l'affaire Betaram [...] mais nous on est en tête je dis nous en tant que victime de pédocriminalité dans l'église et c'est important pour moi de le dire d'emblé vous saz j'ai fait partie des 22 signalements il y a eu 330000 victimes de pédo criminalité dans l'église en 70 ans d'accord c'est ce que nous a appris le rapport sauvé"

• Arnaud Galet (Mouve Enfant): "quand on dit qu'il y a eu 30 % qu'a fait la ministre de l'éducation nationale le ministre par de l'éducation nationale de l'époque à savoir Jean-Michel Blanquer rien rien qu'a fait Éric Duporetti ministre de la justice on aurait pu imaginer comme en Belgique une justice d'exception rien c'est ça c'est ça notre sujet fondamental quand même qu'il s'agit d'amener ici"

• Arnaud Galet (Mouve Enfant): "il dit bien qu'il y a pas de lien hiérarchique donc ça répond un peu à la question je veux dire on fait ce qu'on veut en fait d'autant plus dans l'établissement privé"

• Arnaud Galet (Mouve Enfant): "on s'épuise en fait il faut le dire les choses de manière très claire [...] mais bon sang qu'est-ce qu'il nous faut quand même tout est déjà écrit"

• Arnaud Galet (Mouve Enfant): "l'état de droit est en faillite sur cette questionlà faut regarder les chiffres 160000 enfants victimes chaque année de violence sexuelle trois enfants par classe un enfant meurt tous les 5 jours sur les coups de ses parents enfin je veux dire on est où ici"

• Arnaud Galet (Mouve Enfant): "je me pose la question entre les affaires qu'on a aujourd'hui Betaram le squarnec au niveau de l'hôpital extin à quel moment est-ce qu'on a une obligation de résultat quand on accueille des enfants dans ce pays"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "les enfants ne connaissent pas les violences dans leur ensemble à part le harcèlement en tout cas ils ne savent pas ce que referment le mot violence donc déjà c'est important au niveau de la prévention et aussi ne connaissent pas les interdits des violences"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "la majeure partie des enseignants ne sont pas formé à cette thématique ne savent pas repérer un enfant ne savent même pas aborder le sujet avec eux ont peur"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "il faut que l'éducation nationale s'ouvre davantage aussi je veux dire j'ai une grande pensée pour les victimes de Betara mais toutes les victimes d'hier et d'aujourd'hui parce que en fait dans ces histoires on a l'impression qu'on voit des traqus d'enfants finalement qui sont victimes de violence de barbarie atroce"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "pas faire de bruit pas de vague donc déjà quand ça se passe sur les enfants au niveau intrafamilial c'est compliqué mais quand ça se passe dans les établissements je pense que ça allait encore plus pour que ça sorte ou en tout cas agir"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "il y a aucun retour sur les IP et les signalements ça crée un vrai problème de confiance aussi"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "globalement l'enfant n'est pas vendeur l'enfant ne vote pas l'enfant ne manifeste pas l'enfant se tait donc quand on veut faire des choses pour les enfants déjà il faut connaître les enfants se rendre compte que ce sont des personnes à part entière avec des droits"

• Nathalie Kouni (Les Maltraitances Moi J'en Parle): "on n'est pas dans une culture de la protection on est toujours dans une culture de la violence bien sûr on est dans la culture du déni de l'omerta du pas faire de bruit donc il faut changer cette culture"

• Laura Morin (l'Enfant Bleu): "nous faisons le travail que l'État devrait faire"

• Laura Morin (l'Enfant Bleu): "il est anormal que lorsqu'un enfant change d'école s'il y a eu un signalement sur cet enfant que la l'école suc après la succès ouai j'ai le même problème que vous madame j'arrive pas à dire le drit que l'école suivante voilà que l'école suivante ne soit pas au courant qu'il y ait eu un signalement sur cette petite enfant cet enfant"

• Aïda Adisadé (Ancienne cheffe de bureau à la DGESco): "il y a parfois des décisions politiques qui entourent qui qui régissent la délivrance de l'agrément oui ou non sur les questions d'éducation la sexualité"

• Aïda Adisadé (Ancienne cheffe de bureau à la DGESco): "pour éviter de nouveau d'avoir à affronter des des appels de parents ou des remontées vous voyez de de parents énervés on préfère éviter de donner trop opinion sur eux à des associations qui vont venir parler de sexualité aux enfants"

• Aïda Adisadé (Ancienne cheffe de bureau à la DGESco): "le recueil ou l'accueil de la parole de l'enfant on est un peu dans du délire l'enfant il ne décide pas quand est-ce qu'il va parler à un moment donné il parle et à ce moment-là il faut être prêt il faut être prêt pour l'écouter et il faut être prêt pour embrayer pour que sa parole débouge sur quelque chose"

• Aïda Adisadé (Ancienne cheffe de bureau à la DGESco): "est-ce qu'il y a une culture du tabou d'une culture de l'omerta dans l'éducation et sur quoi elle repose c'est de ça dont on parle c'est ça qui a permis que Betaram continue pendant de temps d'années"

Propositions Clés des Associations:

• Généraliser l'information auprès des enfants partout où ils se trouvent.

• Développer la formation de la communauté éducative (enseignants et personnel périscolaire), incluant une formation initiale et continue obligatoire.

• Allouer des ressources humaines et financières conséquentes pour la protection de l'enfance, notamment en créant des référents violence dans les écoles.

• Dimensionner la chaîne de protection à la hauteur de l'enjeu, avec une prise en charge immédiate et une aide psychologique et juridique pour chaque enfant.

• Réduire et respecter les délais d'évaluation des informations préoccupantes (IP) et des signalements, et assurer un retour systématique aux professionnels qui les ont effectués.

• Sensibiliser les parents par tous les moyens.

• Mettre en place un plan d'action piloté au plus haut niveau de l'État, incluant la création d'un ministère de l'enfance et des familles.

• Mettre en place un fichier centralisé des informations préoccupantes.

• Rendre les crimes sexuels sur les enfants imprescriptibles.

Questions en Suspens et Points à Approfondir pour la Commission:

• Obtenir les comptes-rendus des Conseils Nationaux et Académiques d'Agrément (CNAP) pour comprendre les critères de refus et les décisions politiques.

• Clarifier la distinction entre "accueil" et "recueil" de la parole de l'enfant et les protocoles en place.

• Examiner en détail le plan "Brisons le silence, agissons ensemble" et évaluer sa pertinence et son efficacité par rapport aux préconisations des associations.

• Analyser les freins hiérarchiques et culturels au sein de l'Éducation Nationale qui empêchent la remontée de l'information et l'action.

• Évaluer la possibilité de mettre en place un système d'obligation de résultat pour la protection des enfants dans les établissements accueillant des mineurs.

• Étudier la situation particulière des outre-mer en matière de violences faites aux enfants.

• Approfondir l'analyse du manque de moyens alloués à l'aide sociale à l'enfance.

• Cette audition met en lumière l'urgence de la situation et le sentiment d'impuissance et de frustration des associations face à l'ampleur des violences et au manque d'action politique malgré des diagnostics et des préconisations clairs.

Elle souligne la nécessité d'un changement culturel profond et d'un engagement fort de l'État pour assurer une protection réelle et efficace des enfants en France.

Author response:

General Statements

In our manuscript, we demonstrate for the first time that RNA Polymerase I (Pol I) can prematurely release nascent transcripts at the 5' end of ribosomal DNA transcription units in vivo. This achievement was made possible by comparing wild-type Pol I with a mutant form of Pol I, hereafter called SuperPol previously isolated in our lab (Darrière at al., 2019). By combining in vivo analysis of rRNA synthesis (using pulse-labelling of nascent transcript and cross-linking of nascent transcript - CRAC) with in vitro analysis, we could show that Superpol reduced premature transcript release due to altered elongation dynamics and reduced RNA cleavage activity. Such premature release could reflect regulatory mechanisms controlling rRNA synthesis. Importantly, This increased processivity of SuperPol is correlated with resistance with BMH-21, a novel anticancer drugs inhibiting Pol I, showing the relevance of targeting Pol I during transcriptional pauses to kill cancer cells. This work offers critical insights into Pol I dynamics, rRNA transcription regulation, and implications for cancer therapeutics.

We sincerely thank the three reviewers for their insightful comments and recognition of the strengths and weaknesses of our study. Their acknowledgment of our rigorous methodology, the relevance of our findings on rRNA transcription regulation, and the significant enzymatic properties of the SuperPol mutant is highly appreciated. We are particularly grateful for their appreciation of the potential scientific impact of this work. Additionally, we value the reviewer’s suggestion that this article could address a broad scientific community, including in transcription biology and cancer therapy research. These encouraging remarks motivate us to refine and expand upon our findings further.

All three reviewers acknowledged the increased processivity of SuperPol compared to its wildtype counterpart. However, two out of three questions our claims that premature termination of transcription can regulate ribosomal RNA transcription. This conclusion is based on SuperPol mutant increasing rRNA production. Proving that modulation of early transcription termination is used to regulate rRNA production under physiological conditions is beyond the scope of this study. Therefore, we propose to change the title of this manuscript to focus on what we have unambiguously demonstrated:

“Ribosomal RNA synthesis by RNA polymerase I is subjected to premature termination of transcription”.

Reviewer 1 main criticisms centers on the use of the CRAC technique in our study. While we address this point in detail below, we would like to emphasize that, although we agree with the reviewer’s comments regarding its application to Pol II studies, by limiting contamination with mature rRNA, CRAC remains the only suitable method for studying Pol I elongation over the entire transcription units. All other methods are massively contaminated with fragments of mature RNA which prevents any quantitative analysis of read distribution within rDNA.  This perspective is widely accepted within the Pol I research community, as CRAC provides a robust approach to capturing transcriptional dynamics specific to Pol I activity. 

We hope that these findings will resonate with the readership of your journal and contribute significantly to advancing discussions in transcription biology and related fields.

(1) Description of the planned revisions

Despite numerous text modification (see below), we agree that one major point of discussion is the consequence of increased processivity in SuperPol mutant on the “quality” of produced rRNA. Reviewer 3 suggested comparisons with other processive alleles, such as the rpb1-E1103G mutant of the RNAPII subunit (Malagon et al., 2006). This comparison has already been addressed by the Schneider lab (Viktorovskaya OV, Cell Rep., 2013 - PMID: 23994471), which explored Pol II (rpb1-E1103G) and Pol I (rpa190-E1224G). The rpa190-E1224G mutant revealed enhanced pausing in vitro, highlighting key differences between Pol I and Pol II catalytic ratelimiting steps (see David Schneider's review on this topic for further details).

Reviewer 2 and 3 suggested that a decreased efficiency of cleavage upon backtracking might imply an increased error rate in SuperPol compared to the wild-type enzyme. Pol I mutant with decreased rRNA cleavage have been characterized previously, and resulted in increased errorrate. We already started to address this point. Preliminary results from in vitro experiments suggest that SuperPol mutants exhibit an elevated error rate during transcription. However, these findings remain preliminary and require further experimental validation to confirm their reproducibility and robustness. We propose to consolidate these data and incorporate into the manuscript to address this question comprehensively. This could provide valuable insights into the mechanistic differences between SuperPol and the wild-type enzyme. SuperPol is the first pol I mutant described with an increased processivity in vitro and in vivo, and we agree that this might be at the cost of a decreased fidelity.

Regulatory aspect of the process:

To address the reviewer’s remarks, we propose to test our model by performing experiments that would evaluate PTT levels in Pol I mutant’s or under different growth conditions. These experiments would provide crucial data to support our model, which suggests that PTT is a regulatory element of Pol I transcription. By demonstrating how PTT varies with environmental factors, we aim to strengthen the hypothesis that premature termination plays an important role in regulating Pol I activity.

We propose revising the title and conclusions of the manuscript. The updated version will better reflect the study's focus and temper claims regarding the regulatory aspects of termination events, while maintaining the value of our proposed model.

(2) Description of the revisions that have already been incorporated in the transferred manuscript

Some very important modifications have now been incorporated:

Statistical Analyses and CRAC Replicates:

Unlike reviewers 2 and 3, reviewer 1 suggests that we did not analyze the results statistically. In fact, the CRAC analyses were conducted in biological triplicate, ensuring robustness and reproducibility. The statistical analyses are presented in Figure 2C, which highlights significant findings supporting the fact WT Pol I and SuperPol distribution profiles are different. We CRAC replicates exhibit a high correlation and we confirmed significant effect in each region of interest (5’ETS, 18S.2, 25S.1 and 3’ ETS, Figure 1) to confirm consistency across experiments. We finally took care not to overinterpret the results, maintaining a rigorous and cautious approach in our analysis to ensure accurate conclusions.

CRAC vs. Net-seq:

Reviewer 1 ask to comment differences between CRAC and Net-seq. Both methods complement each other but serve different purposes depending on the biological question on the context of transcription analysis. Net-seq has originally been designed for Pol II analysis. It captures nascent RNAs but does not eliminate mature ribosomal RNAs (rRNAs), leading to high levels of contamination. While this is manageable for Pol II analysis (in silico elimination of reads corresponding to rRNAs), it poses a significant problem for Pol I due to the dominance of rRNAs (60% of total RNAs in yeast), which share sequences with nascent Pol I transcripts. As a result, large Net-seq peaks are observed at mature rRNA extremities (Clarke 2018, Jacobs 2022). This limits the interpretation of the results to the short lived pre-rRNA species. In contrast, CRAC has been specifically adapted by the laboratory of David Tollervey to map Pol I distribution while minimizing contamination from mature rRNAs (The CRAC protocol used exclusively recovers RNAs with 3′ hydroxyl groups that represent endogenous 3′ ends of nascent transcripts, thus removing RNAs with 3’-Phosphate, found in mature rRNAs). This makes CRAC more suitable for studying Pol I transcription, including polymerase pausing and distribution along rDNA, providing quantitative dataset for the entire rDNA gene.

CRAC vs. Other Methods:

Reviewer 1 suggests using GRO-seq or TT-seq, but the experiments in Figure 2 aim to assess the distribution profile of Pol I along the rDNA, which requires a method optimized for this specific purpose. While GRO-seq and TT-seq are excellent for measuring RNA synthesis and cotranscriptional processing, they rely on Sarkosyl treatment to permeabilize cellular and nuclear membranes. Sarkosyl is known to artificially induces polymerase pausing and inhibits RNase activities which are involved in the process. To avoid these artifacts, CRAC analysis is a direct and fully in vivo approach. In CRAC experiment, cells are grown exponentially in rich media and arrested via rapid cross-linking, providing precise and artifact-free data on Pol I activity and pausing.

Pol I ChIP Signal Comparison:

The ChIP experiments previously published in Darrière et al. lack the statistical depth and resolution offered by our CRAC analyses. The detailed results obtained through CRAC would have been impossible to detect using classical ChIP. The current study provides a more refined and precise understanding of Pol I distribution and dynamics, highlighting the advantages of CRAC over traditional methods in addressing these complex transcriptional processes.

BMH-21 Effects:

As highlighted by Reviewer 1, the effects of BMH-21 observed in our study differ slightly from those reported in earlier work (Ref Schneider 2022), likely due to variations in experimental conditions, such as methodologies (CRAC vs. Net-seq), as discussed earlier. We also identified variations in the response to BMH-21 treatment associated with differences in cell growth phases and/or cell density. These factors likely contribute to the observed discrepancies, offering a potential explanation for the variations between our findings and those reported in previous studies. In our approach, we prioritized reproducibility by carefully controlling BMH-21 experimental conditions to mitigate these factors. These variables can significantly influence results, potentially leading to subtle discrepancies. Nevertheless, the overall conclusions regarding BMH-21's effects on WT Pol I are largely consistent across studies, with differences primarily observed at the nucleotide resolution. This is a strength of our CRAC-based analysis, which provides precise insights into Pol I activity.

We will address these nuances in the revised manuscript to clarify how such differences may impact results and provide context for interpreting our findings in light of previous studies.

Minor points:

Reviewer #1:

•  In general, the writing style is not clear, and there are some word mistakes or poor descriptions of the results, for example: 

•  On page 14: "SuperPol accumulation is decreased (compared to Pol I)". 

•  On page 16: "Compared to WT Pol I, the cumulative distribution of SuperPol is indeed shifted on the right of the graph." 

We clarified and increased the global writing style according to reviewer comment.

•  There are also issues with the literature, for example: Turowski et al, 2020a and Turowski et al, 2020b are the same article (preprint and peer-reviewed). Is there any reason to include both references? Please, double-check the references.  

This was corrected in this version of the manuscript.

•  In the manuscript, 5S rRNA is mentioned as an internal control for TMA normalisation. Why are Figure 1C data normalised to 18S rRNA instead of 5S rRNA? 

Data are effectively normalized relative to the 5S rRNA, but the value for the 18S rRNA is arbitrarily set to 100%.

•  Figure 4 should be a supplementary figure, and Figure 7D doesn't have a y-axis labelling. 

The presence of all Pol I specific subunits (Rpa12, Rpa34 and Rpa49) is crucial for the enzymatic activity we performed. In the absence of these subunits (which can vary depending on the purification batch), Pol I pausing, cleavage and elongation are known to be affected. To strengthen our conclusion, we really wanted to show the subunit composition of the purified enzyme. This important control should be shown, but can indeed be shown in a supplementary figure if desired.

Y-axis is figure 7D is now correctly labelled

•  In Figure 7C, BMH-21 treatment causes the accumulation of ~140bp rRNA transcripts only in SuperPol-expressing cells that are Rrp6-sensitive (line 6 vs line 8), suggesting that BHM-21 treatment does affect SuperPol. Could the author comment on the interpretation of this result? 

The 140 nt product is a degradation fragment resulting from trimming, which explains its lower accumulation in the absence of Rrp6. BMH21 significantly affects WT Pol I transcription but has also a mild effect on SuperPol transcription. As a result, the 140 nt product accumulates under these conditions.

Reviewer #2:

•  pp. 14-15: The authors note local differences in peak detection in the 5'-ETS among replicates, preventing a nucleotide-resolution analysis of pausing sites. Still, they report consistent global differences between wild-type and SuperPol CRAC signals in the 5'ETS (and other regions of the rDNA). These global differences are clear in the quantification shown in Figures 2B-C. A simpler statement might be less confusing, avoiding references to a "first and second set of replicates" 

According to reviewer, statement has been simplified in this version of the manuscript.

•  Figures 2A and 2C: Based on these data and quantification, it appears that SuperPol signals in the body and 3' end of the rDNA unit are higher than those in the wild type. This finding supports the conclusion that reduced pausing (and termination) in the 5'ETS leads to an increased Pol I signal downstream. Since the average increase in the SuperPol signal is distributed over a larger region, this might also explain why even a relatively modest decrease in 5'ETS pausing results in higher rRNA production. This point merits discussion by the authors. 

We agree that this is a very important discussion of our results. Transcription is a very dynamic process in which paused polymerase is easily detected using the CRAC assay. Elongated polymerases are distributed over a much larger gene body, and even a small amount of polymerase detected in the gene body can represent a very large rRNA synthesis. This point is of paramount importance and, as suggested by the reviewer, is now discussed in detail.

•  A decreased efficiency of cleavage upon backtracking might imply an increased error rate in SuperPol compared to the wild-type enzyme. Have the authors observed any evidence supporting this possibility? 

Reviewer suggested that a decreased efficiency of cleavage upon backtracking might imply an increased error rate in SuperPol compared to the wild-type enzyme. We already started to address this point. Preliminary results from in vitro experiments suggest that SuperPol mutants exhibit an elevated error rate during transcription. However, these findings remain preliminary and require further experimental validation to confirm their reproducibility and robustness. We propose to consolidate these data and incorporate into the manuscript to address this question comprehensively.

•  pp. 15 and 22: Premature transcription termination as a regulator of gene expression is welldocumented in yeast, with significant contributions from the Corden, Brow, Libri, and Tollervey labs. These studies should be referenced along with relevant bacterial and mammalian research. 

According to reviewer suggestion, we referenced these studies.

•  p. 23: "SuperPol and Rpa190-KR have a synergistic effect on BMH-21 resistance." A citation should be added for this statement. 

This represents some unpublished data from our lab. KR and SuperPol are the only two known mutants resistant to BMH-21. We observed that resistance between both alleles is synergistic, with a much higher resistance to BMH-21 in the double mutant than in each single mutant (data not shown). Comparing their resistance mechanisms is a very important point that we could provide upon request. This was added to the statement.

•  p. 23: "The released of the premature transcript" - this phrase contains a typo 

This is now corrected.

Reviewer #3:

•  Figure 1B: it would be opportune to separate the technique's schematic representation from the actual data. Concerning the data, would the authors consider adding an experiment with rrp6D cells? Some RNAs could be degraded even in such short period of time, as even stated by the authors, so maybe an exosome depleted background could provide a more complete picture. Could also the authors explain why the increase is only observed at the level of 18S and 25S? To further prove the robustness of the Pol I TMA method could be good to add already characterized mutations or other drugs to show that the technique can readily detect also well-known and expected changes. 

The precise objective of this experiment is to avoid the use of the Rrp6 mutant. Under these conditions, we prevent the accumulation of transcripts that would result from a maturation defect. While it is possible to conduct the experiment with the Rrp6 mutant, it would be impossible to draw reliable conclusions due to this artificial accumulation of transcripts.

•  Figure 1C: the NTS1 probe signal is missing (it is referenced in Figure 1A but not listed in the Methods section or the oligo table). If this probe was unused, please correct Figure 1A accordingly. 

We corrected Figure 1A.  

•  Figure 2A: the RNAPI occupancy map by CRAC is hard to interpret. The red color (SuperPol) is stacked on top of the blue line, and we are not able to observe the signal of the WT for most of the position along the rDNA unit. It would be preferable to use some kind of opacity that allows to visualize both curves. Moreover, the analysis of the behavior of the polymerase is always restricted to the 5'ETS region in the rest of the manuscript. We are thus not able to observe whether termination events also occur in other regions of the rDNA unit. A Northern blot analysis displaying higher sizes would provide a more complete picture. 

We addressed this point to make the figure more visually informative. In Northern Blot analysis, we use a TSS (Transcription Start Site) probe, which detects only transcripts containing the 5' extremity. Due to co-transcriptional processing, most of the rRNA undergoing transcription lacks its 5' extremity and is not detectable using this technique. We have the data, but it does not show any difference between Pol I and SuperPol. This information could be included in the supplementary data if asked.

•  "Importantly, despite some local variations, we could reproducibly observe an increased occupancy of WT Pol I in 5'-ETS compared to SuperPol (Figure 1C)." should be Figure 2C. 

Thanks for pointing out this mistake. it has been corrected.

•  Figure 3D: most of the difference in the cumulative proportion of CRAC reads is observed in the region ~750 to 3000. In line with my previous point, I think it would be worth exploring also termination events beyond the 5'-ETS region. 

We agree that such an analysis would have been interesting. However, with the exception of the pre-rRNA starting at the transcription start site (TSS) studied here, any cleaved rRNA at its 5' end could result from premature termination and/or abnormal processing events. Exploring the production of other abnormal rRNAs produced by premature termination is a project in itself, beyond this initial work aimed at demonstrating the existence of premature termination events in ribosomal RNA production.

•  Figure 4: should probably be provided as supplementary material. 

As l mentioned earlier (see comments), the presence of all Pol I specific subunits (Rpa12, Rpa34 and Rpa49) is crucial for the enzymatic activity we performed. This important control should be shown, but can indeed be shown in a supplementary figure if desired.

•  "While the growth of cells expressing SuperPol appeared unaffected, the fitness of WT cells was severely reduced under the same conditions." I think the growth of cells expressing SuperPol is slightly affected. 

We agree with this comment and we modified the text accordingly.

•  Figure 7D: the legend of the y-axis is missing as well as the title of the plot. 

Legend of the y-axis and title of the plot are now present.

•  The statements concerning BMH-21, SuperPol and Rpa190-KR in the Discussion section should be removed, or data should be provided.

This was discussed previously. See comment above.

•  Some references are missing from the Bibliography, for example Merkl et al., 2020; Pilsl et al., 2016a, 2016b. 

Bibliography is now fixed

(3) Description of analyses that authors prefer not to carry out

Does SuperPol mutant produces more functional rRNAs ?

As Reviewer 1 requested, we agree that this point requires clarification.. In cells expressing SuperPol, a higher steady state of (pre)-rRNAs is only observed in absence of degradation machinery suggesting that overproduced rRNAs are rapidly eliminated. We know that (pre)rRNas are unable to accumulate in absence of ribosomal proteins and/or Assembly Factors (AF). In consequence, overproducing rRNAs would not be sufficient to increase ribosome content. This specific point is further address in our lab but is beyond the scope of this article.

Is premature termination coupled with rRNA processing 

We appreciate the reviewer’s insightful comments. The suggested experiments regarding the UTP-A complex's regulatory potential are valuable and ongoing in our lab, but they extend beyond the scope of this study and are not suitable for inclusion in the current manuscript.

Document d'information : Gouverner autrement : radicalité ou compromis ?

Ce briefing examine les thèmes principaux et les idées clés abordées lors de la 34ème journée du Livre politique, centrée sur la question de savoir comment gouverner autrement, en explorant la tension entre la radicalité et le compromis.

La discussion, impliquant notamment Roseline Bachelot, Astrid Panosian Bouvet, et Dominique Rier, met en lumière les défis de l'exercice du pouvoir dans le contexte d'une crise démocratique et d'une configuration politique fragmentée.

Thèmes principaux :

• La tension entre radicalité et compromis : La question centrale est de savoir si ces deux approches, apparemment contradictoires, peuvent être compatibles dans la gouvernance.
• La crise démocratique et la défiance citoyenne : Un consensus émerge sur la période de crise démocratique actuelle, marquée par une forte défiance envers les institutions et des oppositions semblant irréconciliables, menant à un risque d'immobilisme politique.
• La culture française du compromis : Une interrogation subsiste quant à l'existence et à la force d'une culture du compromis en France, souvent comparée à celle des pays d'Europe du Nord.
• Le rôle des institutions et de la Constitution : L'impact de la Constitution de la 5ème République sur la capacité à délibérer et à trouver des compromis est discuté.
• La polarisation politique et la violence : Les intervenants soulignent la polarisation croissante de la vie politique, le risque de violence physique et la nécessité de préserver un cadre de désaccord civilisé.
• Les outils et pratiques pour favoriser le compromis : Des propositions sont faites pour adapter les institutions et les pratiques politiques afin de mieux intégrer le compromis.

Idées et faits importants :

• La polysémie des termes "radicalité" et "compromis" : Roseline Bachelot souligne l'ambivalence de ces termes.

La radicalité peut signifier l'intransigeance et l'atteinte aux racines (sens marxiste), mais aussi l'outrance et le refus d'écouter.

Le compromis peut être vu comme un abandon de convictions, mais aussi comme une culture de l'intérêt général. Bachelot se déclare "radicalement pour le compromis".

• Citation : "moi ce qui me frappe quand on oppose radicalité et compromis c'est l'ambivalence de ces deux termes et leur polycémie"

• Citation : "je suis radicalement pour le compromis"

• La radicalité comme vertu de clarté : Astrid Panosian Bouvet reconnaît que la radicalité a la vertu de la clarté et permet d'être ferme sur ses bases, sans pour autant exclure l'écoute et la recherche d'un chemin commun.

• Citation : "je pense que la radicalité ça a aussi la vertu de la clarté"

Le dialogue social comme modèle de compromis :

Panosian Bouvet, en tant que Ministre du Travail, exprime un profond respect pour le dialogue social, où des personnes ancrées dans la réalité du monde du travail recherchent des solutions communes.

• La Constitution de la 5ème République et les contre-pouvoirs : Contrairement à une vision simplifiée, la Constitution est décrite comme riche en éléments de contre-pouvoir, qui se manifestent moins en période de majorité absolue. La configuration politique post-2022 et surtout post-2024 révèle ces mécanismes.

• Citation : "elle est en réalité bourré d'éléments de contrepouvoir qui ne se manifeste pas dans les périodes de la majorité absolue pourquoi ? parce que on ne peut pas en vouloir à des organes qui ont tous la même couleur politique de penser la même chose"

• La délibération comme alternative au compromis mou : Le terme de délibération est mis en avant comme plus pertinent que celui de compromis dans la culture constitutionnelle française.

La délibération permet d'explorer toutes les sensibilités avant de prendre une décision. Radicalité et compromis sont vus comme les deux phases d'une même pièce (délibérer et décider).

• Citation : "la constitution et les textes ne connaissent pas le mot compromis mais le mot de délibération et moi je crois que c'est celui-ci qu'on devrait vraiment mettre en valeur"

• Citation : "la radicalité et le compromis sont en réalité les deux phases d'une même pièce c'est-à-dire qu'au moment où on prend une décision on délibère pour en comprendre les enjeux et on tranche parce qu'on décide"

• La distinction entre radicalité des mots et radicalité des actes : Dominique Rier met en garde contre la confusion entre une radicalité dans les termes et une impuissance dans l'action, tout en reconnaissant l'existence d'actes radicaux dangereux.

• L'intelligence d'aller au bout d'une idée radicale avant de revenir au réel : Rier suggère qu'il faut être capable de penser une idée dans sa dimension radicale, comme l'égalité absolue, pour qu'elle serve d'horizon, puis de "déradicaliser" la manière de la décrire pour la confronter à la réalité et permettre l'action. Les progrès historiques, comme l'égalité homme-femme, montrent que des idées initialement considérées comme radicales peuvent devenir réalité.

• Citation : "l'intelligence qui nous est demandé c'est de savoir aller dans la radicalité jusqu'au bout d'une idée"

• Citation : "l'idée de l'égalité entre nous tous est une forme de radicalité dont nous devons nous inspirer comme un horizon"

• La nécessité de fabriquer l'adhésion citoyenne : Le compromis implique que les citoyens se retrouvent dans la solution proposée pour qu'il y ait adhésion.

• Être d'accord sur la forme et l'intensité du désaccord : Dans le contexte de la polarisation, il est crucial d'accepter la défaite temporaire et de limiter l'intensité du désaccord pour éviter la violence physique.

• Citation : "il faut être d'accord sur au moins deux choses la forme du désaccord et l'intensité du désaccord"

• Citation : "il nous faut absolument fortlore la violence la violence physique nous menace nous ne sommes pas loin de la confrontation"

• Le compromis comme acte de courage : Roseline Bachelot cite Paul Ricoeur pour souligner que le compromis ne vise pas à résoudre un conflit mais à le rendre "soutenable".

• La fin des majorités "godillots" et la tripartition politique : Le retour à un fait majoritaire fort est jugé incertain et pas nécessairement souhaitable. La tripartition actuelle de l'Assemblée Nationale pose des défis de communication entre opinions.

• Moins de lois et plus de consensus : La période actuelle avec moins de législation pourrait prouver qu'il est possible de revenir à "moins de choses plus consensuelles" avec le schéma institutionnel existant.

• La polarisation liée au manque de tolérance mutuelle : La vie politique américaine est citée comme exemple d'une polarisation due au fait que les partis se voient comme des ennemis plutôt que des rivaux légitimes.

• La "retenue institutionnelle" comme frein à la polarisation : L'idée que majorité et opposition sachent utiliser les moyens légaux avec modération (le débat plutôt que l'obstruction, etc.) est cruciale. L'usage excessif du parlementarisme rationalisé (comme le 49.3) peut nuire à la légitimité des décisions.

• Outils institutionnels pour la culture du compromis : Roseline Bachelot propose la motion de censure constructive (sur le modèle allemand ou espagnol) et la question de confiance obligatoire pour formaliser les coalitions de gouvernement.

• Changements de pratiques nécessaires : Le dialogue social doit se situer en amont de la décision politique. L'expertise doit être professionnalisée et sécurisée, libre de l'influence de convictions préconçues. La stabilité ministérielle est également souhaitable.

• La Constitution offre des "boulevards" pour l'action politique : De nombreux changements de pratiques parlementaires (gestion du temps, amendements, culture de l'opposition, recours aux référendums) sont possibles sans modifier le texte constitutionnel.

• Le compromis n'inclut pas ceux qui remettent en cause l'état de droit : Le compromis a des limites, et il n'est pas possible de transiger sur les questions fondamentales comme l'état de droit. Cependant, il faut éviter de rejeter dans les ténèbres ceux qui ont élu des représentants sous certaines étiquettes, car cela empêche de les "reconquérir".

En synthèse, le débat souligne la complexité de gouverner dans un environnement politique fragmenté et de crise démocratique.

Si la radicalité et le compromis semblent opposés, ils sont présentés comme potentiellement complémentaires, la radicalité pouvant définir l'horizon des principes et le compromis la méthode pour les concrétiser dans la réalité.

Le défi majeur est de dépasser la polarisation et la défiance en renforçant la délibération, en adaptant les pratiques politiques et en redécouvrant les potentialités de la Constitution, tout en maintenant la fermeté sur les principes fondamentaux de l'état de droit. La question de la violence et de la détestation de l'autre est perçue comme une menace sérieuse nécessitant une attention renouvelée.

Briefing : Comment se forme l'opinion ?

Contexte : Cette table ronde, dans le cadre de la 34ème journée du Livre politique, explore la complexité de la formation de l'opinion à l'ère des sondages omniprésents, des réseaux sociaux et d'une délibération collective fragmentée.

Elle réunit un sondeur (Bris Teinturier), une ancienne dirigeante d'institut de sondage et du MEDEF (Laurence Parisot), un député socialiste (Jérôme Guedj) et une humoriste et chroniqueuse (Sopia Aram).

Thèmes Principaux :

• La nature de l'opinion publique et sa mesure : Définition, évolution et le rôle des sondages.

• Les mécanismes de formation de l'opinion : Les facteurs historiques et nouveaux qui façonnent les croyances et les points de vue individuels et collectifs.

• L'impact des médias et des réseaux sociaux : La fragmentation de l'information, les bulles informationnelles et la polarisation.

• Le décalage entre les préoccupations réelles des citoyens et le débat public médiatisé.

• La violence et la radicalisation dans le débat public : Le rôle des réseaux sociaux et de certains acteurs politiques.

• Le rôle et la responsabilité des différents acteurs :

• Politiques,

• journalistes,
• sondeurs,
• citoyens.

Idées et Faits Importants :

• L'opinion, un concept insaisissable et mouvant : Bris Teinturier et Laurence Parisot soulignent la difficulté à cerner l'opinion. Parisot cite Alfred Sauvy : « l'opinion c'est le fort intérieur d'une nation ». Elle ajoute que, tout comme le fort intérieur, l'opinion est « extrêmement mouvante ».

• La pluralité des variables déterminant l'opinion : Bris Teinturier insiste sur le fait qu'il n'y a pas une seule cause : « ils sont pluriels il n'y a pas une variable ou deux variables qui façonneraient l’opinion ». Historiquement, le milieu social, l'âge, l'éducation et la politisation (le rôle des partis politiques comme le PCF est mentionné) étaient déterminants.

• L'importance croissante de l'expérience personnelle :

Avec la défiance généralisée envers les institutions, le savoir "expert" et les partis, l'expérience individuelle prend le dessus. Bris Teinturier : « plus je me replie sur mon expérience personnelle donc ça ça joue beaucoup on fait confiance à ses pères on fait confiance à soi-même et dans la formation des opinions il y a ce que j'ai expérimenté moi-même qui aujourd'hui joue beaucoup ».

• La fragmentation des médias : Ce phénomène, marquant des 10-15 dernières années selon Bris Teinturier, a dynamité l'espace de délibération collective. « le temps est loin où des gens de ma génération se retrouvaient le lundi matin... aujourd'hui la fragmentation... des audiences fait que le système de délibération collective a volé en éclat ». Cela conduit à des biais de confirmation accrus.

• La polarisation : Stade ultime de la formation de l'opinion figée, observée notamment aux États-Unis où les campagnes électorales se jouent sur la mobilisation plus que sur le changement d'avis.

En France, ce niveau de polarisation n'est pas encore atteint, et les campagnes électorales ont encore un impact, signe d'une démocratie « vivante » même si le phénomène de polarisation « s’affaiblit un peu ».

• Le rôle ambigu des sondages : Pour un politique comme Jérôme Guedj, les électeurs sont le juge de paix final. Les sondages doivent être maniés « avec précaution ».

Il reconnaît s'appuyer sur eux quand ils confortent son combat (ex. : les retraites) mais dénonce aussi leur utilisation pour des sujets épidermiques ou émotionnels (ex. : port du voile dans l'espace public).

Bris Teinturier nuance en affirmant que les enquêtes d'opinion, si elles sont basées sur un « échantillon représentatif », permettent d'« objectiver ce que sont les perceptions et les attentes des Français » et de mettre fin aux arguments d'autorité sur les « vrais sujets ».

• Les réseaux sociaux, nouveau champ de bataille et de polarisation : Jérôme Guedj les qualifie de « terrain de jeu voir un champ de bataille ». Laurence Parisot les identifie comme la « principale source d'information » aujourd'hui, participant à une multiplicité de sources. Sopia Aram les perçoit comme un espace à ne pas déserter, malgré les attaques, pour proposer un « contrediscours ».

• La force de la vidéo et le défi de l'IA : Laurence Parisot souligne le rôle transformateur de la vidéo dans la formation de l'opinion (ex. : cause animale).

L'intelligence artificielle est en train de « rebattre les cartes » en proposant des opinions générées. Le défi futur, soulevé par un participant, est la banalisation des « deepfakes » et la perte de la vidéo comme preuve, nécessitant une éducation aux médias et à l'image.

Sopia Aram ajoute que même des images fausses « s’encre quelque part dans notre dans notre esprit... et ça nous conditionne un peu ».

• Le décalage entre les préoccupations (santé, pouvoir d'achat) et le débat public (faits divers, polémiques) :

Jérôme Guedj, s'appuyant sur ses permanences et les sondages, constate un « immense décalage » entre les sujets qui préoccupent le plus (santé, pouvoir d'achat, logement) et ceux qui « accaparent le débat public et qui étaient la conséquence... du système médiatique complété aujourd'hui par celui des réseaux sociaux ».

• La violence dans le débat public et la "fabrique de cibles" : Sopia Aram dénonce une « bulle de violence symbolique mais comment dire déroulant le tapis pour une violence politique » orchestrée par certains acteurs, y compris des députés, qui « nous dessinent des cibles dans le dos ».

Elle lie ce phénomène au procès en islamophobie et met en garde contre un drame à venir.

Jérôme Guedj partage cette inquiétude, parlant d'un moment de « bascule » et d'une « banalisation dans l'opinion du harcèlement à destination de personnes ciblées ».

• L'appel à la responsabilité : Les intervenants appellent à une prise de responsabilité de tous. Laurence Parisot cible particulièrement les médias et « les chaînes d'information » qui devraient se poser des « questions éthiques sur leur mission véritable à l'égard du public ». Bris Teinturier insiste sur l'importance de la « bataille de mots » et de l'utilisation de « mots appropriés » pour contrer les « équivalences fallacieuses » et le « vide de la pensée ». Jérôme Guedj appelle les acteurs politiques à « refaire de la politique », à penser le « temps long » et à « bosser » pour proposer et comprendre.

• Le droit de ne pas avoir d'opinion : Une participante soulève la question de la pression à avoir une opinion sur tout. Bris Teinturier répond que c'est un « devoir... quand on n'a pas la compétence ou qu'on estime qu'on est absolument incompétent sur une question... il faut savoir se taire ».

• La crise de l'espérance et la repolitisation : Un participant suggère que la crise de la confiance pourrait être une crise de l'espérance. La question se pose de savoir qui doit projeter un nouveau monde et si un retour du clivage gauche-droite pourrait aider à « repolitisation du débat » et ramener ceux qui « ne s'intéressent plus du tout au débat » (Laurence Parisot).

Bris Teinturier conclut sur l'enjeu de la démocratie : gérer les conflits « en dehors de la violence » en étant « d'accord sur nos désaccords ».

Conclusion :

La formation de l'opinion est un processus complexe, influencé par des facteurs historiques, personnels, médiatiques et technologiques.

À l'ère numérique, marquée par la fragmentation et la polarisation, le débat public est rendu plus difficile et violent.

Les sondages, bien qu'utiles pour objectiver les préoccupations, doivent être utilisés avec discernement. Une prise de conscience et une responsabilité accrues des acteurs politiques, médiatiques et des citoyens sont nécessaires pour reconstruire un espace de délibération apaisé et contrer la banalisation de la violence et la falsification de la réalité.

L'éducation aux médias et le retour à un usage précis et approprié des mots sont des pistes essentielles pour l'avenir de la démocratie.

Note de Synthèse : La Lutte pour le Droit de Vote des Femmes Européennes

Source : Extraits du documentaire "Citoyennes ! | Documentaire complet LCP"

Introduction

• Le documentaire "Citoyennes !" retrace l'histoire complexe et souvent tumultueuse de l'accès des femmes européennes au droit de vote, depuis la Révolution française jusqu'à la fin du XXe siècle.

Il souligne que cette histoire est loin d'avoir été un "long fleuve tranquille", marquant une lutte acharnée menée par des groupes de femmes (avec le soutien de quelques hommes) pour faire reconnaître leur statut de citoyennes à part entière.

Le documentaire explore les raisons de la longue hésitation des pays européens à accorder ce droit, la manière dont les femmes "citoyennes sans citoyenneté" ont participé à la vie politique et sociale, et les figures marquantes de ce combat.

Thèmes Principaux et Idées Clés

Une Lutte Ancienne et Persistante :

La participation des femmes à la vie publique et politique remonte bien avant la Révolution française, avec des figures historiques comme Jeanne d'Arc (bien que récupérée par le roman national) et des centaines d'autres femmes combattantes au Moyen-Âge.

À partir de la fin du XVIIe et début du XVIIIe siècle, les salons littéraires et scientifiques tenus par des aristocrates et grandes bourgeoises offrent un espace de débat où les femmes peuvent s'exprimer sur un pied d'égalité avec les hommes.

La Révolution Française : Un Moment Crucial mais Limité :

La Révolution française marque l'émergence des premières militantes au sens propre du terme, souvent issues des milieux populaires et de la petite bourgeoisie, comme les "dames de la halle" ou les "Poissardes".

Elles sont les premières pétitionnaires à plaider la cause du peuple, bien que leur mouvement soit plus axé sur des besoins fondamentaux comme "du pain pour le peuple, du pain pour leurs enfants" que sur un féminisme politique.

Les "citoyennes tricoteuses", assistant aux procès, symbolisent la présence féminine dans l'espace public, même sans droit de parole initialement.

Elles sont dépeintes de manière négative dans la propagande royaliste.

Des figures marquantes comme Olympe de Gouge ("l'autrice de la déclaration des droits de la femme, qui est vraiment le premier manifeste féminin"), guillotinée pour ses idées, montrent l'engagement politique radical mais aussi ses dangers.

D'autres militantes comme Manon Roland, Théroigne de Méricourt, Claire Lacombe et Pauline Léon plaident notamment pour le droit des femmes à l'autodéfense et à s'armer face aux violences.

Cependant, la Révolution française n'apporte pas de gains significatifs pour les femmes en termes de droits politiques. S'ensuit un "grand renfermement des femmes" qui préfigure la révolution conservatrice napoléonienne.

Le Code Civil de Napoléon (1804) : La Légalisation de l'Enfermement Domestique :

Le Code Civil de 1804 établit un cadre légal qui confine les femmes à la sphère domestique, limitant leur liberté et leurs droits.

"on va même créer un cadre légal à cet enfermement des femmes qui vont être dès lors complètement cantonné à la sphère domestique [...] ce qui va être traduit en fait en texte avec le code civil de Napoléon en en 1804". Ce code est également la traduction des mœurs et coutumes de l'époque.

L'Émergence du Mouvement Suffragiste au XIXe Siècle :

La Révolution de 1830 ouvre les consciences, et des femmes commencent à s'organiser en groupes en France, en Angleterre et dans d'autres pays européens.

Les suffragistes militent pour deux droits fondamentaux : le droit de vote ("le suffrage") et le droit d'être élue. Jeanne Deroin est la première Française à se présenter à une élection législative en 1849.

Le sujet du droit de vote des femmes est mis sur la table à partir de 1848, avec des auteurs féminins et masculins qui s'en emparent dans la presse.

Divergences et Soutiens au XIXe Siècle :

George Sand, figure féminine majeure du XIXe siècle, bien que provocatrice sur le plan des mœurs ("s'habille en pantalon qui fume le cigare qui revendique des amours homosexuels lesbiennes et cetera"), est contre le vote des femmes, estimant qu'elles ne sont pas assez éduquées et que la priorité doit être les droits civils.

Elle craint que leur vote ne soit influencé par leur mari ou l'Église.

Victor Hugo, en revanche, est un fervent défenseur du droit des femmes, exprimant son soutien publiquement, notamment lors d'un banquet républicain en 1872.

Figures Pionnières du Féminisme :

Hubertine Auclert est la première militante à se déclarer "féministe" en France.

Elle rejoint la Ligue française pour le droit des femmes en 1877 et milite pour le droit de vote, l'indépendance financière, la séparation des biens et la féminisation de certains mots.

Elle se présente symboliquement aux élections législatives en 1910. "Une République qui maintiendra les femmes dans une condition d'infériorité ne pourra pas faire les hommes égaux".

Le Mouvement Britannique des Suffragettes : Radicalisme et Action Directe :

Organisées depuis le milieu du XIXe siècle, les femmes britanniques, inspirées notamment par les campagnes de John Stuart Mill pour le droit de vote des femmes, intensifient leur action.

En 1897, plusieurs groupes se fédèrent pour former la National Union of Women's Suffrage Societies (NUWSS). John Stuart Mill dépose régulièrement des propositions de loi pour le vote des femmes au Parlement, sans succès.

Lassées du pacifisme, les suffragettes, menées par Emeline Pankhurst et ses filles, adoptent des méthodes plus radicales au début du XXe siècle.

Leur slogan est "Des actes, pas des mots".

Elles mènent des actions directes, parfois violentes :

incendies, explosions, bris de vitres, coupure de fils téléphoniques, incendie de boîtes aux lettres. Ces actions les rendent impopulaires en Europe.

Elles recourent à la grève de la faim en prison, entraînant des gavages forcés ("aujourd'hui on appellerait ça un viol finalement puisque c'est l'intrusion violente d'un corps étranger dans le corps d'une femme sans son consentement"). Ces violences institutionnelles choquent l'opinion publique.

L'action la plus spectaculaire est celle d'Émilie Davidson, qui se sacrifie lors du derby de Londres en 1913 pour attirer l'attention sur leur cause.

"Ces pétroleuses iront jusqu'au suicide politique comme Émilie Davidson qui n'hésite pas en 1913 à se faire piétiner par un cheval de l'écurie du roi George 5 lors du derby de Londres".

Les Premiers Pays à Accorder le Droit de Vote : Nouvelle-Zélande et Finlande :

La Nouvelle-Zélande est le premier pays au monde à accorder le droit de vote aux femmes en 1893.

La Finlande est le premier pays en Europe à accorder le droit de vote et d'éligibilité aux femmes en 1906. "Cela a été possible grâce à des femmes des régions rurales et des villes qui se sont réunies et qui ont dit 'Nous avons une opportunité. Nous sommes en train d'écrire l'histoire.'"

Une hypothèse avancée pour cette précocité est que ces pays étaient des nations jeunes, imprégnées d'une culture des affaires où le pouvoir politique était peut-être moins central que le pouvoir économique.

En Finlande, la lutte pour l'indépendance vis-à-vis de l'empire russe a créé un sentiment d'unité, et les femmes jouaient déjà des rôles importants dans la société. Le principe de solidarité a justifié leur participation politique.

La Première Guerre Mondiale : Un Tournant Ambigü : La déclaration de guerre en 1914 suspend les actions militantes en Europe, les femmes participant à l'effort de guerre (les "munitionnettes").

Certains hommes proposent le "vote des morts" pour que les femmes puissent représenter les soldats tombés au combat, reconnaissant symboliquement leur présence dans l'espace public.

Ce vote est adopté au Royaume-Uni et en Belgique.

Au Royaume-Uni, le droit de vote est accordé en 1918 à certaines catégories de femmes de plus de 30 ans ("soit chef de famille soit épouse de chef de famille propriétaire d'un bien immobilier d'une valeur d'au moins 5 livres par an ou diplômé de l'université").

Ce geste est présenté comme une récompense pour leur contribution à l'effort de guerre, occultant les années de lutte des suffragettes. Le suffrage égal à celui des hommes n'est obtenu qu'en 1928.

Dans d'autres pays (Russie, Allemagne, pays d'Europe centrale), le droit de vote est accordé aux femmes après 1918, souvent en lien avec des changements de régime et l'éclatement des empires.

Les Années de l'Entre-Deux-Guerres : Progrès et Résistances :

La majorité des pays européens accordent le droit de vote aux femmes entre les deux guerres, parfois sous conditions.

La France reste l'un des "irréductibles" qui résistent. Plusieurs propositions de loi sont bloquées par le Sénat, qui maintient une vision traditionnelle du rôle des femmes. Un sénateur décrit les mains des femmes comme "admirables et toutes semblables à des oiseaux", faites pour être baisées, pas pour voter.

Louise Weiss emerge comme une figure clé dans les années 1930, utilisant des méthodes radicales et modernes pour bousculer l'inertie politique (candidatures symboliques, manifestations burlesques, distribution de tracts lors d'événements publics).

"Elle avait finalement des modes d'action hyper moderne qu'on a pu voir ensuite utilisé par des groupes comme Greenpeace ou les Femon".

Le Front Populaire (1936) : Une Ouverture Limitée : Pour la première fois, trois femmes entrent au gouvernement sous le Front Populaire, en tant que sous-secrétaires d'État.

C'est une avancée symbolique. Cependant, Léon Blum, chef du gouvernement, craint le vote des femmes, pensant qu'elles pencheraient vers un vote catholique.

Il demande aux femmes ministres de renoncer à la question du droit de vote.

Cette expérience met en évidence la forte hostilité au vote des femmes au sein même du camp majoritaire (communistes, radicaux-socialistes).

La Seconde Guerre Mondiale et l'Obtention du Vote en France (1944) :

La déclaration de guerre en 1939 relègue à nouveau le droit de vote des femmes au second plan.

À partir de 1943, la France Libre à Alger prépare le futur régime. Le Général de Gaulle signe l'ordonnance du 21 avril 1944 accordant aux femmes majeures le droit d'être élues et électrices, sans restriction. "C'est absent des débats. Ça va arriver tardivement en fait dans le discours de du général de Gaulle".

Le vote est accordé en 1944, et les femmes peuvent voter pour la première fois aux élections municipales et législatives en 1945. La participation des femmes à la Résistance et leur présence accrue dans l'économie de guerre ont contribué à cette décision. "Il est indispensable que les femmes votent, une nécessité absolue, normale, un droit".

La France, patrie des droits de l'homme, arrive tardivement en comparaison d'autres pays européens. Une explication avancée est que le changement de régime (fin de la IIIe République et passage à un nouveau régime) a créé une opportunité, comme dans d'autres pays.

La forte présence de figures féminines allégoriques (Marianne) dans l'espace symbolique républicain est vue comme une compensation pour leur absence dans l'espace démocratique réel. "l'omniprésence de ces figures féminines dans l'ordre symbolique républicain c'est une façon de faire oublier leur absence dans l'espace public démocratique".

La Suisse : Un Cas Particulier de Retardataire : La Suisse est l'un des derniers pays au monde à accorder le droit de vote aux femmes. "C'est vraiment pas une histoire glorieuse".

Plus de 50 votations ont lieu entre 1919 et 1990 sur le sujet.

Trois raisons expliquent ce retard : Le système politique de démocratie semi-directe, où le peuple (masculin) est consulté et vote "non" à de nombreuses reprises.

Une société relativement conservatrice, influencée par le modèle germanique, où la place des femmes est traditionnellement au foyer.

L'épargne de la Suisse par les guerres mondiales, qui n'a donc pas eu la même dynamique de reconnaissance du rôle des femmes que d'autres pays.

Le mouvement suffragiste suisse privilégie des méthodes pacifiques, de pétitions et de persuasion, se démarquant de l'action violente des suffragettes anglaises.

L'avocate Antoinette Quinche est une figure marquante, argumentant que la Constitution suisse de 1848 garantit l'égalité des droits pour tous les Suisses (hommes et femmes).

Malgré l'obtention tardive du droit de vote, de nombreuses femmes ont mis du temps à oser voter, ne sachant pas toujours comment utiliser ce droit.

Les Combats Post-Suffrage : Droits Civils et Vagues Féministes :

L'obtention du droit de vote en 1944 en France ne marque pas la fin de la lutte pour les droits des femmes.

Les droits civils, notamment pour les femmes mariées, doivent encore être obtenus. Il faut attendre 1965 et 1970 pour que les femmes mariées acquièrent l'autonomie sur leur compte en banque et ne nécessitent plus l'autorisation de leur mari pour travailler ou gérer leurs biens.

"On va devoir attendre 1965 et 1970 pour qu'il y ait des réformes qui viennent donner un statut d'adulte aux femmes mariées et aux femmes mères". L'autorité parentale remplace l'autorité paternelle en 1970.

Le documentaire évoque les différentes "vagues" féministes :

La première vague (début du XXe siècle) axée sur le droit de vote.

La deuxième vague (années 1970) axée sur la libération des corps et l'égalité des sexes.

La troisième vague (années 1990) marquée par l'approche intersectionnelle, reconnaissant le cumul des formes de domination (genre, race, classe, etc.).

Le mouvement #MeToo est présenté comme une évolution majeure, un mouvement mondial d'une ampleur inédite, bien que principalement circonscrit au monde occidental.

Le combat féministe actuel est de plus en plus perçu comme un "combat humaniste", incluant la question des masculinités et la nécessité de libérer les hommes des stéréotypes de performance et de non-émotion. Conclusion

L'histoire du droit de vote des femmes en Europe est une épopée longue et difficile, marquée par la persévérance de militantes qui ont dû affronter l'hostilité, l'humiliation, l'emprisonnement et même la violence d'État.

Si l'obtention du droit de vote a constitué une victoire majeure, elle n'était qu'une étape dans la quête d'une pleine égalité, les droits civils ayant dû être arrachés ultérieurement dans de nombreux pays.

La diversité des tactiques militantes, des approches nationales (radicalisme anglo-saxon versus approche réformiste suisse) et des temporalités souligne la complexité de ce processus historique.

Les combats actuels continuent d'élargir la réflexion, intégrant les questions d'intersectionnalité et de redéfinition des masculinités dans une perspective humaniste plus large.

La France, malgré son rôle dans la Révolution et sa représentation symbolique des femmes (Marianne), a été un des derniers pays à accorder ce droit fondamental, un paradoxe qui interroge.

Objet : Synthèse de l'audition d'Amélie Ebongué sur les effets psychologiques de TikTok sur les mineurs

Date : 28 novembre 2023

Source : Extraits de "Effets psychologiques de Tiktok sur les mineurs : Audition d'Amélie Ebongué à l'Assemblée"

Introduction :

• Cette note de synthèse présente les points clés abordés lors de l'audition de Madame Amélie Ebongué, experte en stratégie de contenu sur les réseaux sociaux et auteure de "Génération TikTok, un nouvel Eldorado pour les marques", devant la commission d'enquête sur les effets psychologiques de TikTok sur les mineurs.

L'audition visait à établir un diagnostic des effets de la plateforme, de leur champ et de leur ampleur. Madame Ebongué, après avoir prêté serment, a partagé son expertise sur l'évolution de TikTok, l'usage par les mineurs, la stratégie des marques et les enjeux de régulation.

Principaux thèmes et idées importantes :

Genèse et évolution de TikTok :

• TikTok est une application chinoise issue de Douyin, sa version originale.
• ByteDance a lancé sa version internationale en 2017.
• Sa fusion avec Musical.ly, centrée sur la création de vidéos courtes sur fond musical, a été déterminante.
• TikTok est passé d'un simple réseau social à une plateforme de divertissement planétaire.
• Le nombre d'utilisateurs a considérablement augmenté, atteignant plus d'un milliard aujourd'hui, soit l'équivalent d'Instagram.
• La plateforme séduit par sa fluidité et l'immédiateté interactionnelle.
• Citation clé : "TikTok historiquement c'est une application donc chinoise qui doit sa naissance à son modèle purement oriental qui est donc Douin sa version créée à l'origine... On est passé d'une moyenne de 800 millions d'utilisateurs pendant le confinement à plus d'un milliard aujourd'hui C'est l'équivalent d'Instagram en terme de de d'utilisateur."

Les mineurs et TikTok :

• La Génération Alpha (née entre 2010 et début 2020, âgée de 9 à 12 ans) est considérée comme la plus technophile.
• Cette génération est à l'aise avec les codes du numérique et est la plus "fertile" à son ère.
• Leur identité se construit au prisme du numérique.
• Un fléau répandu est l'inscription précoce sur la plateforme.
• L'âge légal d'utilisation en France est de 13 ans, mais une majorité d'utilisateurs mineurs mentent sur leur âge pour y avoir accès.
• Citation clé : "Mon deuxième point euh il va se poser sur la déformation d'usage... C'est le cas du fléo le plus répandu aujourd'hui sur cette plateforme à savoir l'inscription sur le réseau social de manière précoce Quand on se penche sur les conditions générales d'utilisation de TikTok en tout cas en France l'âge légal il est de 13 ans Euh c'est une majorité d'utilisateur qui euh va mentir pour pouvoir avoir accès à cette plateforme."

Impact psychologique et addiction :

• L'usage excessif et sans régulation des réseaux sociaux peut altérer le comportement et influencer l'humeur.
• Le design et l'expérience utilisateur de TikTok sont conçus pour susciter un plaisir constant.
• Cette attention répétitive crée des habitudes régies par le collectif et son influence, particulièrement chez les mineurs.
• L'addiction à l'application a des conséquences sociales.

• Des études ont démontré une altération du comportement chez les jeunes, provoquant des troubles anxieux et pouvant aller jusqu'au suicide.

• Citation clé : "En soit c'est l'usage des réseaux sociaux de manière excessive et sans régulation qui altère le comportement des individus et finalement va jouer et influencer l'humeur L'expérience utilisateur et le design de TikTok à titre d'exemple nous démontre bien qu'elle est conçue pour susciter en nous un plaisir constant Cette attention répétitive crée des habitudes régies par le collectif et sous son influence C'est donc le cas chez les mineurs."

• Citation clé : "Des études ont démontré qu'il y avait une altération du comportement chez les jeunes et qui provoquait des troubles anxieux et de de manière assez importante au niveau du comportement allant même jusqu'au suicide Euh et ça a d'ailleurs été le cas en France il y a il y a quelques temps Euh donc oui la plateforme a euh joué sur le le comportement de certains individus et chez certains jeunes."

L'algorithme et la régulation :

• La clé de voûte de l'algorithme reste un mystère, sa formule n'ayant jamais été communiquée par l'entreprise.
• TikTok met en ligne la manière dont les créateurs peuvent émerger, mais pas la formule de calcul elle-même.
• En France, TikTok limite certaines fonctionnalités pour les utilisateurs de moins de 13 ans (messages privés, vidéos en direct, monétisation).
• Il est nécessaire de renforcer la prévention auprès des parents, qui sont les principaux garants d'opinion.
• La régulation de l'outil passe essentiellement par ce biais, mais il faut aussi renforcer l'écoute des parents qui se sentent délaissés.
• Des solutions peuvent être développées dans le système éducatif, notamment par des programmes en cours d'éducation civique.
• Un tissu préventif national avec des acteurs éducatifs volontaires est nécessaire.
• Des outils pourraient être adaptés dans les kiosques publics.
• L'experte considère que l'initiative de l'Australie d'interdire l'accès aux réseaux sociaux aux mineurs de moins de 15 ou 16 ans est une très bonne démarche, bien qu'elle ne puisse se prononcer sur sa faisabilité technique ou légale. Elle pense toutefois que techniquement, cela est possible.

• La responsabilité est partagée entre les parents et la plateforme en matière de régulation.

• Citation clé : "L'addiction que l'application procure aux utilisateurs et particulièrement auprès des plus jeunes a des conséquences sociales On ne peut pas exclure le caractère négatif de cette dernière puisque la clé de voûte de son algorithme aujourd'hui reste un mystère Aujourd'hui il faudra renforcer la prévention auprès des parents qui sont les principaux garantis d'opinion en particulier chez les enfants La régulation de l'outil elle se fait essentiellement par ce biais là Mais il faudra aussi renforcer l'écoute parce que la réalité c'est que beaucoup de parents se sentent laisés face à l'usage des plateformes sociales et de tout l'écosystème en général."

• Citation clé : "Toutefois que je trouve que c'est une excellente démarche C'est une très belle démarche." (À propos de la législation australienne).

• Citation clé : "Maintenant la responsabilité elle est partagée Oui le parent est responsable de ce que son enfant fait sur une plateforme sociale mais il y a aussi une notion de régulation et dans le cadre dans lequel c'est circonscrit."

Stratégies de marques et ciblage des mineurs :

• TikTok cherche à avoir un virage éducatif, proposant des contenus sur des sujets variés (culture, sport, littérature, sciences) et soutenant le hashtag populaire #apprendresurTikTok.
• Madame Ebongué, dans son activité de conseil, n'a pas vu de stratégies directes de marques visant le public très jeune (moins de 13 ans) sur le marché français.
• Selon elle, les mineurs sont encore en phase de stabilisation en termes de maturité et d'influence pour être une cible directe pour les marques.
• Elle n'a jamais été approchée pour aider à cibler des mineurs.
• Le DSA (Digital Services Act) interdit aux plateformes d'aider les annonceurs à cibler spécifiquement les mineurs. Les annonceurs sont plus vigilants, mais beaucoup n'utilisent pas encore la plateforme publicitaire de TikTok.
• Pour cibler une audience spécifique, y compris potentiellement des mineurs, il faut avoir recours à la plateforme de monétisation de TikTok et acheter de l'espace publicitaire, ce qui permet de cibler par centres d'intérêt et âge. Cette option n'est pas accessible à toutes les marques.

• Il existe une tendance croissante d'enfants influenceurs dont les parents approuvent et amplifient la présence sur la plateforme, les incitant à être plus commerciaux.

• Citation clé : "En ce qui concerne les marques d'un point de vue stratégique les marques qu' elles soit dans le secteur de la culture de la mode de la beauté ou même du sport quand on regarde sur le marché français je n'ai pas vu à ma connaissance des stratégies directes pour viser ce jeune public qui est quand même très jeune Donc en terme de maturité et d'influence ils sont pas encore stabilisés sur ces sujets Donc non je n'ai pas vu d'exemples de ce type."

• Citation clé : "Il vous a demandé si vous saviez si des des marques des des des vendeurs de produits peu importe avait recours au ciblage des mineurs Vous avez répondu que vous ne faisiez pas de ciblage des mineurs et et heureusement puisque c'est interdit comme il l'a rappelé Mais est-ce que vous avez déjà été sans que vous ne le fassiez mais est-ce que vous avez déjà été approché ne serait-ce qu'une fois sans nous donner le nom évidemment après vous êtes sous serment vous nous dites oui ou non on n demandera pas plus mais est-ce que vous avez déjà été approché par une marque ou je ne sais qui avec cette question de savoir est-ce que vous auriez la possibilité de m'aider à toucher des mineurs du tout Non du tout Je n'ai jamais été approché pour cibler des mineurs du tout Non pardon désolé."

• Citation clé : "dans ce cas si on souhaite avoir un ciblage beaucoup plus spécifique il faudrait avoir recours à une plateforme donc de monétisation et donc faire appel à l'achat d'espace sur TikTok qui permet avec un certain nombre de critères de cibler les centres d'intérêt et aussi en fonction de l'âge Voilà comment c'est c'est possible de le faire Mais seules certaines marques peuvent se permettre cette cette étape supplémentaire dans leur stratégie d'acquisition au global."

Impact sur la durée d'attention :

• L'habituation aux contenus courts et percutants (vidéos de 15 secondes, puis 1 minute, maintenant jusqu'à 10 minutes) pourrait entraîner une difficulté à se concentrer sur la durée, notamment chez les enfants.

• Cela pourrait impacter leur capacité à suivre des leçons plus longues, le cerveau s'habituant à obtenir l'information rapidement.

• Citation clé : "Est-ce que le fait de les habituer à des contenus d'une minute ou 1 minute 30 parce qu'il faut que ce soit percutant et que tout de suite l'enfant capte le message est-ce que selon vous ça n'entraîne pas chez les enfants une habitude à se concentrer une minute à avoir tout de suite l'histoire complète ce qu'ils ont envie d'avoir à la fin de l'histoire est-ce que ça n'engendre pas du coup une habitude à ne plus se concentrer et à avoir des difficultés dans les cours à suivre une leçon de plus de 10 minutes parce que bah voilà le le cerveau se formalise à suivre un contenu d'une minute ou 1 minute 30 Merci pour vos questions Je vais tenter d'y répondre avec précision Euh sur la première question Euh TikTok euh aujourd'hui c'est vrai que il propose des contenus donc comme je vous disais éducatifs Ça c'est leur volonté et c'est leur stratégie je dirais éditoriale par marché Euh de la même manière que aujourd'hui tout utilisateur est assez responsable de ce qu'il souhaite proposer et ce qu'il souhaite diffuser Euh la particularité de TikTok c'est qu'aujourd'hui ils ont commencé avec un produit vidéo donc qui est une vidéo courte qui est passée de 15 secondes à 1 minute maintenant jusqu'à 10 minutes Ils proposent différentes typologies de de formats comme on les appelle avec un format dit live qui est donc ce format qui attire beaucoup la jeunesse particulièrement les mineurs..." (La réponse de l'experte sur ce point précis n'est pas explicitement dans l'extrait fourni).

Autres points soulevés :

• Les tendances de contenu sur TikTok évoluent, incluant désormais le sport (#JeuxOlympiques), la littérature (#Booktok), l'écologie (#écogestes).
• Les artistes utilisent la plateforme pour la visibilité, mais cela n'est pas nécessairement significatif en termes de revenus directs.
• TikTok propose des formats variés, y compris le format "live" qui est très populaire chez les jeunes et permet une rémunération en fonction du classement.

• La nouvelle plateforme TikTok Shop, lancée récemment en France, permet l'achat direct de produits dans l'application. Des inquiétudes subsistent quant à la contrefaçon sur cette nouvelle fonctionnalité, pour laquelle il n'y a pas encore de mesures de contrôle claires.

• Citation clé : "Et par exemple qu'est-ce que vous leur conseillez aux artistes alors moi je leur conseille d'avoir une stratégie cohérente sur les différentes plateformes et de pas capitaliser uniquement sur l'une d'entre elles Souvent on a envie d'avoir une présence très forte sur TikTok ce qui n'est pas forcément efficace derrière en terme de génération de de revenus puisque les artistes se rémunèrent de différents moyens avec le ticketing le concert mais aussi par la vente de merch de produits dérivés et pas uniquement avec ce qu'il diffuse sur les plateformes comme Spotify Donc c'est vrai qu'aujourd'hui les réseaux sociaux c'est un vrai levier pour eux pour vendre derrière mais c'est pas nécessairement significatif en terme de revenu."

• Citation clé : "Depuis lundi est apparue la plateforme Tit Shop Cette plateforme on le voit déjà aux États-Unis au 3e trimestre 2024 elle a déjà beaucoup plus de vente que Shing ou que Sephora Elle utilise des micro voire des nanoinfluenceurs c'estàdire les nanos moins de 10000 abonnés Est-ce que donc la stratégie des marques va changer pour accrocher sur ce nouveau réseau que les TikTok et moi ma question c'est principalement sur la contrefaçon..."

Conclusion :

L'audition met en évidence les enjeux complexes liés à l'utilisation de TikTok par les mineurs.

La plateforme, par son design et son fonctionnement, est particulièrement addictive et peut avoir des effets néfastes sur la santé mentale des jeunes.

Bien que TikTok s'efforce de promouvoir des contenus éducatifs et mette en place certaines limitations pour les utilisateurs mineurs, la problématique de l'accès précoce et du manque de régulation de l'usage demeure cruciale.

La responsabilité partagée entre la plateforme, les parents et le système éducatif est soulignée comme essentielle pour protéger les mineurs.

La stratégie des marques ne semble pas, pour l'instant, cibler directement les très jeunes en France selon l'experte, mais la possibilité de ciblage via la plateforme publicitaire de TikTok existe.

L'émergence de TikTok Shop soulève de nouvelles interrogations, notamment en matière de contrôle de la contrefaçon. La question de l'impact des formats courts sur la durée d'attention des enfants reste également un point d'inquiétude.

Madame Ebongué a également indiqué qu'elle était ouverte à compléter ses échanges via le questionnaire envoyé par la rapporteure.

Document de Synthèse : Audition de Rayna Stamboliyska sur les Effets Psychologiques de TikTok sur les Mineurs

Source : Excerpts from "Rayna Stamboliyska sur les effets psychologiques de Tiktok sur les mineurs"

Auditionné : Rayna Stamboliyska, Consultante expert en gestion des risques cybersécurité et affaires européennes, auteur de "La Face Cachée d'Internet".

Contexte : Audition dans le cadre d'une commission d'enquête parlementaire sur les effets psychologiques de TikTok sur les mineurs.

Thèmes Principaux :

• Manque de solutions technologiques pour la protection individuelle en ligne : Rayna Stamboliyska souligne un manque d'outils et d'incitations pour développer des solutions de cybersécurité et de protection de la vie privée destinées aux individus, et encore moins aux publics spécifiques comme les mineurs.

L'accent est principalement mis sur la protection organisationnelle.

• Défis de l'application de la réglementation (RGPD, DSA) :

L'experte met en lumière les difficultés rencontrées pour traduire les cadres juridiques (comme le RGPD ou le DSA) en mesures technologiques concrètes et accessibles aux individus. Elle pointe du doigt la complexité des procédures pour faire valoir ses droits face aux plateformes et le manque d'incitations pour les fournisseurs technologiques à développer des solutions respectueuses des règles. * Responsabilité partagée dans la protection des mineurs en ligne :

La protection des mineurs est une responsabilité partagée entre les parents, les législateurs et les plateformes. Les plateformes ont une responsabilité significative dans la manière dont leur "ingénierie technologique" permet ou non la diffusion de contenus problématiques et d'effets d'entraînement négatifs. * Impact des réseaux sociaux (TikTok) sur la santé mentale des jeunes :

L'audition aborde la résurgence de phénomènes négatifs, tels que les troubles du comportement alimentaire (mouvements proana), accentués par la viralité et le format vidéo de TikTok.

L'experte souligne l'impact potentiel de l'exposition à certains contenus sur la perception de l'image de soi chez les jeunes. Elle attire également l'attention sur les jeunes garçons et leur exposition aux contenus toxiques de la "manosphère".

• Nécessité d'une sensibilisation ciblée :

Il est important d'aller au-delà de la prise de conscience générale et de développer des campagnes de sensibilisation efficaces qui utilisent des canaux et des moyens de communication compris par les jeunes, idéalement via des personnes qu'ils écoutent et auxquelles ils font confiance.

Idées ou Faits Importants et Citations :

• Manque de solutions individuelles :

"nous avons vont très peu en fait d'incitative à faire de la cybersécurité pour les particuliers"

• "il existe très peu de solutions technologiques qui permettent qui s'adressent en fait de manière dédiée aux particuliers aux individus Et c'est encore moins le cas dès qu'il s'agit en fait de bah de public particulier que ce soit les personnes pardon plus âgées ou les personnes mineures"

• Difficulté de traduire la réglementation en solutions technologiques :

"on a très peu de d'ingénierie si vous voulez qui est faite pour traduire des des des cadres juridiques tel que le RGPD ou autres vers des publics individuels vers des particuliers" * Sur l'application du RGPD et du DSA :

"on a en fait toujours cette espèce de de de plafond de verre si vous voulez qui est que les règles c'est bien les faire comprendre au principaux concernés c'est une autre autre chose donner les leviers d'action pour se saisir en fait de de la manière la plus pertinente de mobiliser ces exigences là vis-à-vis des plateformes Çaen est encore une autre" * Complexité des procédures (RGPD) :

Rayna Stamboliyska décrit le parcours complexe d'un plaignant pour faire valoir ses droits garantis par le RGPD, impliquant des intermédiaires et des autorités de contrôle dans d'autres pays.

• "ce n'est pas aujourd'hui on a la situation où des plaignants en Grèce saisissent un membre de la société civile qui est Noé donc et Marx Schrems en l'occurrence pour par son entreprise pour que lui saisisse l'ACNIL irlandaise pour en fait interroger et provoquer un contrôle de TikTok sur le volet transfert des données à caractère personnel vers la Chine"

• Résultats des audits DSA :

Les premiers rapports d'audit DSA de fin 2024 montrent que la plupart des grandes plateformes (X, Méta, TikTok) ont des notes négatives concernant leur conformité aux exigences du DSA, seule Wikipédia obtenant une note positive.

• "sur toutes les plateformes grandes plateformes audité seul Wikipédia a une note positive de la part d'auditeur tiers les X méta enfin Instagram Facebook TikTok ont tous des notes négatives"

• Manque d'application des obligations :

Malgré les obligations du RGPD, comme la lisibilité des politiques de confidentialité, l'experte constate un manque d'application et de sanctions.

• "aujourd'hui est-ce qu'on a fait en fait je tenter un audit est-ce qu'on a puni ces organismes-là qui continuent en fait d'avoir des politiques de confidentialité écrit en Times New Roman 8 par des juristes pour des juristes non"

• Résurgence et amplification des phénomènes négatifs sur TikTok :"Vous avez en fait la résurgence de des phénomènes proana notamment qui touchent les les jeunes filles Donc tout ce qui est trouble du comportement alimentaire Mais pourquoi je dis résurgence parce que ça fait une bonne dizaine d'années en fait qu'on avait déjà des sites et des forums Proana"

• La différence avec les anciens forums réside dans la "volumétrie et une viralité de de ces contenusl qui est beaucoup plus importante avec TikTok" et le "véhicule média qui est le l'image qui est le la vidéo et cetera qu'on avait beaucoup moins en fait il y a 10 ans sur un site plus ou moins statique sur ou des choses passées par le par le textuel"

• L'impact de la vidéo sur la perception de l'image de soi est "extrêmement prignant et extrêmement fort".

• Lien entre usage de TikTok et santé mentale : Bien que l'experte soit prudente quant à l'établissement d'un lien de causalité direct, elle reconnaît que des études montrent que "l'image qui est véhiculée par le biais de multi contenu multimédia sur les réseaux sociaux a des impacts réels sur la perception de l'image de soi et sur son altération potentielle par les personnes qui le reçoivent".

• Elle cite des études montrant que "l'impact est assez lié de la vision de soi de la dépréciation de de de de son image chez les jeunes lorsqu'il y a une exposition à certains types de contenu sur TikTok".

• Prise en compte des jeunes garçons et de la "manosphère" :

L'experte souligne l'importance de ne pas oublier les jeunes garçons et leur exposition croissante à des contenus véhiculant une vision toxique des relations de genre, citant l'influence d'individus comme Andrew Tate.

Points en Suspension ou pour Suivi :

• La question de savoir si l'affichage obligatoire des "notations" des plateformes (similaire au Nutriscore) serait efficace pour inciter les utilisateurs à changer leurs pratiques et si cela irait au-delà d'un simple marquage.

• La possibilité technique d'empêcher l'accès des mineurs de moins de 13 ans aux plateformes comme TikTok.

L'experte reste prudente quant à l'utilisation de l'IA pour cela, privilégiant potentiellement des technologies plus éprouvées, tout en soulignant le défi de l'imposition de telles solutions aux plateformes privées.

• Des informations complémentaires par écrit sont attendues concernant les solutions technologiques pour la protection des usagers et les options législatives possibles.

Conclusion Provisoire :

L'audition de Rayna Stamboliyska met en évidence les lacunes actuelles dans la protection des individus en ligne, notamment les mineurs, en raison d'un manque de solutions technologiques individuelles et des difficultés d'application effective de la réglementation existante.

La responsabilité est complexe et partagée, mais les plateformes jouent un rôle crucial en raison de leur ingénierie et de la viralité qu'elles engendrent.

L'impact potentiel sur la santé mentale des jeunes est réel et nécessite une approche multiple incluant une sensibilisation ciblée, une application plus ferme des règles et une réflexion sur les moyens techniques de protection.

Synthèse de l'audition de Bruno Patino à l'Assemblée Nationale sur les effets psychologiques de TikTok sur les mineurs

Date de l'audition : Non précisée dans l'extrait (implicite dans le titre et le contexte d'une audition parlementaire)

Auditionné : Bruno Patino, Président d'Arte, auteur d'ouvrages sur les usages du numérique.

Objet de l'audition : Effets psychologiques de TikTok sur les mineurs.

Principaux Thèmes et Idées Clés

• L'intervention de Bruno Patino s'articule autour de plusieurs axes majeurs concernant l'impact des réseaux sociaux, et plus particulièrement de TikTok, sur notre espace public et sur les individus, notamment les plus jeunes. Il aborde les aspects économiques, structurels, et leurs conséquences en termes d'addiction, de perte de repères, et de responsabilité.

L'Économie de l'Attention et le Modèle Publicitaire :

• Patino insiste sur le fait que les réseaux sociaux ont été construits autour d'un modèle économique basé sur la capture de l'attention de l'utilisateur afin de maximiser les revenus publicitaires.
• L'objectif est de faire passer un temps toujours croissant sur ces plateformes.
• Ce modèle a conduit au développement d'outils de "captologie", visant à rendre les utilisateurs dépendants.
• Patino affirme que cette assuétude n'est pas un accident mais une conséquence directe du modèle économique : "rien de tout ça n'est un accident en réalité c'est une conséquence absolue du modèle économique de de ces réseaux sociaux".

Les Réseaux Sociaux comme Espaces Sans Contexte :

• Un point crucial et souvent sous-estimé selon Patino est que les réseaux sociaux sont des lieux "sans contexte".
• Contrairement aux interactions traditionnelles où le contexte (bistro, audition parlementaire, amphithéâtre universitaire) donne un sens et un filtre à la conversation ou à l'information, sur les réseaux sociaux, tous les contextes se mélangent.
• Il incombe à l'utilisateur de devoir discerner la nature du message et de la conversation, ce qui est particulièrement difficile.
• Patino souligne que "un réseau social et je pense que c'est très très important de le comprendre c'est un endroit sans contexte où en réalité c'est à l'utilisateur lui-même de devoir comprendre quelle est la nature de la conversation auquelle il assiste et quelle est la nature du message auquel il est soumis".

L'Algorithme comme Organisateur Secret et Puissant :

• Les utilisateurs prennent de plus en plus conscience que leur flux d'informations n'est pas aléatoire mais organisé par un algorithme.
• Cet organisateur est déterminé par des raisons économiques (maximisation des revenus publicitaires) et potentiellement idéologiques (comme observé avec Twitter/X).
• L'algorithme priorise les messages selon leur "efficience économique", c'est-à-dire ceux qui attirent rapidement l'attention et sont partagés facilement.
• Patino note que les messages émotionnels sont les plus efficaces économiquement, et que "aujourd'hui l'émotion qui est qui provoque le plus de viralité le plus de réaction rapide [...] c'est la rage et la colère".
• L'algorithme n'est pas neutre ; il accélère et amplifie certains messages choisis, engageant ainsi la responsabilité de la plateforme.

La Question de la Responsabilité des Plateformes :

• Patino remet en cause la notion de neutralité des plateformes, souvent justifiée par des textes comme la Section 230 aux États-Unis, qui les considèrent comme de simples hébergeurs (comparaison avec le facteur non responsable du contenu des lettres).
• Parce qu'elles ont un organisateur (l'algorithme) qui accélère et amplifie les contenus, elles ne sont pas neutres et ont une responsabilité.
• La difficulté réside dans la qualification juridique de cette responsabilité, qui n'est ni celle d'un simple hébergeur ni celle d'un éditeur traditionnel. Patino pose la question : "comment on appelle cette responsabilité là comment on qualifie ce terme-là".

Le Déficit de Souveraineté Numérique de l'Europe :

• Patino estime qu'il est difficile pour une nation ou pour l'Europe d'être souveraine sans maîtriser certains des outils qui mettent les gens en relation.
• Il utilise l'analogie de La Poste : si Elon Musk en devenait propriétaire, cela poserait question quant à la neutralité de la distribution du courrier.
• L'absence d'outils numériques souverains place l'Europe dans une position de faiblesse face aux plateformes, rendant plus difficile l'imposition d'une régulation.

Pistes de Régulation et d'Action :

• Responsabilité algorithmique : Il ne s'agit pas de transparence (souvent impossible ou secrète) mais de rendre les plateformes responsables des impacts de leurs algorithmes, notamment sur la santé mentale. Comparable à la responsabilité des producteurs d'aliments industriels pour leurs effets sur la santé. C'est une piste envisagée dans le DSA européen.
• Pluralisme des algorithmes : Permettre aux utilisateurs de choisir différents algorithmes d'organisation de leur flux, potentiellement proposés par des acteurs variés (médias, etc.), pour réintroduire du contexte.
• Éducation : Le point le plus important. Apprendre la maîtrise de la connexion (temps et lieux), la compréhension du fonctionnement des algorithmes, et surtout développer une "culture contextuelle et une culture du libre arbitre" pour discerner la nature des messages. Patino plaide pour des lieux et des temps sans connexion (école, lecture, dialogue).

TikTok : L'Ultime Produit d'Addictologie :

• TikTok est décrit comme la "version ultime des produits d'addictologie".
• Il offre un "rail de passivité sucrée" avec un visionnage infini de formats courts, stimulant la "boulimie" de contenu sans satisfaction réelle.
• L'efficacité de son algorithme le rend extrêmement intrusif et puissant en termes de dépendance. Patino observe que "TikTok c'est la formule parfaite parce que elle vous met dans un rail à un moment donné qui est un rail de passivité sucrée en réalité".
• Les outils de contrôle parental ou de limitation de temps proposés par la plateforme sont jugés antinomiques avec son modèle économique, d'où un doute sur leur efficacité réelle.

• TikTok a modifié profondément les comportements en peu de temps, notamment concernant la lecture, l'attention, et le rapport à l'autre, ce qui est considéré comme "tout à fait inquiétant". La Vulnérabilité des Mineurs et la Question de l'Interdiction :

• Les mineurs, particulièrement fragiles, sont la cible principale des impacts négatifs.

• La "puberté numérique" précoce (smartphone dès 9 ans) est source d'inquiétude.
• Patino considère qu'il faut une "surprotection" avant 15-16 ans. Il exprime un doute entre l'interdiction totale (potentiellement contournée) et la modération/éducation. Il déclare : "personnellement je je ne sais pas je sais je je il y a une partie de moi qui vous dit l'interdiction avant 18 ans pour TikTok est une bonne chose mais en même temps une autre partie qui se dit que quand même on aurait un outil beaucoup moins létal y compris pour tout le monde ça serait pas mal aussi".
• L'éducation est essentielle car les parents ne sont pas toujours conscients des dangers, parfois même fiers de la précocité numérique de leurs enfants.
• Un diagnostic médical clair sur le lien de causalité entre l'usage de TikTok et les problèmes de santé mentale pourrait aider à sensibiliser le grand public, comme cela a été fait pour le tabac ou l'alcool.

Conclusion :

• Bruno Patino dresse un tableau préoccupant de l'impact des réseaux sociaux, en particulier de TikTok, soulignant leur modèle économique basé sur l'addiction, leur structure sans contexte qui désoriente les utilisateurs, et la puissance invisible de leurs algorithmes.

Il met en lumière la vulnérabilité accrue des mineurs face à ces mécanismes.

Tout en exprimant des doutes sur l'efficacité des interdictions totales (qui pourraient être contournées), il plaide pour une combinaison de responsabilité algorithmique, de pluralisme des algorithmes et, surtout, une éducation massive pour développer l'esprit critique et la maîtrise de l'usage numérique, considérant que la souveraineté numérique est une condition préalable à une régulation efficace.

L'intelligence artificielle est mentionnée comme un sujet émergent qui risque d'amplifier encore les biais dans le rapport à la réalité.

Note de Synthèse : L'Impact des Réseaux Sociaux sur la Médecine

Source : Excerpts from "Réseaux sociaux : comment ils changent la médecine | État de santé" (LCP Assemblée Nationale, en partenariat avec MGEN)

Date : 2025 Thème Principal : L'exploration de l'impact des réseaux sociaux sur le domaine de la médecine, mettant en lumière à la fois les opportunités (information, prévention, soutien aux patients) et les défis (désinformation, régulation).

Idées Clés et Faits Importants :

Adoption des réseaux sociaux par les professionnels de santé :

• Un nombre croissant de médecins et autres professionnels de santé utilisent les plateformes comme Instagram, Facebook, TikTok et YouTube pour diffuser des messages de santé publique, réfuter les idées reçues et partager les coulisses de leur métier.

• Le Dr Olivier Marpeau, chirurgien-gynécologue et "influenceur santé" sous le nom "mon.gynéco" (2,5 millions d'abonnés cumulés), est cité comme un exemple éminent de cette tendance. Il a commencé à utiliser les réseaux sociaux pour répondre aux questions fréquentes de ses patientes de manière plus large.

• Selon le Dr Marpeau, l'activité sur les réseaux sociaux est un "énorme boulot" qui nécessite de trouver des idées, d'écrire des textes en vérifiant les sources, de monter des vidéos et d'avoir une stratégie d'engagement.

Les raisons derrière l'engagement des professionnels de santé :

• Combler un manque d'information : Constatant dans leurs cabinets l'existence de "réseaux parallèles d'informations sur la santé", les médecins souhaitent "aller jouer sur leur terrain de jeu" pour proposer des informations vérifiées.
• Toucher un public plus large, notamment les jeunes : Le Dr Dachicourt, membre du syndicat des jeunes médecins généralistes, souligne que les réseaux sociaux sont devenus le "canal d'information principal" pour les jeunes, une population qu'ils ont du mal à toucher en consultation.
• Lutte contre la désinformation : En occupant le terrain avec des informations fiables, les professionnels de santé cherchent à "éteindre ces charlatans" qui diffusent des messages potentiellement dangereux, souvent motivés par des préoccupations commerciales. Le Dr Dachicourt utilise l'intelligence artificielle (deepfake) pour démonter les conseils dangereux diffusés par des influenceurs peu scrupuleux.

Influence et rémunération des professionnels de santé sur les réseaux :

• Le Dr Marpeau revendique le terme "influenceur", le considérant comme une "vraie influence" qui peut être "très positive pour changer les comportements des gens, leur apporter des informations vérifiées qui vont impacter leur vie de manière positive."
• Les professionnels de santé ne peuvent pas donner de "conseil médical du tout, personnalisé" ni faire la "promotion de dispositifs médicaux ou de médicaments, citer de marques". Ces règles sont basiques.
• Ils peuvent en revanche faire des "collaborations commerciales" ou "collaborations rémunérées" avec des marques, à condition qu'elles soient "déclarées en toute transparence". La rémunération peut provenir de ces partenariats ou, selon les plateformes, du nombre de vues (TikTok, YouTube).

Les patients prennent la parole et partagent leur expertise : * Grâce aux réseaux sociaux, "les patients aussi prennent la parole". Cela permet aux autres patients de "ne se sentir pas seuls", de se rassurer et de se projeter. * Elise et Anne, jumelles diabétiques, ont créé une chaîne YouTube pour partager leur expérience quotidienne avec le diabète de type 1. Elles soulignent que la "parole de patient à patient" est différente de celle de médecin à patient, car elle met l'accent sur l'aspect "pratique" et l'expertise du vécu quotidien. * L'expérience des patients partagée en ligne est jugée "très importante pour les femmes et les hommes qui souffrent de cette maladie, de voir comment ça peut se passer au quotidien et comment transformer une maladie chronique en quelque chose... qui ne doit pas gêner dans la vie de tous les jours." * Les "patient(e)s expertes" deviennent des "partenaires pour la prise en charge, notamment des maladies chroniques", participant même à l'élaboration des "recommandations officielles".

Les risques et la désinformation sur les réseaux sociaux :

• Les réseaux sociaux sont qualifiés de "temple des fake news". Une étude IFOP de 2023 indique qu'un tiers des 18-27 ans pensent pouvoir avorter sans risque avec des produits à base de plantes, un exemple de fausse information circulant en ligne.

• Des "remèdes dits 'de grand-mère'" dangereux resurgissent, promus par de jeunes influenceurs, comme l'ingestion de bleu de méthylène ou le fait de se scotcher la bouche pour dormir.

• Le risque principal est l'incapacité à identifier l'émetteur de l'information ("On ne sait pas qui nous parle, quels sont ses diplômes, quelle est sa formation, est-ce que c'est des messages qui sont vérifiés."). La "notoriété" seule peut donner une force d'impact dangereuse.

• La désinformation influence les patients avant même la consultation. Le Dr Marpeau observe que les femmes arrivent en consultation avec des "idées très arrêtées" basées sur les informations trouvées en ligne, ce qui "a changé la manière de mener la consultation".

Régulation et solutions face à la "jungle" des réseaux sociaux :

• Une loi de 2023 a été adoptée pour tenter de "faire le ménage" et "codifier cette activité santé sur les réseaux sociaux". Le député Arthur Delaporte, qui a travaillé sur cette loi, estime que le bilan est "en demi-teinte" mais qu'il y a désormais une "règle". La loi a notamment clarifié l'interdiction de la publicité pour la chirurgie esthétique.

• Cependant, son application est jugée "difficile". Le député demande "des moyens, des moyens de contrôle", une "efficacité dans les contrôles" et des "sanctions symboliques et exemplaires".

• Le Dr Marpeau estime que les réseaux sociaux sont "toujours" une jungle, voire "de pire en pire", notamment avec les changements dans les règles de vérification de Meta.

• Il propose deux solutions : la "sanction" (comme le député) et surtout la "labellisation" des contenus sérieux et la mise en avant des professionnels qualifiés. Il cite l'exemple de Google/YouTube qui vérifient les diplômes et numéros RPPS des médecins.

• Les réseaux sociaux comme vecteur de santé publique et d'influence politique :

• Le Dr Marpeau a été contacté par l'Élysée pour un message de prévention sur la vaccination contre le papillomavirus, qu'il juge "très efficace".

• Les réseaux sociaux sont considérés comme un "très bon vecteur" pour les messages de santé publique et pour "accélérer" la prévention en France.

• L'activité en ligne ouvre des "fenêtres" d'accès au "cercle de décision, au cercle politique". Le Dr Marpeau est régulièrement contacté par des députés pour donner son avis sur des propositions ou projets de loi liés à la santé des femmes, car il peut transmettre ce qu'il entend de sa communauté.

En résumé :

L'émission met en évidence que les réseaux sociaux transforment profondément la médecine.

Ils offrent aux professionnels de santé une plateforme puissante pour informer, éduquer et lutter contre la désinformation, atteignant notamment des publics moins présents dans les cabinets médicaux.

Parallèlement, les patients y trouvent un espace d'échange et de soutien mutuel, partageant leur expertise du vécu quotidien et devenant de plus en plus des partenaires reconnus dans la prise en charge des maladies chroniques et l'élaboration de recommandations.

Cependant, cette nouvelle ère pose d'énormes défis en matière de vérification des informations, de régulation des influenceurs et de lutte contre les messages dangereux ou frauduleux.

Si une loi existe pour encadrer cette activité, son application reste complexe, et des solutions comme la labellisation des contenus sérieux sont explorées pour renforcer la confiance et la fiabilité de l'information santé en ligne.

L'influence des professionnels de santé sur les réseaux peut même déborder sur le domaine politique, leur donnant une voix dans les débats législatifs sur la santé.

Note d'Information : Analyse du Documentaire "Citoyennes !" et de la Discussion sur les Droits des Femmes en France

Source : Extraits de "Citoyennes ! | ZED - Zone d'éducation documentaire"

Date : 2025 Objet : Synthèse des thèmes principaux, des idées clés et des faits importants tirés d'une discussion autour du documentaire "Citoyennes !" et des droits des femmes.

Participants clés :

• Jean-Frédéric Thibau : Réalisateur du documentaire "Citoyennes !"
• Anne-Cécile Mailfert : Présidente de la Fondation des Femmes
• Élèves du Collège Moulinj à Colombe

Résumé Exécutif :

• Ce document analyse une discussion entre le réalisateur du film "Citoyennes !", la présidente de la Fondation des Femmes et des élèves de collège, explorant l'histoire du vote des femmes en France, les combats féministes passés et présents, les inégalités persistantes malgré l'égalité de droit, la division au sein du mouvement féministe, l'importance du collectif et le rôle des hommes dans la lutte pour l'égalité.

La discussion met en lumière le décalage entre l'image symbolique de la France et la lenteur historique de l'acquisition de droits fondamentaux pour les femmes, tout en soulignant les défis actuels, notamment la montée du masculinisme et des contenus anti-féministes sur les réseaux sociaux.

Thèmes Principaux :

• L'histoire lente et difficile du droit de vote des femmes en France : Le documentaire "Citoyennes !" met en évidence le fait que la France, malgré une image symbolique forte de figures féminines comme Marianne, a été l'un des derniers pays européens à accorder le droit de vote aux femmes, en 1944, soit près de 80 ans avant la discussion.
• Les combats persistants pour l'égalité : Les intervenants soulignent que l'histoire des femmes est marquée par une lutte continue pour leurs droits et que cette vigilance est toujours nécessaire aujourd'hui.
• Le décalage entre l'égalité de droit et l'égalité réelle : Malgré l'égalité inscrite dans la loi française, les élèves et Anne-Cécile Mailfert constatent des inégalités sociales et comportementales persistantes dans la vie quotidienne.
• La division et les défis au sein du mouvement féministe : La discussion aborde pourquoi certaines femmes ne se mobilisent pas ou s'opposent au féminisme, évoquant la peur, les difficultés personnelles ou le calcul stratégique.
• L'importance du collectif et du soutien mutuel : L'expérience personnelle d'Anne-Cécile Mailfert met en évidence la nécessité de s'organiser collectivement pour défendre ses droits face aux risques de violence et d'isolement.
• Le rôle des hommes dans le féminisme : Il est reconnu que les hommes peuvent et doivent être féministes ("pro-féministes" ou "alliés"), en soutenant les femmes, en éduquant les autres hommes et en remettant en question les normes de masculinité traditionnelles.
• La montée du masculinisme et des contenus anti-féministes sur les réseaux sociaux : Ce phénomène récent et dangereux est identifié comme un nouveau défi majeur, ciblant particulièrement les jeunes hommes avec des discours machistes et régressifs, et les jeunes femmes avec des contenus prônant la soumission.

Idées Clés et Faits Importants :

• Lenteur du droit de vote en France : Jean-Frédéric Thibau explique son étonnement de découvrir que la France a voté le droit des femmes en 1944, se classant 56ème, bien après la plupart des pays européens qui l'avaient fait après 1918. Il cite : "on arrive en 56e position la France pratiquement toute l'Europe avait voté le vote des femmes après la guerre de 14 donc en 1918 et nous on arrive en en 44 donc il y a un truc et je me suis dit qu'est-ce qui a buggé ?".
• Les suffragettes et la violence : L'étonnement face à la violence subie par les suffragettes anglaises, contraintes d'apprendre le jiu-jitsu pour se défendre contre la police, est souligné : "j'ai surtout été très étonnée par euh les suffragettes anglaises et par cette violence invraisemblable les suffragettes anglaises sont régulièrement arrêtées et violentées par les forces de l'ordre et certaines d'entre elles apprennent le jug dessus afin de pouvoir terrasser les policemanes troposlés elles apprennent le jug dessus pour pouvoir se défendre".
• Le combat permanent : Anne-Cécile Mailfert insiste sur la nécessité d'une vigilance constante : "faut rester vigilante et il faut continuer aussi à se battre aujourd'hui et peut-être dans les années à venir aussi pour défendre nos droits donc il faut pas penser que ce qu'on a une fois qu'on l' on l'a pour toujours l'histoire des femmes elle montre qu' a des moments c'était mieux c'était moins bien et puis en fait les femmes elles ont dû se bagarrer pour faire en sorte d'être les égals des hommes".
• Absence de musée de l'histoire des femmes : L'absence d'un lieu institutionnel dédié à l'histoire des femmes et du féminisme en France est un fait marquant, contrastant avec l'existence de musées sur des sujets très variés. Anne-Cécile Mailfert mentionne : "il y a je sais pas combien de musées du sabot du Camemberbert maison de l'eau de la terre de la mer de tout ce que vous voulez mais il y a pas de musée des femmes il y a pas de musée de l'histoire des femmes en France il y a pas de musée de l'histoire du féminisme encore moins".
• L'égalité de droit vs. l'égalité réelle : Il est clairement établi que l'égalité légale ne se traduit pas toujours en égalité dans la vie de tous les jours. Anne-Cécile Mailfert explique : "dans la Constitution française c'est écrit que globalement je le pour résumer on n pas le droit de discriminer quelqu'un en fonction de son sexe donc normalement quand on est une femme ou un homme en France on a le même droit dans la loi après comme vous avez pu le constater par vous-même malheureusement dans la vraie vie c'est pas tout à fait comme ça".
• La sexualité comme point de cristallisation des inégalités : L'expérience personnelle d'Anne-Cécile Mailfert au collège autour de la question de la masturbation féminine illustre comment la sexualité peut révéler et exacerber les inégalités de genre et entraîner des violences. Elle décrit le harcèlement subi : "les insultes ont commencé à fuser contre moi... j'ai dû changer de collège parce qu'en fait j'étais insultée tous les jours tous les matins tous les midis tous les soirs dès que j'étais dans le couloir toutes les classes c'était Anne Cécile qui avait dit "Ah et du coup avec des tas d'insultes comme vous pouvez vous imaginer"".
• Le choix du compagnon comme acte féministe (pour les hétérosexuelles) : Anne-Cécile Mailfert insiste sur l'importance pour les femmes hétérosexuelles de choisir un partenaire qui ne cherche pas à les dominer ou à minimiser leurs ambitions : "le plus important si vous êtes hétérosexuel c'est de bien choisir votre mec ça c'est vraiment la base".
• Les hommes féministes comme "alliés" : Le rôle des hommes dans le féminisme est vu comme complémentaire à celui des femmes, axé sur le soutien, la remise en question des normes masculines et l'éducation des autres hommes. Anne-Cécile Mailfert affirme : "les hommes doivent être féministes et doivent se battre à nos côtés mais ils font pas le même job que nous".
• Le masculinisme expliqué par les élèves : Les élèves démontrent une bonne compréhension du masculinisme, le décrivant comme une autopression masculine à correspondre à un idéal de force, de dominance et de non-émotion. Une élève le définit comme : "quand les hommes se mettent une sorte de carapace qui font qui moi je suis plus fort moi je gagne l'argent moi je porte tous les tout le fardeau du monde sur moi moi je suis C'est pas quelque chose c'est très très proche de ça".
• Danger des algorithmes et des contenus régressifs : Il est souligné que les algorithmes des réseaux sociaux ciblent particulièrement les jeunes garçons avec des contenus masculinistes et les jeunes filles avec des contenus prônant des rôles traditionnels et soumissifs, contribuant à une régression potentielle de la société. Jean-Frédéric Thibau s'alarme : "ce qui est très dangereux c'est qu'on voit par la suite non seulement moi il y a quelques années je me disais mais ils sont ils sont ils sont malades ils sont pas bien et en fait malheureusement il y en a beaucoup et puis ils ciblent beaucoup les les hommes et les garçons et on voit aussi qu'aujourd'hui c'est une espèce de culture hyper macho qui revient".

Conclusions :

La discussion révèle que malgré des avancées significatives dans l'acquisition de droits, notamment le droit de vote, les femmes en France continuent de faire face à des inégalités profondes, ancrées dans les normes sociales et les comportements quotidiens.

L'histoire du féminisme est une histoire de lutte constante et la vigilance reste primordiale face aux tentatives de remise en cause des acquis.

L'engagement des hommes, en tant qu'alliés, est essentiel pour faire progresser l'égalité, notamment en travaillant sur la déconstruction des stéréotypes de masculinité.

Enfin, les réseaux sociaux apparaissent comme un nouveau champ de bataille, où la propagation de discours masculinistes et anti-féministes représente une menace sérieuse pour l'avenir de l'égalité des genres.

L'éducation et la sensibilisation, comme le montre l'engagement des élèves présents, sont cruciales pour contrer ces tendances régressives.

¿Cómo los enfrentamos (acompañamiento de pares, profesor, búsquedas en Internet)? Al principio lo enfrenté con mucha incertidumbre, e incluso por la sobrecarga laboral y académica que he sentido, con mucha frustración y ansiedad. En realidad tengo mucho interés por aprender las herramientas que se nos han presentado en el proceso de formación doctoral, sin embrago esta es la que más me ha costado y he tenido mucho miedo de no poder cumplir con lo requerido. He solicitado ayuda del profesor, y de compañeros, sin embargo, no es un proceso sencillo por el tiempo y por la dificultad que tengo para pedir ayuda porque no quiero molestar a la gente. Cuestión que hace parte de mi personalidad. También busqué ayuda externa con una amiga programadora para que me pudiera explicar lo que estamos viendo en la clase, porque el lenguaje es algo que sigo sin entender, y también he procurado ubicar.

¿Cuáles son tensiones y posibilidades de estos extrañamientos y sus infraestructuras? El proceso es muy interesante y se comprende las intencionalidades de otras formas de pensar la escritura y la publicación. Sin embargo, el extrañamiento, aunque es normal, no se supera cuando hay tantos vacíos en el uso de otro tipo de infraestructuras. Creo que la tensión principal es que a pesar de haber podido realizar los ejercicios en clase, no creo que tenga la capacidad de replicar por mi cuenta y eso me genera frustración porque es un conocimiento que me gustaría manejar y me siento en desventaja. En términos de mi tesis podría decir que las asimetrías en términos de acceso a las infraestructuras digitales, las veo muy relacionadas con brechas de género, en las cuales no solo no se nos promueve a las mujeres desde temprana edad el desarrollo de estas habilidades, sino incluso cuestiones como el deseo. Por esta razón, la clase me ha servido de espejo de una realidad en la que quiero explorar, en donde áreas muy masculinizadas no solo son extrañas, sino que son poco placenteras.

根据 Verifier 的挑战值 生成的新的多项式在 Prover 是诚实的情况下一定是能通过 LDT 的否则 这个新多项式无法通过，但是上面说的 one less 是什么意思

Note de Synthèse : La Production Sociale des Inégalités de Santé (1) - Nathalie Bajos (2024-2025)

Objet : Synthèse des principaux thèmes et idées clés présentés par Nathalie Bajos lors de la première séance de sa chaire de santé publique sur la production sociale des inégalités de santé, axée sur le cas du COVID-19.

Source : Extraits de la présentation de Nathalie Bajos.

Date de la présentation : 2024-2025 (date précise de la séance non spécifiée, mais fait référence à la leçon inaugurale du 3 avril 2025).

Conférencière : Nathalie Bajos, sociologue et démographe, directrice de recherche à l'INCERM et à l'EHESS. Titulaire de la chaire de santé publique pour l'année 2024-2025.

Résumé :

• Cette première séance de la chaire de Nathalie Bajos aborde la question fondamentale de la production sociale des inégalités de santé, en se concentrant sur le cas de la pandémie de COVID-19.

L'objectif principal est de démontrer comment les inégalités d'exposition au risque de contracter le virus, et par extension de développer des formes graves de la maladie, ne sont pas aléatoires mais sont profondément enracinées dans les structures sociales et économiques.

La présentation met l'accent sur l'importance de l'analyse intersectionnelle pour comprendre comment les rapports de domination de genre, de classe et de race se conjuguent pour créer des vulnérabilités différenciées face à la maladie.

En s'appuyant sur diverses études (quantitatives, qualitatives, analyses d'archives et de recommandations médicales), la conférencière illustre l'ampleur de ces inégalités, notamment selon la profession, la "position raciale" (terme utilisé dans les études citées) et les conditions de vie et de travail.

Thèmes Principaux et Idées Clés :

• Le Caractère Socialement Construit des Inégalités de Santé :
• Les inégalités de santé, y compris le risque de contracter le virus du COVID-19, sont la "manifestation [...] de la structuration hiérarchisée de l'espace social par les rapports de domination de genre de classe de races qui s’expriment dans les corps".
• Ces rapports sociaux de domination ne fonctionnent pas indépendamment les uns des autres, mais sont "consubstantiels".
• L'Intersectionnalité comme Outil d'Analyse :
• L'analyse "intersectionnelle" ou de "consubstantialité" est présentée comme essentielle pour comprendre la réalité sociale des inégalités de santé. Elle implique de "tenir compte simultanément de ces différents rapports [genre, classe, race, etc.] pour comprendre la réalité sociale".
• L'exemple de l'aide-soignante immigrée du Mali travaillant en milieu hospitalier pendant le COVID-19 est utilisé pour illustrer la complexité des vulnérabilités dues à la combinaison de ces facteurs.
• Le Processus en Chaîne de la Production des Inégalités de Santé :
• La mortalité ou la morbidité est le résultat final d'une série d'étapes interconnectées :
• Conditions de vie et de travail (déterminent l'exposition au risque).
• Pratiques de prévention et vaccination (modulent l'infection à exposition équivalente).
• Recours au test et accès au système de santé (facilitent une prise en charge rapide).
• Prise en charge médicale.
• Corps et comorbidités (influencent l'issue).
• La présentation insiste sur l'importance de la première étape (conditions de vie et de travail), souvent négligée dans l'analyse épidémiologique, car les inégalités importantes commencent dès ce stade et se renforcent par la suite.
• L'Ampleur des Inégalités d'Exposition au Risque (COVID-19) :
• Les études internationales (Royaume-Uni, États-Unis) ont rapidement montré une "surmortalité très importante selon la profession" et les "minorités racisées".
• Au Royaume-Uni, un "gradient de mortalité très marqué" selon la profession a été observé, ainsi qu'une "surmortalité très importante des minorités racisées par rapport aux personnes blanches".
• Aux États-Unis, le risque de mortalité était nettement supérieur pour les hommes hispaniques et noirs par rapport aux hommes blancs, "même pour les métiers plus [favorisés]".

Une surmortalité pour les catégories sociales les plus défavorisées et les minorités racisées a été confirmée dans tous les pays.

• En France, bien que les données soient moins fines, la surmortalité a été "importante en Seine Saint-Denis par rapport à d'autres [départements]".
• L'effet "healthy migrant" (les migrants sont en meilleure santé à l'arrivée) a été inversé par le COVID-19, avec une "évolution absolument spectaculaire" de la mortalité entre 2019 et 2020 pour les personnes nées en Afrique subsaharienne, avec une surmortalité "plus de 18 fois plus élevée" que pour les personnes nées en France.
• L'Explication des Inégalités : Facteurs Structurels vs Individuels :
• Les inégalités s'expliquent par une multitude de facteurs, au-delà des facteurs biomédicaux (âge, comorbidités, génétique).
• Les "facteurs sociaux qui exposent" sont cruciaux : travail à l'extérieur, utilisation des transports en commun, lieu de vie, conditions de logement, type d'emploi, contacts sociaux, pratiques préventives, dépistage, accès aux soins.
• Les données de l'enquête Epicov montrent que l'exposition au risque (densité du lieu de résidence, logement surpeuplé, télétravail) est "extrêmement différente selon les caractéristiques sociales des personnes".
• Un résultat majeur de l'enquête Epicov est que la "surexposition des personnes nées en dehors d'un pays européen" (2,4 fois plus de risque d'être contaminé) "ne devient plus significative quand on tient compte de leurs conditions de vie de leurs conditions de travail et cetera".
• Le message clé est que cette surexposition "n'est pas que ces personnes ont des gênes particuliers ou je ne sais quoi ni d'ailleurs que ces personnes se protègent moins". Au contraire, les populations les plus précaires étaient "plus enclines à utiliser le masque à à utiliser des des gels hydroalcoolique et à respecter les distances".
• Ces inégalités sont liées à des "logiques structurelles qui renvoient à des politiques sociales qui datent de décennies" (relégation dans certaines zones, politique de l'habitat, ségrégation raciale du marché du travail).
• L'Évolution du Profil Social de l'Épidémie et l'Impact du Confinement :
• Il y a eu une "inversion de la dynamique sociale de l'épidémie" entre la période précédant et suivant le premier confinement.
• Avant le confinement, les personnes contaminées étaient davantage issues des "milieux sociaux les plus favorisées" (voyages, restaurants).
• Après le confinement, les personnes contaminées étaient celles qui "sont allées travailler", en particulier dans les "professions essentielles" (santé, vente au détail, transports, etc.), "les personnes des milieux les plus défavorisés".
• Cela montre que les "politiques de prévention aussi fortes que le confinement peuvent jouer de manière différente", protégeant davantage certaines populations que d'autres.
• Les Conditions de Travail comme Déterminant Majeur :
• Les métiers les plus touchés étaient ceux avec des "contacts avec le public" (agents d'exploitation des transports, personnel de santé, commerce, etc.).
• Les études qualitatives (conducteurs routiers, grande distribution alimentaire) illustrent comment les "conditions de travail qui déjà étaient très précaire [...] quand l'épidémie survient et oblige à des reconfigurations importantes c'est encore plus de travail et encore plus de risque pour arriver à à se à se protéger".
• La possibilité ou non d'adopter des pratiques de prévention est modulée par les "conditions de travail" (non-respect de la distanciation, manque de soutien hiérarchique, absence de moyens suffisants).
• Les Inégalités dans l'Accès aux Soins et la Prise en Charge Médicale :
• Même en cas de COVID grave, les inégalités persistent dans la phase de prise en charge.
• Les données sur les hospitalisations montrent un "effet de revenu extrêmement important" : les personnes les plus défavorisées ont un risque plus élevé d'être ventilées mécaniquement (forme très grave) et de décéder à l'hôpital.
• Ces inégalités dans les issues ne s'expliquent pas par l'âge ou les comorbidités (ces données sont ajustées) mais suggèrent un "retard d'accès au système de soin".
• Ce retard est "multifactoriel" (distance géographique, mais aussi perception des symptômes, rapport à la santé, "moins de fluidité dans les relations avec le système de soins").
• Les Limites des Données Statistiques en France :
• La France souffre d'un manque de données "en routine" sur la "profession" (détails précis de l'activité) et l'"appartenance ethnoraciale" (bien que le terme soit critiqué, le besoin de données sur l'auto-déclaration de l'origine ou la couleur de peau est crucial).
• Ce manque de données rend difficile la "surveillance" des inégalités et la "décomposition pour comprendre où se situent les problèmes".
• Sans ces données, il est difficile de "mettre en place des politiques de prévention beaucoup plus fines et beaucoup plus adaptées".
• Les Limites des Politiques de Prévention Basées Uniquement sur une Logique Épidémiologique :
• Les politiques de prévention basées uniquement sur des facteurs épidémiologiques (âge, comorbidités), comme cela a été largement le cas pour le COVID-19, "font fi de toutes les logiques sociales et structurel".
• Ces politiques "ne réduisent pas les inégalités et qui au contraire contribuent à les accroître".
• L'intérêt des travaux présentés est de montrer que "en plus de l'âge il y a tous ces éléments-là qui interviennent", soulignant la nécessité d'approches plus complètes pour des politiques de prévention efficaces.

Citations Clés :

• "la production sociale des inégalités de santé" (Titre de la chaire et thème central)
• "la manifestation comme disait Bourdieu de la structuration hiérarchisée de l'espace social par les rapports de domination de genre de classe de races qui s’expriment dans les corps et ces rapports sont consubstantiels" (Définition des inégalités de santé)
• "tenir compte simultanément de ces différents rapports pour comprendre la réalité sociale" (Définition de l'analyse intersectionnelle/consubstantielle)
• "une surexposition des personnes né né en Afrique sub-saharienne [...] elle existe elle est vraie elle est indénégéniable [...] mais ce surrisque il est pas il il ne devient plus significatif quand on tient compte de leurs conditions de vie de leurs conditions de travail et cetera" (Démonstration de l'effet des conditions de vie et de travail sur l'exposition)
• "ces populations les plus précaires qui sont les plus touchées c'est pas parce qu'elles se protégeaient moins" (Infirmation d'une idée reçue sur les pratiques préventives)
• "cette cartographie sociale elle est liée à des logiques structurelles qui renvoie à des politiques sociales qui datent de décennies de mise en place de relégation dans certaines zones de d'habit politique de l'habitat et une ségrégation aussi du marché euh ségrégation raciale du marché du travail" (Causes profondes des inégalités)
• "en gros hein les personnes qui sont dans des popul des des professions les plus en bas de l'espace social c'est 2,4 fois plus de de contact avec le public que celle que les quatre supérieurs" (Illustration de l'exposition au travail selon la position sociale)
• "vous passez de 7 % pour tout le monde et vous passez à 26 % pour les femmes être soignantes appartenant à une minorité révisible c'est une minorité racisée" (Exemple concret de l'effet de l'intersectionnalité)
• "c'est pas du tout tant une question de connaissance des moyens de prévention que de la possibilité sociale d'utiliser de pratiquer les gestes préventifs qui étaient nécessaires" (Importance de la capacité à appliquer les mesures de prévention)
• "à chaque fois les personnes les plus défavorisées ont eu un risque on plus important d'être ventilé mais d' c'estd que c'était vraiment un Covid très grave de mourir" (Inégalités face aux issues graves du COVID-19)
• "l'hypothèse la plus probable c'est que ces personnes sont arrivées plus tard à l'hôpital" (Explication des inégalités face aux issues graves)
• "on a une une variable d'extrêmement vague comme est née en Afrique sub-saharienne donc toutes les secondes générations on a rien sur eux et donc c'est c'est voilà c'est c'est un manque vraiment problématique" (Critique du manque de données fines en France)
• "si on tient compte que d'éléments de type strictement euh épidémiologique quand on s'enferme dans une logique épidémiologique et ben on met en place des politiques de prévention qui ne réduisent pas les inégalités et qui au contraire contribuent à les accroître" (Critique des politiques de prévention unilatérales)

Méthodologie et Sources Utilisées :

La présentation s'appuie sur une variété de méthodes et de sources, illustrant la diversité abordée dans la chaire :

• Enquêtes quantitatives (Epicov, Saprise, Trackov).
• Entretiens qualitatifs.
• Observations.
• Analyse d'archives.
• Analyse de recommandations médicales.
• Littérature scientifique internationale.
• Données statistiques nationales (France, Royaume-Uni, États-Unis).

Structure des Prochaines Séances :

Les huit séances de la chaire couvriront différentes questions de santé (discriminations, maladies cardio-vasculaires, santé mentale, sexualité, avortement, santé environnementale) en se situant à différentes étapes du processus de production des inégalités, sur différentes populations (population générale, médecins, personnes privées de liberté, zones géographiques spécifiques) et en utilisant différentes méthodes.

La chaire se conclura par un colloque international interdisciplinaire (sociologues, anthropologues, économistes, démographes, épidémiologistes) confrontant modèles théoriques et données empiriques.

Implications pour les Politiques Publiques :

Les travaux présentés visent à "nourrir les politiques publiques la réflexion pour essayer de réduire ses inégalités".

L'analyse des logiques structurelles et l'utilisation d'une perspective intersectionnelle devraient permettre la mise en place de "politiques de prévention beaucoup plus fines et beaucoup plus adaptées" qui ne se limitent pas aux facteurs épidémiologiques mais prennent en compte les déterminants sociaux de l'exposition et de l'accès aux soins. Le manque de données fines est un frein majeur à cette adaptation.

Conclusion :

Cette première séance établit clairement le cadre de la chaire : les inégalités de santé sont un produit social, inextricablement lié aux rapports de domination (genre, classe, race).

L'analyse intersectionnelle est indispensable pour comprendre la complexité de ces inégalités, particulièrement visible dans le cas du COVID-19.

Les conditions de vie et de travail jouent un rôle majeur dans l'exposition au risque, et ces facteurs structurels persistent tout au long du parcours de santé, influençant l'accès aux soins et les issues.

L'approche multidisciplinaire et méthodologiquement diverse de la chaire promet d'éclairer ces mécanismes complexes et de contribuer à une réflexion plus pertinente pour des politiques publiques visant à réduire ces inégalités.

BRIEFING : Analyse des Extraits de "Dans la tête...d'un gentil"

Objectif : Ce document vise à résumer les principaux thèmes et les idées cruciales explorées dans les extraits de l'émission "Dans la tête...d'un gentil", en mettant en lumière les arguments clés et les exemples présentés.

Résumé :

L'émission s'interroge sur la nature de l'être humain : sommes-nous intrinsèquement gentils ou égoïstes ?

En s'appuyant sur la recherche scientifique, des témoignages et des expériences, elle explore la gentillesse sous divers angles : son existence au quotidien, sa perception sociale souvent ambivalente, son expression chez les enfants, son rôle dans la collaboration versus la compétition, et les moyens de la cultiver, notamment par la méditation.

L'émission remet en question la croyance largement répandue en l'égoïsme fondamental de l'homme, suggérant que la gentillesse est plus répandue qu'on ne le croit, bien qu'elle nécessite un effort de culture et de civilisation pour dominer les instincts plus compétitifs et excluants.

Thèmes Principaux et Idées Clés :

La Question Fondamentale : Gentil ou Méchant ? L'émission pose dès le départ la question centrale, faisant référence à l'opposition classique entre Rousseau (homme fondamentalement bon) et Hobbes (l'homme est un loup pour l'homme).

Elle ne prétend pas apporter une réponse définitive, mais se concentre sur les "avancées de la recherche scientifique autour de la gentillesse".

La Gentillesse au Quotidien : Témoignages et Exemples

L'expérience d'Annie Marcel, infirmière, illustre la gentillesse dans un contexte professionnel tourné vers les autres.

Son choix de carrière est né d'une "révélation" en prenant soin de son père vulnérable, ce qui la pousse à "se mettre au service des plus vulnérables".

Elle souligne que la gentillesse dans sa profession implique d'être "à leur écoute", de susciter la "confiance" et de permettre aux patients de "ne pas avoir peur de me parler".

L'émission aborde l'idée d'un "outsourcing de cette gentillesse", où la société confie la tâche de prendre soin des plus vulnérables à certaines professions, se déchargeant ainsi d'une responsabilité individuelle.

Annie Marcel témoigne également recevoir de la gentillesse en retour, soulignant le caractère réciproque potentiel de cette attitude.

Définition et Nuances de la Gentillesse

La gentillesse est définie comme une "attitude", un "désir de le bien d'autrui", qui se traduit par des "actes de bienveillance, d'altruisme". Ce sont souvent de "petites choses qu'on fait pour les autres".

Elle est "tournée vers l'autre et vers les autres", incluant la "non-violence", la "non-jalousie" et la "non-indifférence à l'autre".

Le terme "gentil" est perçu comme "très ambivalent" dans la société. Rebecca Shankland, professeur de psychologie, souligne que dire de quelqu'un qu'il est gentil n'est "pas très valorisant" et peut même être interprété comme un "signe de faiblesse".

Il existe une "survalorisation finalement de l'esprit critique" dans notre société, amenant à penser qu'une personne positive ou gentille est "naïf" car elle ne verrait pas les aspects négatifs que la personne critique est capable de discerner.

Gentillesse Spontanée ou Apprentie ? Études et Expériences

Une expérience de caméra discrète à Genève montre que la plupart des passants "aident spontanément notre complice", malgré quelques exceptions. Cela suggère que "la gentillesse est bien plus répandue qu'on imagine".

L'émission conteste la croyance que "nous sommes convaincus que l'homme est fondamentalement égoïste", même en situation de crise.

L'exemple de l'ouragan Katrina est utilisé pour démontrer que les rumeurs de violence étaient fausses et que la "solidarité et l'entraide" ont prévalu, souvent de manière "très structuré, très organisé, très coordonnée".

Cette coopération en situation de crise s'expliquerait par un "sentiment de sort commun, un sentiment d'identité commune" qui pousse les gens à s'aider comme s'ils connaissaient l'autre, comme s'il s'agissait de membres de leur groupe.

Concernant les enfants, des expériences montrent qu'ils ont dès un très jeune âge une "capacité, cette envie extrêmement innée d'être en sympathie".

Les nouveau-nés se mettent au diapason des attitudes des autres, ce qui est considéré comme un premier signe de "sympathie" et de "gentillesse".

À 18 mois, les enfants aident volontiers, mais cette aide est déjà influencée par l'apprentissage et la valorisation (être remercié), ce qui rend difficile de parler d'un comportement "inné qui viendrait tout seul".

Lorsque des jeux "irrésistibles" sont proposés, les enfants peuvent manifester un comportement d'imitation immédiate, arrachant un jouet à un camarade.

L'émission insiste sur l'importance pour les adultes de ne pas "mettre un sens moral" à ce comportement, car il est "absolument normal à cet âge-là" et n'est ni "méchant" ni "gentil" au sens moral adulte.

La Gentillesse dans l'Engagement Bénévole

L'exemple de l'association Solid'aire met en lumière la gentillesse chez les bénévoles qui "donnent de son temps et de son énergie pour les autres".

L'originalité de leur approche réside dans l'"inconditionnalité qu'il est absolument totale".

Ils "ne demandent rien à personne" et font confiance, rejetant l'idée d'abus.

Cette approche permet de créer du "lien" et de "faire participer un peu tout le monde", gommant la distinction entre organisateurs et bénéficiaires.

Anaïs et Alexandre, bien qu'engagés dans une démarche de soutien, ne se définissent pas nécessairement comme "gentils". Ils se sentent plutôt "concerné" et "un peu fâché" par la "réalité qui nous entoure", soulignant que leur motivation est aussi liée à l'indignation face aux difficultés rencontrées par les autres.

Rebecca Shankland valide l'approche de l'inconditionnalité, expliquant qu'elle permet de "lever ce frein" pour les personnes qui ont honte ou se sentent vulnérables en demandant de l'aide.

Elle permet de réduire l'"asymétrie" dans la relation d'aide et de créer une relation "d'égal à égal".

Cependant, le simple fait de donner ne fait pas automatiquement de nous un être gentil, surtout si l'aide n'est pas adaptée aux besoins de l'autre et accentue un sentiment de mal-être.

L'empathie et la prise en compte de la perspective d'autrui sont essentielles.

Collaboration vs Compétition : L'Impact sur les Comportements

Une expérience avec un jeu de manipulation d'étriers montre l'efficacité de la collaboration.

Les groupes ayant une consigne de coopération se caractérisent par une "beaucoup de communication", une capacité à "s'écouter", à "s'encourager", à "intégrer les points de vue de tout le monde" et une "réflexion sur les processus de groupe" (autorégulation).

Cette stratégie est "très payante" pour résoudre une tâche complexe, permettant l'émergence de solutions "innovantes" et "créatives".

L'idée reçue selon laquelle un groupe a besoin d'un chef pour fonctionner est remise en question.

L'ajout d'une consigne d'évaluation individuelle ("on va évaluer la contribution de chacun") "sabote la collaboration". Les groupes deviennent une "somme d'individus", ne s'écoutent pas bien, se coupent la parole et prennent des initiatives sans consensus, entraînant des résultats "pas très bons".

Cela s'explique par le fait que l'évaluation individuelle transforme les camarades en "adversaires", un schéma auquel nous sommes "très habitué" et qui devient "presque naturel".

La "compétition" et l'"exclusion" sont présentées comme des "fort instant" humains, au même titre que l'instinct de gentillesse.

Cultiver la Gentillesse : Le Rôle de la Culture et de la Méditation

Bertrand Kiefer affirme qu'il est un "projet de culture que de faire dominer la bienveillance, la gentillesse, l'ouverture à autrui par rapport à exclusion".

La méditation est présentée comme l'un des moyens de "muscler son ouverture aux autres" et de "cultiver sa bienveillance".

Félix témoigne que la méditation l'aide à gérer le stress et à être "beaucoup plus à l'écoute de moi", ce qui le rend aussi "si beaucoup plus à l'écoute des autres". "Si on est bien nous avec nous-mêmes, on va vraiment pouvoir aider les gens".

Rebecca Shankland corrobore les bienfaits de la méditation, citant une expérimentation où un programme de pleine conscience a significativement augmenté les "comportements altruistes" (céder sa place à une personne en béquilles).

La méditation est également liée à la psychologie positive, qui vise à "diminuer notre biais de négativité" et à "réorienter l'attention vers les aspects satisfaisant du quotidien", augmentant ainsi le "bien-être" et la "disponibilité mentale" pour mieux prendre en compte les besoins de l'autre.

Citations Clés :

• "sommes-nous naturellement gentil ou méchant altruiste ou égoïste"
• "je pense que c'était pour me mettre au service des plus vulnérables"
• "on paie des gens pour s'occuper des malades des personnes âgées des handicapés même et son conte à y mettre les mains dans le cambouis une espèce doubt sourcing comme ça de cette gentillesse"
• "la gentillesse c'est d'abord eu une attitude ses désirs et le bien d'autrui"
• "quand on dit d'une personne qu'elle est gentil gentil c'est pas très valorisant"
• "ça peut être justement considéré un peu comme un signe de faiblesse en tout cas c'est moins valorisés dans notre société"
• "la gentillesse est bien plus répandue qu'on imagine mais nous refusons de le croire"
• "dans les situations d'urgence, on voit apparaître des comportements très structuré très organisé très coordonnée"
• "lorsqu'on est dans la même situation de catastrophe les gens qui sont là développe un sort commun sentiment de sort commun un sentiment d'identité commune qui ensuite les amène à aider les autres comme si c'était des gens qui connaissent"
• "depuis un toutou jeune âge les enfants ils ont cette capacité cette envie extrêmement in et d'être en sympathie"
• "ne met pas un sens moral à ce comportement qui n'a rien de moral ni méchants des gentils"
• "la première chose très particulière cette inconditionnalité qu'il est absolument totale"
• "On est concerné et puis un peu fâché plus tôt... en fait la réalité qui nous entoure"
• "c'est vraiment un acte de gentillesse de permettre de réduire cette asymétrie"
• "si on prend vraiment la perspective d'autrui... on va aussi être plus en mesure de favoriser son pouvoir d'agir"
• "le maître mot ici c'est la collaboration"
• "le prototype du groupe qui fonctionne c'est le groupe avec un chef"
• "pour résoudre une tâche complexe, on a besoin de communiquer de façon sereine"
• "un peu de compétition suffit donc à saboter la collaboration"
• "c'est un projet de culture que de faire dominer la bienveillance... par rapport à exclusion"
• "la méditation de pleine conscience propose justement de cultiver sa bienveillance en prenant soin de soi"
• "quand je prends ces temps pour méditer... je suis si beaucoup plus à l'écoute des autres"
• "les personnes qui ont suivi le programme de pleine conscience 50% d'entre elles cèdent leur place dans les deux minutes contre moins de 20% du groupe témoin"
• "l'objectif est d'aider à diminuer notre biais de négativité"

Conclusion Provisoire :

Les extraits de "Dans la tête...d'un gentil" présentent un argument nuancé sur la nature humaine.

Bien que la société ait tendance à dévaloriser la gentillesse et à survaloriser la critique et la compétition, les expériences et les témoignages suggèrent que la gentillesse et la collaboration sont des aspects importants de notre comportement, présents dès l'enfance et particulièrement efficaces en situation de crise.

L'émission souligne que la gentillesse n'est pas seulement un instinct, mais aussi un "projet de culture" qui peut être activement cultivé, notamment par des pratiques comme la méditation.

L'accent mis sur l'inconditionnalité et la collaboration dans les initiatives d'aide met en évidence l'importance de réduire les asymétries et de favoriser l'empowerment mutuel.

Compte rendu : "Algorithmes - Vers un monde manipulé | ARTE"

Ce briefing examine le documentaire "Algorithmes - Vers un monde manipulé" produit par ARTE, explorant l'impact omniprésent et souvent insidieux des algorithmes sur notre quotidien, la société et les individus.

Le film présente plusieurs cas d'étude et témoignages soulignant les risques liés à l'utilisation non réglementée et biaisée de l'intelligence artificielle et des systèmes algorithmiques.

Thèmes principaux :

L'omniprésence et l'opacité des algorithmes dans la vie quotidienne :

Les algorithmes sont partout et influencent des décisions cruciales (lecture, achats, prêts, relations) sans que nous en ayons conscience.

La discrimination et les biais algorithmiques :

Les algorithmes peuvent perpétuer et amplifier les préjugés humains présents dans les données d'entraînement, entraînant des discriminations basées sur l'apparence, l'origine géographique, la nationalité, le milieu social, etc.

L'utilisation des algorithmes pour la surveillance et l'exploitation :

Les algorithmes sont utilisés par les entreprises et les gouvernements pour surveiller, classer et contrôler les individus, souvent à leur insu et au détriment de leur vie privée et de leurs droits.

La "déqualification" du travail et la précarisation des travailleurs :

Les algorithmes et l'automatisation sont utilisés pour réduire le contrôle des employés sur leur travail, augmenter la productivité au profit des entreprises et rendre les travailleurs plus interchangeables.

L'influence des algorithmes sur la perception et la santé mentale :

Les algorithmes des plateformes en ligne sont conçus pour maximiser le temps d'écran, potentiellement en poussant les utilisateurs vers des contenus nuisibles ou en renforçant des bulles de filtre isolantes, avec des conséquences sur la santé mentale, en particulier chez les jeunes.

Le capitalisme de surveillance :

Le modèle économique de nombreuses plateformes en ligne repose sur la collecte et la vente de données personnelles, transformant les utilisateurs en produits et limitant leur libre arbitre.

Le pouvoir des entreprises de la tech et les défis de la régulation : Les grandes entreprises technologiques disposent d'un pouvoir économique et politique considérable, rendant difficile leur régulation et leur responsabilisation, notamment par le biais de lobbying intense et de l'opacité de leurs systèmes.

La nécessité de la transparence, de la responsabilité et d'une approche plus inclusive dans le développement des algorithmes :

Pour contrer les effets négatifs des algorithmes, il est essentiel d'augmenter la transparence de leurs fonctionnements, d'établir des mécanismes de responsabilité et d'impliquer une diversité d'expertises dans leur conception.

Idées et faits les plus importants :

Le scanner corporel à l'aéroport :

L'exemple de Sacha, une personne transgenre signalée comme "anormale" par un scanner corporel à l'aéroport, illustre la façon dont les algorithmes peuvent discriminer les individus en raison de leur apparence physique, si celle-ci ne correspond pas aux normes établies par la base de données d'entraînement. "Le scanner considère Sacha comme un danger uniquement en raison de son apparence Parce qu’elle est transgenre elle ne passe pas."

Viogène en Espagne :

Le système d'évaluation du risque de violence conjugale, Viogène, bien que conçu pour aider la police, a montré ses limites en sous-évaluant le danger pour des victimes, avec des conséquences tragiques comme le cas d'Itsiar.

Le fait que l'algorithme ignore des preuves manifestes de danger et l'opacité de ses critères de décision sont soulignés.

"Sur les 35 questions une seule concerne l’appréciation du risque par Macarena elle-même Est-ce qu’elle croit que son conjoint serait capable de la tuer est-ce que sa réponse sera prise en compte par l’algorithme les policiers l’ignorent C’est un secret des développeurs."

Parcoursup en France :

Le système d'admission à l'enseignement supérieur, Parcoursup, basé sur des algorithmes, est critiqué pour son opacité et les biais potentiels qui favorisent les étudiants issus de lycées réputés au détriment de ceux issus de milieux défavorisés.

L'accès payant à de l'aide pour naviguer le système aggrave les inégalités.

"Cela signifie que l’effort fourni par Intissar pour décrocher le baccalauréat a été inutile Sa candidature était vouée à l’échec parce qu’elle habite une banlieu à faible revenu."

La loi obligeant à rendre publics les algorithmes ayant un impact sur la vie des citoyens est contournée par la règle du "secret des délibérés".

Les petites mains de l'IA (micro-travail) :

Le documentaire révèle que derrière les systèmes d'IA apparemment automatisés se cache un travail humain souvent mal rémunéré et précaire.

Des personnes dans les pays en développement créent et étiquettent les vastes bases de données utilisées pour entraîner les algorithmes, souvent sans protection des travailleurs.

"Pour un salaire de misère ils produisent les jeux de données mis en œuvre pour l’apprentissage des algorithmes."

Le vol de salaire est courant sur ces plateformes.

Les biais culturels dans les bases de données d'images :

La base de données ImageNet est montrée comme un exemple de la manière dont les préjugés culturels peuvent être intégrés dans les algorithmes.

Des catégories de classification d'êtres humains sont jugées "bizarres" et potentiellement discriminatoires (ex: classer une personne comme "incurable", "hypocrite", "mauviette").

"Pour Image Net les collaborateurs chargés de la classification doivent décider si l’humain pris en photo est un hypocrite ou une mauviette L’algorithme n’a pas seulement appris les catégories à partir de la base de données mais il a aussi intégré de nombreux préjugés."

L'historique des pseudo-sciences comme la physionomie et la phrénologie est évoqué pour souligner que ces tentatives de classification des humains basées sur l'apparence ont toujours été utilisées pour justifier l'injustice.

L'influence de YouTube et l'anorexie :

Le témoignage de Marie montre comment les algorithmes de recommandation de YouTube, conçus pour maximiser le temps d'écran, peuvent pousser les utilisateurs vers des contenus potentiellement dangereux, comme des régimes extrêmes liés à la K-pop, conduisant à des troubles alimentaires comme l'anorexie.

"Les algorithmes de YouTube ont appris que les vidéos qui suscitent la peur et la dépression chez le spectateur maintiennent les utilisateurs devant leur ordinateur Un client dépressif est donc un client fidèle de YouTube."

La surveillance des employés chez Amazon :

Amazon utilise des algorithmes pour surveiller en temps réel l'activité de ses employés dans les entrepôts, mesurant leur productivité et identifiant les "temps d'inactivité".

Cela conduit à une pression constante et une déshumanisation du travail.

"Les algorithmes calculent pour chaque employé s’il fait perdre de l’argent à Amazon."

Le licenciement de Timnit Gebru chez Google :

Le cas de Timnit Gebru, scientifique spécialisée dans l'éthique des algorithmes, renvoyée de Google après avoir co-rédigé un article critique sur les biais dans les modèles de langage, illustre la difficulté de soulever des questions éthiques au sein des grandes entreprises de la tech et la centralisation du pouvoir.

"L’un des sujets de notre article porté sur les données d’entraînement de l’intelligence artificielle

Lorsque les modèles de langage sont entraînés à partir de données provenant d’Internet les gens pensent qu’il y en a beaucoup et qu’il y aura différents points de vue

Mais en fait Internet n’a pas beaucoup de points de vue différents Certaines voix sont supprimées d’autres sont mises en avant

Par exemple des femmes sont harcelées des personnes persécutées Donc si on se contente d’entraîner l’intelligence artificiel avec cela on obtient un point de vue qui est très raciste sexiste et hostile aux handicapés et bien d’autres choses encore."

Le scandale des allocations familiales aux Pays-Bas : Ce cas majeur a révélé qu'un algorithme utilisé par l'administration fiscale pour détecter la fraude a identifié à tort des dizaines de milliers de familles, souvent d'origine étrangère ou néerlandaise avec une double nationalité, comme fraudeurs potentiels.

Cela a eu des conséquences désastreuses pour ces familles (dettes, saisies, séparations d'enfants).

L'opacité de l'algorithme et la destruction de dossiers sont soulignées.

"Il est possible que les autorités fiscales aient intégré la nationalité comme élément indicateur d’une fraude dans l’algorithme Ainsi l’algorithme à identifier tout citoyen n’ayant pas la nationalité néerlandaise comme fraudeur potentiel ainsi que les néerlandais ayant une double nationalité."

Des dessins et emails racistes trouvés dans les documents de fonctionnaires soulignent les préjugés humains qui peuvent influencer l'utilisation des algorithmes.

La prévention policière basée sur les algorithmes dans les écoles :

L'utilisation d'algorithmes comme Dirias pour identifier de potentiels auteurs de violences dans les écoles, basé sur des comportements "suspects", est critiquée. Ces systèmes tendent à surestimer le risque et peuvent mener à des interrogatoires policiers d'enfants qui n'ont commis aucun délit, basés sur de simples soupçons.

"Des algorithmes cherchent à empêcher les crimes avant qu’il ne soient commis."

La loi antiterroriste suisse de 2021 autorise des assignations à résidence basées sur de simples soupçons, sans preuves de délit, et le fichage des personnes "dangereuses" souvent à leur insu.

La centralisation du pouvoir et les inégalités numériques :

Le documentaire met en garde contre la concentration du pouvoir entre les mains de quelques grandes entreprises technologiques et l'augmentation des inégalités numériques, où les personnes vulnérables sont les premières à subir les conséquences négatives des technologies non matures.

"Partout dans le monde nous constatons que l’intelligence artificielle est d’abord conçue pour des populations vulnérables qui n’ont pas les moyens de se défendre si elles estiment avoir été accusé à tort par exemple ou si on leur a attribué un score de risque qui ne correspond pas à la façon dont elles pensent devoir être traitées On ose imposer des technologies non matures à des populations vraiment vulnérables."

Les tentatives de régulation et les défis du lobbying :

Les efforts de l'Union européenne pour réguler les entreprises de la tech par le biais de lois comme le Digital Markets Act et le Digital Services Act sont présentés.

Cependant, l'intense lobbying des entreprises de la tech, qui dépensent des sommes considérables pour influencer la législation, pose un défi majeur.

"En tant que présidente en charge des technologies numériques Vestagger a présenté en avril 2021 un projet de loi visant à réguler l’intelligence artificielle

Le projet répartait les systèmes algorithmiques en quatre classes de risque." Les entreprises financent également des recherches scientifiques pour les mettre à leur service.

La nécessité de la responsabilité et du consentement : Le film souligne que la responsabilité de l'utilisation des algorithmes incombe aux humains qui les développent et les utilisent.

L'idée d'un "modèle technologique consensuel" est proposée, où les utilisateurs donneraient leur consentement concernant leurs données et leurs interactions avec la technologie.

"Il faut s’interroger sur la pertinence de jeux de données créé par des humains d’une grande diversité culturelle et travaillant dans des conditions indignes."

"L’intelligence artificielle n’est jamais purement technique Elle est aussi sociale politique culturel Elle est aussi en lien avec l’histoire Et qui étudie la société qui étudie la politique ou l’histoire ce ne sont pas des ingénieurs Il faut impliquer davantage de personnes issues d’autres disciplines."

En résumé, le documentaire "Algorithmes - Vers un monde manipulé" dresse un tableau critique de l'impact croissant des algorithmes, mettant en lumière les risques de discrimination, de surveillance, d'exploitation et de manipulation, souvent au détriment des populations les plus vulnérables.

Il souligne l'urgence d'une meilleure régulation, d'une plus grande transparence et d'une approche plus éthique et inclusive dans le développement et l'utilisation de l'intelligence artificielle.

Compte-rendu : Ce que tout le monde se trompe sur l'IA et l'apprentissage – Explication de Derek Muller

Ce compte-rendu analyse le discours de Derek Muller, créateur de la chaîne YouTube Veritasium, sur le rôle de l'IA dans l'éducation.

L'orateur explore les attentes autour des "révolutions" éducatives induites par la technologie et propose une perspective basée sur les travaux de Daniel Kahneman et la théorie de la charge cognitive.

Thèmes Principaux et Idées Clés :

Les Promesses de Révolution Éducative et leur Échec Historique :

Muller souligne que l'idée de la technologie révolutionnant l'éducation n'est pas nouvelle et qu'elle s'est manifestée à travers divers médias au cours du siècle dernier.

Il cite des exemples comme le cinéma (Thomas Edison, 1922), la radio (années 1930), la télévision (années 1950), les ordinateurs interactifs (années 1980), les vidéodisques (années 1990) et les MOOCs (il y a environ 13 ans).

Chacune de ces technologies a été présentée comme un moyen de transformer radicalement l'éducation, souvent en remplaçant les enseignants et en permettant une économie d'échelle.

Citation Clé : "Clearly the expectation of a revolution is here but the truth is people expecting a revolution in education have been around for at least 100 years." (Clairement, l'attente d'une révolution est là, mais la vérité est que les gens s'attendent à une révolution dans l'éducation depuis au moins 100 ans.)

Il utilise la citation de Thomas Edison sur le cinéma : "the motion picture is destined to revolutionize our educational system and in a few years it will supplant largely if not entirely the use of textbooks". (le cinéma est destiné à révolutionner notre système éducatif et dans quelques années il remplacera en grande partie sinon entièrement l'utilisation des manuels.)

Il note l'ironie de ces prédictions, car les manuels existent toujours et ces technologies n'ont pas radicalement changé la structure fondamentale de l'éducation.

Le Modèle Bicompartimental de la Pensée (Système 1 et Système 2) :

S'appuyant sur les travaux de Daniel Kahneman dans "Thinking, Fast and Slow", Muller introduit les deux systèmes de pensée : le Système 1 (rapide, intuitif, automatique, basé sur la mémoire à long terme) et le Système 2 (lent, effort, délibéré, capable de traiter des informations nouvelles et complexes).

Citation Clé : "in the book he's talking about our two systems of of thought that we've got two things two kinds of processes going on in our brains at one time the fast processes system one and slow processes system two". (dans le livre, il parle de nos deux systèmes de pensée, que nous avons deux choses, deux types de processus en cours dans notre cerveau en même temps, les processus rapides du système un et les processus lents du système deux.)

Le Système 1 est associé à la mémoire à long terme et permet une reconnaissance rapide des motifs et des situations familières. Le Système 2 est limité en capacité de traitement (environ 4 éléments à la fois dans la mémoire de travail) et demande un effort cognitif.

La Charge Cognitive : Muller décrit la charge cognitive comme la quantité d'effort mental investi dans une tâche. Il la divise en trois catégories :

Charge Cognitive Intrinsèque : La difficulté inhérente à la tâche elle-même, liée à la complexité des nouveaux concepts.

Charge Cognitive Extrinsèque : Les distractions et les obstacles qui détournent l'attention et l'effort cognitif (bruit, siège inconfortable, police illisible, accent).

Charge Cognitive Pertinente (Germane Cognitive Load) : L'effort cognitif utilisé pour traiter l'information, l'intégrer à la mémoire à long terme et développer la compréhension en profondeur.

Citation Clé : "this measure is known as cognitive load or another way of thinking of how much mental effort you are investing in something". (cette mesure est connue sous le nom de charge cognitive ou une autre façon de penser à la quantité d'effort mental que vous investissez dans quelque chose.)

L'Importance de la Mémoire à Long Terme et du "Chunking" :

L'expertise dans un domaine est expliquée par le développement d'une vaste structure de mémoire à long terme qui permet le "chunking" - la capacité de regrouper des informations disparates en une seule unité significative.

Cela réduit la charge cognitive sur le Système 2 et permet de gérer des situations complexes.

Citation Clé : "The more we get experience with things the more we practice the more we interact the more we use system 2 to uh work through problems the more we develop this long-term memory and that long-term memory allows us to chunk the things in our world". (Plus nous acquérons de l'expérience avec les choses, plus nous pratiquons, plus nous interagissons, plus nous utilisons le système 2 pour résoudre des problèmes, plus nous développons cette mémoire à long terme, et cette mémoire à long terme nous permet de "chunker" les choses dans notre monde.)

L'exemple des maîtres d'échecs est utilisé : ils ne sont pas meilleurs pour retenir des positions aléatoires de pièces (qui ne peuvent pas être "chunkées"), mais excellent à retenir des configurations de jeu réelles grâce à leur expérience. Cela réfute l'idée d'une compétence générale de "pensée" ou de "résolution de problèmes" transférable à tous les domaines.

Implications pour l'Éducation : En se basant sur ces concepts, Muller propose plusieurs implications pour une éducation efficace :

Éliminer la Charge Cognitive Extrinsèque :

Minimiser les distractions et optimiser l'environnement d'apprentissage.

Limiter la Charge Cognitive Intrinsèque : Présenter de nouveaux concepts par petites étapes ("bite-sized"), en commençant par où se trouvent les étudiants et en introduisant un nombre limité de nouveautés par leçon.

L'utilisation d'exemples travaillés ("worked examples") et un soutien progressif ("fading out") sont des stratégies efficaces.

Encourager la Pratique Effortée Répétée pour Atteindre la Maîtrise : La pratique délibérée utilisant le Système 2 est essentielle pour construire la mémoire à long terme et automatiser les compétences (passer du Système 2 au Système 1). La maîtrise rend l'information accessible sans effort, libérant ainsi le Système 2 pour des tâches plus complexes.

Augmenter la Charge Pertinente (Germane Load) : Engager activement le Système 2. L'exemple du test de réflexion cognitive imprimé en police illisible montre qu'une difficulté modérée peut forcer le Système 2 à s'activer et à trouver la bonne réponse.

Le Rôle de l'IA dans l'Éducation : Potentiels et Préoccupations : Muller voit un rôle positif pour l'IA dans la fourniture de rétroaction rapide et personnalisée, essentielle pour l'apprentissage des compétences.

Citation Clé : "I think the positive role that I see for AI is that it can provide timely feedback and that's essential when you are learning any skill". (Je pense que le rôle positif que je vois pour l'IA est qu'elle peut fournir une rétroaction rapide, ce qui est essentiel lorsque vous apprenez une compétence.)

Cependant, sa plus grande préoccupation est le potentiel de l'IA à réduire la pratique effortée.

Si l'IA peut faire le travail pour les étudiants (écrire des dissertations, résoudre des problèmes), cela pourrait les empêcher de développer les réseaux de mémoire à long terme nécessaires.

Citation Clé : "the thing that I'm really worried about is how AI has this opportunity to reduce effortful practice". (ce qui m'inquiète vraiment, c'est comment l'IA a cette opportunité de réduire la pratique effortée.)

Il s'inquiète de l'impact sur des compétences comme l'écriture ou le dessin si les étudiants s'appuient sur l'IA pour faire le travail à leur place.

Pourquoi les Révolutions Éducatives n'ont pas eu lieu et pourquoi les gens n'apprennent pas toujours :

Muller suggère que l'échec des révolutions technologiques vient du fait qu'elles se concentrent souvent sur la transmission de l'information, qui n'est pas le principal problème de l'éducation.

L'information est déjà largement disponible (dans les livres, en ligne). Le véritable défi est d'amener les étudiants à s'engager activement et de manière répétée avec cette information.

L'éducation est fondamentalement une activité sociale. Les enseignants jouent un rôle crucial en tant que "entraîneurs personnels" qui motivent, responsabilisent, créent une communauté d'apprenants et encouragent la pratique effortée.

Citation Clé : "Education is it's a social activity you know people care about other people... I think that the tech hype comes from a place of believing that the problem of education is not being able to get the information to the student that's not the problem". (L'éducation est une activité sociale, vous savez, les gens se soucient des autres...

Je pense que l'engouement pour la technologie vient de l'idée que le problème de l'éducation n'est pas de pouvoir transmettre l'information à l'étudiant, ce n'est pas le problème.)

La raison pour laquelle certaines personnes ne retiennent pas des informations de base pourrait être liée à la façon dont nos cerveaux sont conçus pour se concentrer sur la survie et l'interaction sociale plutôt que sur les connaissances théoriques, surtout dans un monde rempli de distractions.

Réponses aux Questions de l'Audience :

Utilisation de l'IA pour les réponses :

Si l'IA est fiable, l'utiliser pour obtenir des réponses peut être plus efficace que de chercher longuement dans les livres. Le temps passé à chercher ne garantit pas nécessairement un meilleur apprentissage si l'engagement cognitif n'est pas pertinent.

Politique Éducative : C'est un domaine difficile à rechercher et à influencer. Il y a des preuves en faveur de l'enseignement directé et de la pratique effortée, mais leur mise en œuvre est complexe.

Art et IA : Il est encourageant que certaines personnes créent de l'art pour le plaisir, mais il s'inquiète toujours de la perte potentielle de développement de compétences si l'IA fait le travail à la place de l'individu.

IA et Système 2 : Il est préoccupé par le fait que l'IA puisse encourager l'utilisation excessive du Système 1 au détriment du Système 2, potentiellement réduisant la curiosité et la capacité à s'attaquer à des problèmes complexes.

Scaling de l'Éducation : On ne peut pas "scaler" un entraîneur personnel ou un plombier.

L'éducation de qualité nécessite un nombre suffisant d'enseignants qualifiés. C'est un problème structurel qui nécessite plus de ressources pour l'enseignement et la formation.

Intégration de l'IA : L'IA peut être utilisée comme un outil de "drill and practice" et de feedback rapide. Le danger est quand elle remplace le travail efforté essentiel à l'apprentissage.

Évaluation avec l'IA : L'IA pose un défi majeur pour l'évaluation.

Il suggère de modifier les méthodes d'évaluation, potentiellement en faisant les devoirs sous surveillance ou en intégrant plus de questions d'évaluation fréquentes et actives pendant les leçons.

Il insiste sur le fait que la pratique doit être intégrée au processus d'apprentissage, et si les étudiants ne pratiquent pas via les devoirs, cela se verra dans les examens.

Éducation en Ligne vs en Personne : L'éducation en ligne peut exceller dans l'edutainment et l'excitation, mais elle ne remplace pas nécessairement la pratique effortée guidée par un enseignant dans un cadre social.

L'apprentissage en ligne attire ceux qui sont déjà motivés ("self-select").

Interaction Sociale avec l'IA : La question de savoir si une interaction avec une IA très réaliste pourrait compter comme une interaction sociale est posée, potentiellement répliquant les bénéfices d'un tutorat individuel.

En résumé, le discours de Derek Muller soutient que l'IA, comme les technologies précédentes, ne révolutionnera pas l'éducation dans le sens d'une transformation structurelle fondamentale.

L'apprentissage efficace repose sur la pratique effortée utilisant les ressources limitées du Système 2 pour construire une mémoire à long terme riche et permettre l'automatisation (Système 1).

L'éducation est intrinsèquement sociale, nécessitant des enseignants pour motiver et guider.

Si l'IA peut être un outil précieux pour la rétroaction et la pratique dirigée, son plus grand danger réside dans sa capacité à permettre aux étudiants d'éviter le travail difficile nécessaire à l'apprentissage profond.

Le principal défi pour l'éducation à l'ère de l'IA est de trouver comment obliger les étudiants à s'engager dans cette pratique effortée, même lorsque la technologie peut offrir un raccourci.

Un agonista parcial es un tipo de fármaco que se une a un receptor (en este caso, a un receptor opioide) y lo activa, pero no logra generar la respuesta máxima posible, incluso cuando se administra en una dosis muy alta.

I found this poem incredibly sad and dramatic (probably as an animal lover). Essentially, it is a tale describing how smart and routine the hare is, until one day a hunter comes with dogs and the hare must act fast and flee to survive

Esta es justamente la fortaleza de Smalltalk, pues no dependemos de cómo se convertirá el texto es un sistema de computo, sino que ese cambio lo realizamos nosotros. Nosotros mismo y hasta donde queremos llegar es el límite que tenemos para nuestros trabajos. Así como es un reto para el usuario, abre una gran oportunidad.

Es curioso como decidió irse por objetos en vez de mensajes, pero tiene muchísimo más sentido. Solo lo refuerza si lo pensamos con los operadores boléanos, que son conjuntos que se basan en el mensaje. Se resume en seleccionar que menajes quieres y/o excluyes, los objetos en este caso, como dice, quedan como idea menor.

Aquí definimos un poco el como nos comunicamos con la máquina. El lenguaje nos da la posibilidad de "permitir" que un mensaje se dañe y no afecte todo el organismo, así como también es nuestra responsabilidad ser claros y marcar estas diferencias de qué estoy pidiendo y cómo quiero que lo implemente. Entender esta lógica en cómo podemos interactuar con la máquina es lo único que nos puede limitar que podemos hacer con esta Programación Orientada a Objetos, al ser tan flexible.

Lo valioso de esto es que ya no limitamos el mensaje en si mismo, sino que lo expandimos y lo pones en un rol donde, por si mismo, al ser un objeto, se comunica e interactúa con otros y consigo mismo de forma autónoma; este saber sobre su propio estado es una herramienta que debemos entender y saber aprovechar, pues, siguiendo la metáfora que hemos seguido con nuestra moderadora, una célula está en ese habitad de relacionen entre otras y ella misma, pero no define la integridad de todo el organismo. Los objetos y los mensajes funcionan por sí mismos, pero se comunican con los demás, sin dejar de saber su propio estado.

Lo valioso de esto es que ya no limitamos el mensaje en si mismo, sino que lo expandimos y lo pones en un rol donde, por si mismo, al ser un objeto, se comunica e interactúa con otros y consigo mismo de forma autónoma; este saber sobre su propio estado es una herramienta que debemos entender y saber aprovechar, pues, siguiendo la metáfora que hemos seguido con nuestra moderadora, una célula está en ese habitad de relacionen entre otras y ella misma, pero no define la integridad de todo el organismo. Los objetos y los mensajes funcionan por sí mismos, pero se comunican con los demás, sin dejar de saber su propio estado.

Considero que también lo podemos pensar desde nuestra área de Ciencia de la Información con la pirámide de datos, información, conocimientos y sabiduría; lo que difiere es entender la metáfora que nos explica Anjana Vakil, donde si bien hay una "jerarquía" entre lo que es un célula, a un órgano, al cuerpo; cada objeto se vuelve un todo para sí mismo, y funciona con otros como tal. En nuestra pirámide es bueno comenzar a entender el dato como el objeto, como el dato y no solo como el medio para subir la pirámide.

Como vimos en las charlas de Anjana Vakil, se puso desde metáforas/marco biológico y matemático como entendemos la computación, o cómo puede entenderse.

"Janneke Adema (she/her) is a cultural and media theorist working in the fields of (book) publishing and digital culture. She is an Associate Professor in Digital Media at the Centre for Postdigital Cultures (Coventry University) where she convenes the Post-Publishing research strand. In her research she explores the future of scholarly communications and experimental forms of knowledge production, where her work incorporates processual and performative publishing, radical open access, post-publishing, scholarly poethics, media studies, book history, cultural studies, and critical theory. She explore these issues in depth in her various publications, but also by supporting a variety of scholar-led, not-for-profit publishing projects, including the Radical Open Access Collective, Open Humanities Press, ScholarLed, Post Office Press (POP) and Copim. She is a Co-Investigator on the Research England and Arcadia funded Open Book Futures project." Para entender un poco más el contexto e quien es ella y sus publicaciones visitar Monoskop.org.

"Janneke Adema (she/her) is a cultural and media theorist working in the fields of (book) publishing and digital culture. She is an Associate Professor in Digital Media at the Centre for Postdigital Cultures (Coventry University) where she convenes the Post-Publishing research strand. In her research she explores the future of scholarly communications and experimental forms of knowledge production, where her work incorporates processual and performative publishing, radical open access, post-publishing, scholarly poethics, media studies, book history, cultural studies, and critical theory. She explore these issues in depth in her various publications, but also by supporting a variety of scholar-led, not-for-profit publishing projects, including the Radical Open Access Collective, Open Humanities Press, ScholarLed, Post Office Press (POP) and Copim. She is a Co-Investigator on the Research England and Arcadia funded Open Book Futures project." Para entender un poco más el contexto e quien es ella y sus publicaciones visitar Monoskop.org.

Esta es justamente la fortaleza de Smalltalk, pues no dependemos de cómo se convertirá el texto es un sistema de computo, sino que ese cambio lo realizamos nosotros. Nosotros mismo y hasta donde queremos llegar es el límite que tenemos para nuestros trabajos. Así como es un reto para el usuario, abre una gran oportunidad.

Es curioso como decidió irse por objetos en vez de mensajes, pero tiene muchísimo más sentido. Solo lo refuerza si lo pensamos con los operadores boléanos, que son conjuntos que se basan en el mensaje. Se resume en seleccionar que menajes quieres y/o excluyes, los objetos en este caso, como dice, quedan como idea menor.

Aquí definimos un poco el como nos comunicamos con la máquina. El lenguaje nos da la posibilidad de "permitir" que un mensaje se dañe y no afecte todo el organismo, así como también es nuestra responsabilidad ser claros y marcar estas diferencias de qué estoy pidiendo y cómo quiero que lo implemente. Entender esta lógica en cómo podemos interactuar con la máquina es lo único que nos puede limitar que podemos hacer con esta Programación Orientada a Objetos, al ser tan flexible.

Lo valioso de esto es que ya no limitamos el mensaje en si mismo, sino que lo expandimos y lo pones en un rol donde, por si mismo, al ser un objeto, se comunica e interactúa con otros y consigo mismo de forma autónoma; este saber sobre su propio estado es una herramienta que debemos entender y saber aprovechar, pues, siguiendo la metáfora que hemos seguido con nuestra moderadora, una célula está en ese habitad de relacionen entre otras y ella misma, pero no define la integridad de todo el organismo. Los objetos y los mensajes funcionan por sí mismos, pero se comunican con los demás, sin dejar de saber su propio estado.

This writing uncovered the universal and previously unspoken unhappiness of numerous American housewives, women who believed their frustration and yearning for something beyond domesticity were unique to them. The sameness of experience revealed by the author's writing brought tremendous relief to these women, muzzling their sense of aloneness and affirming their hope for a better existence.